α-淀粉酶活性的测定
所需材料
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标签归档：测定
使用点击化学测定细胞增殖和 DNA 复制
使用点击化学测定细胞增殖和 DNA 复制
细胞增殖测定广泛应用于细胞毒性研究、癌症研究和细胞生物学的许多其他领域。其中许多可以通过荧光标记对增殖细胞进行可视化，并且适合高通量筛选。
检测复制的 DNA 可以说是检测增殖的最直接方法。这是通过使用溴脱氧尿苷 (BrdU)核苷实现的，该核苷在复制过程中融入 DNA。然后，细胞 DNA 中的这些核苷修饰可以通过抗 BrdU 抗体检测到。尽管具有特异性，但这种测定方法繁琐且难以重现，因为需要用刺激性试剂处理细胞，以使 DNA 暴露于抗体，否则这些抗体不会穿透细胞结构。
一种更温和的替代方案是乙炔基脱氧尿苷 (EdU)，可以通过将其添加到培养基中或注射到动物体内来将其递送至细胞。掺入 DNA 后，该核苷可在铜 (I) 催化下与各种荧光染料叠氮化物结合，从而对复制的 DNA 进行荧光染色。该测定易于执行、快速且可重复。它不需要对细胞进行严酷的处理（只需要用 Triton 进行透化），因此可以更好地保存细胞结构。在用叠氮化染料处理和最后的洗涤步骤（步骤 8）后，可以使用具有各种发射波长的荧光团（例如 Hoechst、DAPI或荧光标记抗体）来标记细胞。
所需试剂
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5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 (EdU)
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铜 (II)-BTTAA 络合物— сlick сhemistry 催化剂
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抗坏血酸— 铜的还原剂
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叠氮化物荧光染料
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DMSO，标签级— 叠氮化物溶剂
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Triton X-100（或 Tween-20）
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PBS，pH 7.4
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100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4
协议
确切的方案取决于特定的细胞或组织类型，但一般工作流程如下所述：
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将细胞/组织与 10–20 μM EdU 孵育所需的时间。
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用含 3.7% 甲醛的 PBS 固定细胞 15 分钟。
-
用 PBS 清洗细胞。
-
用含有 0.2% Triton X-100（或 0.5% Tween-20）的 PBS 透化细胞 30 分钟。
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再次用 PBS 清洗细胞。
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在 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4（对于磺化叠氮化物）或 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4（含 50% DMSO）中制备含有 2 mM 铜 (II)-BTTAA 复合物、10 mM 抗坏血酸和 5 μM 叠氮化染料的混合物（对于非磺化叠氮化物）。该混合物应新鲜制备，因为铜 (I) 在水溶液中不稳定。
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将细胞与点击反应混合物一起孵育 30 分钟。
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用 PBS 清洗细胞。
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（可选）如果细胞必须用不同的荧光团标记，请使用标准方案继续染色。
磺化（水溶性）叠氮化物，例如磺基氰叠氮化物和 AF 叠氮化物，可产生最佳效果。当使用非磺化叠氮化物（例如氰叠氮化物或 BDP 叠氮化物）时，确保反应混合物中 DMSO 浓度为 50%。
胱天蛋白酶家族荧光测定试剂盒TBS2055
胱天蛋白酶家族荧光测定试剂盒
简要描述：胱天蛋白酶家族荧光测定试剂盒（Caspase-Family Fluorometric Assay Kit）细胞凋亡在许多正常生物过程以及几种疾病状态中起着重要作用。细胞凋亡可以由各种刺激诱导，这些刺激都产生相同的最终结果:系统和有序的细胞死亡。炎症小体是一个大的多蛋白复合物，其组装导致caspase-1的激活，caspase-1促进促炎细胞因子白介素-1β（IL-1β）和IL-18的成熟。
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | 其他品牌 | 货号 | TBS2055 |
|---|---|---|---|
| 供货周期 | 一个月 |
胱天蛋白酶家族荧光测定试剂盒（Caspase-Family Fluorometric Assay Kit）
贮藏条件
胱天蛋白酶家族荧光测定试剂盒（Caspase-Family Fluorometric Assay Kit）
哪些因素可能会影响到高锰酸盐指数的测定
哪些因素可能会影响到高锰酸盐指数的测定
高锰酸盐指数是反映水体中有机和无机可氧化物质污染的常用指标，定义为：高锰酸盐指数是反映水体中有机和无机可氧化物质污染的常用指标，定义为：在一定条件下，用高锰酸钾氧化水样中的某些有机物及无机还原性物质，由消耗的高锰酸钾量计算相当的氧量。
高锰酸盐指数在测定时必须严格遵守操作规定，使监测结果具有准确性、可比性。在实际工作中，通过对已知浓度的环境标准样品进行测定，发现影响高锰酸盐指数准确性的重要因素有：水浴加热时间、滴定时间、空白值(蒸镏水存放时间)、高锰酸钾溶液浓度、样品酸度等。
1、水浴加热的时间影响
高锰酸盐指数测定值随水浴加热时间的延长而增大,在(30±2)min 的范围内符合不确定度的要求，加热时间30min 的测定接近真值。因此在日常监测时，应尽量使加热时间统一为30min，这样可以提高数据的准确度。
2、滴定时间的影响
从沸水浴中取出锥形瓶时的温度可达93℃，但加入草酸钠温度下降了16℃；滴定过程只用了1min, 温度却又下降了11℃，达到66℃。与反应温度下限只差6℃；滴定结束后在放置3min，温度降至60℃。由此可见，滴定过程必须自加热结束起快速进行，争取在3min 内结束滴定，不能超过6 min。
3、蒸馏水空白值的影响
标样测定值随着空白值的增大而增大，当空白值为0.60 mg/ L (即蒸馏水存放时间为5 天)时,测定结果已接近不确定度的上限,而空白值超过0.85 mg/ L (即蒸馏水存放时间超过10 天)时,测定结果已超出不确定度的上限。因此，在测定高锰酸盐指数时，不要使用存放时间超过5 天的蒸馏水，最好取用新鲜蒸馏水，这样就可以减少空白值对测定结果的影响。
4、高锰酸钾溶液浓度的影响
当K值较小即高锰酸钾溶液浓度过低时，空白消耗量偏大，使测定结果偏低；当K 值较大即高锰酸钾溶液浓度大于0.0100 mol/L时，空白消耗量为0 mL，空白实验无法完成。所以在测定样品前首先要将高锰酸钾溶液浓度调至≤0.0100 mol/L，越接近理论值越好。
5、样品酸度的影响
样品酸度的影响高锰酸盐指数测定是在酸性条件下(加硫酸，使pH<2), 用高锰酸钾将样品中的某些有机物及还原性物质氧化。
只有当在一定的硫酸介质中[H+]为0.5~1 mol/L时,滴定终了时应为0.2~0.5 mol/L 左右，这时高锰酸盐指数测定结果才接近真值。酸度过低，KMnO4 会部分被还原为MnO2 沉淀，酸度过高则会促进H2C2O4 分解。
高锰酸盐指数是地表水、水源水、生活污水中的重要监测项目，也是我国地表水污染程度评价的重要指标之一。结果表明，手动操作测定该指标具有一定相对性，受操作员经验和自身认知判断影响，样品的保存、空白值、酸度、水浴的加热时间、滴定过程、滴定温度等因素一致性难以保证，这会造成数据可靠性与一致性较差。并且人工手动操作时，且每一步的操作过程耗时较长，对实验员操作要求较高。
6、所取水样体积
本标准测定范围较低，为 0.5~4.5 mg/L，只适合清洁水质的测定；对污染较重的水，可少取水样，经适当稀释后测定。由试验结果可知，取样量过小，氧化剂相对比较大，使测定结果偏高；取样量过大时，消耗了一定的氧化剂后，使溶液的氧化能力减弱，导致测定结果偏低。所取水样体积要求在回滴过量的Na2C2O4 标准溶液时所消耗 KMnO4 溶液的体积最好在 4~6 mL 左右，如果消耗体积过大或者过小，需重新再取适量水样测定。
7、滴定过程
高锰酸钾法滴定过程需要把握好试样的温度、滴定速度和时间以及终点观察。
8、滴定温度
高锰酸钾对草酸钠进行氧化主要是一个吸热反应的过程，温度越高，反应的速度也会加快。用高锰酸钾滴定剩余的草酸钠时，滴定温度要求在 60~80 ℃之间。当反应温度超过 90 ℃ 时，草酸钠容易分解: 2H+ +C2O24- = CO2↑+CO↑+H2O，使溶液呈现茶色，应在从沸水浴中取出后将溶液稍微放置，再加入草酸钠；当反应温度低于 60 ℃时，高锰酸钾与草酸钠的反应速度缓慢，则会影响氧化反应的程度。
9、滴定速度
滴定过程应采用慢-快-慢的滴定速度，一开始不易过快，否则高锰酸钾溶液会发生部分分解，影响结果准确性。滴定时间应控制在 2 min 内完成，时间过长会使试样温度下降，使测定结果偏高。
10、终点观察
当滴定反应进行到终点时，稍过量的 MnO4-都可使水样呈现淡淡的粉红色，但由于颜色很淡，很容易滴加过量导致结果偏高。根据试验实际操作经验，在滴定时可以把锥形瓶置于白纸上或自制的带有凹槽的泡沫板中，这样更容易观察到滴定终点颜色变化。滴定终点应为粉红色，并保持30s不褪色。
人类干细胞测定试剂盒概述
人类干细胞测定试剂盒概述
概述
为扩展CD34开发了干细胞-细胞-细胞-细胞-细胞分析试剂盒。 + 细胞及其分化电位作为菌落形成单位(CFU)的评价用标准化的流式细胞读取。
详细产品信息
背景资料
干细胞HSCCU分析试剂盒为造血干细胞和祖细胞的分析提供了一种高度标准化的方法。该工具包将无甲基纤维素细胞培养中的分化与标准化的、基于流细胞的读数相结合,并在显微镜下消除了对用户依赖性、视觉评分的需求。
对于采用流式细胞仪读取的菌落识别,我们提供了一个分析表和一个门控模板。这些分析工具被优化为Mac版本及以上的Mac软件版本。若要接收这些分析工具,请联系当地的技术支持。
应用程序
CD34的特性 + 细胞的分化电位由CFU
计量GFP修饰单元的备选办法
技术规格
工作流程使用干细胞HSCCU测定试剂盒。 HSCS,稀释在斯泰玛斯HSCC-FU分析介质中,被电镀在96井板。细胞增殖和分化14天后,用细胞流式细胞仪对生成的菌落进行染色。
TribioScience β-己糖胺苷酶活性测定TBS2105
TribioScience β-己糖胺苷酶活性测定
简要描述：TribioScience 是一家私人控股的生物技术公司，由斯坦福大学的一群科学家于 2010 年创立。快速ELISA法测定CAR-T治疗诱导的细胞因子。TribioScience β-己糖胺苷酶活性测定
详细介绍
产品咨询
| 品牌 | 其他品牌 | 供货周期 | 一个月 |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合 |
TribioScience β-己糖胺苷酶活性测定
TribioScience 是一家私人控股的生物技术公司，由斯坦福大学的一群科学家于 2010 年创立。我们的使命是让科学家在实验室的工作更轻松、更省时。我们专注于为分子生物学、生物化学、免疫学、传染病、基因治疗、神经科学、动物实验和药物开发领域的生命科学研究实验室和生物技术公司提供高质量的产品。我们的团队成员拥有超过 50 年的综合经验，我们以开发基于 FAST （灵活、 准确、简单、快速）的产品而自豪 省时）技术范式。我们还作为 CRO（研究合同组织）为生物技术行业和学术界提供服务。我们的动物建模服务已被用于 高排名大学的动物模型开发和体内评估。
描述
β-己糖胺酸酶是负责碳水化合物分解的水解酶。具体来说，β-己糖胺苷酶从粘多糖链的非还原末端切割末端β-D-葡萄糖醛酸残基。在人类中，这些酶存在于许多组织类型的溶酶体中。β-己糖胺苷酶活性的丧失会导致代谢疾病和健康问题。检测测试样品中的β-己糖胺苷酶活性以进行疾病检查很重要。
β-己糖胺苷酶活性比色测定法提供了一种简单灵敏的方法，用于监测生物样品（组织、细胞、血清、尿液）中的己糖胺苷酶活性。该测定使用合成的对硝基苯酚衍生物（R-pNP）作为其底物并释放 pNP，可以在吸光度（OD 405nm）下测量。该测定法可以检测各种样品中低至 50 μU 的 NAGase 活性。
应用：
该试剂盒用于测定生物样品中的己糖胺苷酶活性。
主要特点：
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快速灵敏： 线性检测范围（20 μL 样品）：在 37°C 下反应 30 分钟，为 0.05 至 50 U/L。
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高吞吐量： 可以在 HTS 液体处理系统上轻松实现自动化，每天处理数千个样品。
储存条件：
该套件在冰上运输。将所有组件储存在-20°C的非无霜冰箱中。收到后保质期为12个月。
制备
标准曲线
上海金畔生物科技有限公司，1.国内试剂耗材经销代理2.国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。3。提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。4.进出口货物代理服务。5.公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌：gendepot，GeminiBio，mtc-usa（MicroSolv Technology Corporation），OZ BIOSCIENCES，BOCSciences，sefimedical，techinstro，Acanthus Research Inc，Tempshield，SPEED Biosystems，Caprico Biotechnologies, Inc. (CBI)，proteoform，Tulip，Torrey Pines Biolabs，Medicago，paratechs，Magsphere，fabGennix，alphananote，cstti，Wasatch Photonics，Ancell immunology research products，CWE，Oraflow Inc，NOVOCIB，Nanoprobers，clickchemistrytools，Ambeed，CELL DATA，It4ip，Nanocs，Alamanda polymers等等。质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式。
TribioScience β-己糖胺苷酶活性测定
测定总氮的几个注意事项
测定总氮的几个注意事项
总氮检测数据不准确，检测数据误差大等问题的频频发生，导致实验结果不尽人意，今天小编就来给大家说说总氮检测应注意事项及总氮快速检测方法和解决方案。
一、药剂空白高的问题：
造成药剂空白高主要原因是过硫酸钾纯度不够。空白高于0.030 ，就需要提纯过硫酸钾。提纯方法就是二次结晶过硫酸钾：
1.(可以同时做两份)在1L的大烧杯中加入约800mL水，50 摄氏度的水浴锅上加热(水浴锅的温度要用温度计检测下是不是正常，以免超过60摄氏度。过硫酸钾在60 摄氏度以上会分解)。我的经验是先加入90 克过硫酸钾，用一滤纸盖在上面(避免污染)，溶解速度慢， 可以边做别的事边提纯，有空就去搅拌几下，全部溶解之后(速度较慢)。用勺子逐渐向烧杯中加入过硫酸钾，一次不要加太多，溶了再加，直至不管怎样搅拌，隔了近一小时多都不能溶解为止(刚好有一丁点儿不能溶解)，这个过程挺漫长。
2.把*溶解的饱和溶液放在室温中自然冷却，用一干净的塑料袋包住烧杯口， 并用皮筋扎紧，再放进冰箱里(调到低温度)，放置一晚上，重结晶。建议同时用一个1L 的广口瓶放一瓶无氨水在冰箱里冷藏(用于冲洗用)。
3.重结晶一夜后，第二天早上拿出来立即倒掉上清液，重结晶的晶体会结成一块沉在瓶底，但其实结构很松散，用钢勺什么的弄两下就离散开了，然后再清洗：用冰好的无氨水清洗几遍，尽量不要让下面的结晶流失。
4.二次结晶：清洗后的烧杯里只剩下下面的结晶，向烧杯中加入约400ML 的无氨水，搅拌溶解，这次跟次结晶不同的是向烧杯中慢慢地加入无氨水，一开始可以一次稍多点水 (看结晶的多少)，剩下不多时要等久些，加的水也要少，直到有一丁点儿结晶不能溶解为止。
5.然后重复第2步骤(二次结晶)、第3步骤(清洗)。
6.清洗后倒掉上清液，把结晶移入一250ML的烧杯中，然后放入50摄氏度烘箱烘干即可 (烘箱里的温度要用温度计检测是否正常)。烘干箱里不要放入其它物品，以免再次污染。 烘干时间较长，(我的烘了二天三夜)可以晚上放烘干箱里烘，白天放在50 度水浴锅上蒸干一定。*烘干后的药品跟原来的药品一样松散干燥，搅动会发出清脆的声音。
7 .烘干后的药品从烘箱里拿出要放在干燥器里冷却一小时以上。冷却后用干净的聚乙烯瓶装好盖紧。
8.实验过程中加碱性过硫酸钾的时候一定要避免加在瓶口处。
二、总氮取水体积：
因为碱性过硫酸钾消解紫外分光光度法测定总氮取水样量为10ML时，测定范围为0.20mg/l7.00mg/l。总氮高于7 mg/l时要适当减少取水样量。如果取5ML水样再稀释至10ML 进行测定的话，高检出限是14 mg/l。当总氮高于14 mg/l 时取水量就要再减少进行测定。我一般是取2ML水样进行测定。出水总氮低时可以取5ML水样进行测定。 吸取水样时要取静止一定时间后的上清液。
三、要用新鲜的无氨水：
整个总氮的测定过程中所用的无氨水，包括加药前稀释至10ML 用的无氨水，消解后加的无氨水，以及测定吸光值时参比样用的无氨水，都必须使用同一瓶水。 以免不同无氨水不同带来的误差。
四、密封事项：
比色管盖子用生料带缠好，这样密封性更好，防止氨氮跑出。 生料带对药剂没影响不会影响结果。但缠在盖子上的生料带要保持完好无损，以免碎屑掉入比色管内，影响吸光值，从而影响化验结果。比色管盖子一定要塞紧，然后用纱布和绳子扎紧。扎好后把纱布边沿往下拔， 使纱布紧密包住盖子。
五、灭菌锅的温度灭菌锅的温度设定为125度，消解时间设定为1小时。
六、趁热拿出消解结束后，待灭菌锅压力降为0 后，马上打开放气阀放气，放气后马上打开灭菌锅盖，立即拿出装比色管的烧杯，把总氮的比色管(压住总氮比色管的盖子)趁热多次摇匀，放回烧杯中，自然冷却。
七、加入1+1盐酸后，10分钟之后测定吸光值(只要是10 分钟后就行，时间长些不要紧，但要避免污染。)。分光光度计要预热30分钟以上，测定总氮的吸光值时，要先测220 波长的吸光值，全部测完了再测275波长的吸光值。
点击化学的应用——测定细胞增殖和 DNA 复制
点击化学的应用——测定细胞增殖和 DNA 复制
细胞增殖测定广泛应用于细胞毒性研究、癌症研究和细胞生物学的许多其他领域。其中许多可以通过荧光标记对增殖细胞进行可视化，并且适合高通量筛选。
检测复制的 DNA 可以说是检测增殖的最直接方法。这是通过使用溴脱氧尿苷 (BrdU)核苷实现的，该核苷在复制过程中融入 DNA。然后，细胞 DNA 中的这些核苷修饰可以通过抗 BrdU 抗体检测到。尽管具有特异性，但这种测定方法繁琐且难以重现，因为需要用刺激性试剂处理细胞，以使 DNA 暴露于抗体，否则这些抗体不会穿透细胞结构。
一种更温和的替代方案是乙炔基脱氧尿苷 (EdU)，可以通过将其添加到培养基中或注射到动物体内来将其递送至细胞。掺入 DNA 后，该核苷可在铜 (I) 催化下与各种荧光染料叠氮化物结合，从而对复制的 DNA 进行荧光染色。该测定易于执行、快速且可重复。它不需要对细胞进行严酷的处理（只需要用 Triton 进行透化），因此可以更好地保存细胞结构。在用叠氮化染料处理和最后的洗涤步骤（步骤 8）后，可以使用具有各种发射波长的荧光团（例如 Hoechst、DAPI 或荧光标记抗体）来标记细胞。
所需试剂
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5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 (EdU)
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Cu-TBTA 络合物— сlick сhemistry 催化剂
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抗坏血酸— 铜的还原剂
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叠氮化物荧光染料
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DMSO，标签级— 叠氮化物溶剂
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Triton X-100（或 Tween-20）
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PBS，pH 7.4
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100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4
确切的方案取决于特定的细胞或组织类型，但一般工作流程如下所述：
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将细胞/组织与 10–20 μM EdU 孵育所需的时间。
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用含 3.7% 甲醛的 PBS 固定细胞 15 分钟。
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用 PBS 清洗细胞。
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用含有 0.2% Triton X-100（或 0.5% Tween-20）的 PBS 透化细胞 30 分钟。
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再次用 PBS 清洗细胞。
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在 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4（对于磺化叠氮化物）或 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4，含有 50% DMSO（对于非-磺化叠氮化物）。该混合物应新鲜制备，因为铜 (I) 在水溶液中不稳定。
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将细胞与点击反应混合物一起孵育 30 分钟。
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用 PBS 清洗细胞。
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（可选）如果细胞必须用不同的荧光团标记，请使用标准方案继续染色。
磺化（水溶性）叠氮化物，例如磺基氰叠氮化物和 AF 叠氮化物，可产生最佳效果。当使用非磺化叠氮化物（例如氰叠氮化物或 BDP 叠氮化物）时，确保反应混合物中 DMSO 浓度为 50%。
EMSA/凝胶转移测定
EMSA/凝胶转移测定
EMSA（电泳迁移率变动测定）用于研究蛋白质：DNA 复合物和相互作用。蛋白质：DNA 复合物在非变性凝胶上比未结合的线性 DNA 迁移得更慢，从而导致“移位”。
EMSA 也称为“凝胶位移”或“凝胶阻滞”测定，可用于分析蛋白质对核酸的序列特异性识别。
图 1. EMSA/凝胶位移测定图。当添加摩尔过量的未标记竞争DNA时，迁移率变化会大大降低。荧光标记的 IRDye 700 寡核苷酸探针用于检测。 IRDye 700 寡核苷酸在两条链上均进行末端标记。
近红外荧光的优点
近红外荧光 EMSA 为放射性 EMSA 技术提供了安全、灵敏的替代方案。
您可以轻松地将传统的放射性 EMSA 协议应用于无害的近红外荧光 EMSA 检测。使用 IRDye ®末端标记的寡核苷酸并使用 Odyssey ® CLx 红外成像仪或 Odyssey 经典红外成像仪进行成像。使用近红外荧光，您可以在不到 2 小时内进行测定并获得结果，而使用其他方法则需要几个小时或过夜。
使用近红外荧光技术的 EMSA 用于研究：
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转录调控
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DNA复制
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DNA修复
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RNA加工
图 2.EMSA/凝胶位移测定。 IRDye 700 EMSA 使用共有寡核苷酸针对 3 个不同的转录因子靶点进行测试。箭头表示移动性转变的位置。
您可以检测湿凝胶中的蛋白质：DNA 复合物，无需凝胶干燥或胶片曝光。如果需要，您可以在 Odyssey 扫描仪表面上对盒中的凝胶进行成像，以评估凝胶是否运行了足够长的时间，如果没有，请将其放回腔室中以进一步进行电泳。
即用型标记寡核苷酸 可用于各种常见的共有序列。其他 IRDye 末端标记寡核苷酸和定制寡核苷酸可通过Integrated DNA Technologies (IDT)、TriLink BioTechnologies或Metabion International AG 获得。
图 3. 使用 IRDye 700 AP-1 寡核苷酸双链体的 AP-1 EMSA。用血清处理的 HeLa 细胞的核提取物用于观察血清刺激后 AP-1 结合增加的情况。竞争反应含有 100 倍摩尔过量的未标记寡聚双链体。箭头表示荧光寡核苷酸的迁移率变化。星号表示由于过量未标记的竞争对手 DNA 引起的迁移率变化的减少。使用 Odyssey Classic 红外成像仪对湿凝胶进行成像。
红外荧光EMSA与其他方法的比较
比较 EMSA 检测方法，了解如何使用红外检测提高安全性并节省时间。
| IRDye ®红外荧光染料 | 放射性同位素 | 生物素/链霉亲和素（例如 Thermo Scientific LightShift） |
|---|---|---|
| 总时间： 1.5小时 | 总时间： 4.5 – 24 小时 | 总时间： 4.5 – 5 小时 |
| 轻松获取和处置 | 监管限制、处置麻烦和成本 | 联系制造商了解详情 |
| 荧光寡核苷酸具有更长的稳定性 | 标记寡核苷酸的半衰期短 | 化学发光信号不稳定 |
| 无危险 | 危险的 | 联系制造商了解详情 |
| 湿凝胶成像，无需移除凝胶板 | 需要凝胶干燥和胶片/荧光屏曝光 | 需要进行膜转移 |
| 快速、方便、直接检测 | 耗时、检测不方便 | 间接检测方法。需要封闭、链霉亲和素孵育和洗涤 |
| 如果需要，可以更换凝胶并延长运行时间 | 凝胶运行时间无法延长 | 凝胶运行时间无法延长 |
| 不到 2 小时即可得出结果 | 通常要到第二天才能获得结果 | 检测步骤使协议增加了几个小时 |
典型 EMSA 工作流程
准备反应并孵育20-30日 分钟
通过非变性电泳分离
使用 Odyssey Imager 进行图像凝胶并分析
*如果需要，请重复步骤 3 并再次成像。
β-氨基己糖苷酶活性测定试剂介绍
β-氨基己糖苷酶活性测定试剂介绍
β-己糖胺酶是负责碳水化合物分解的水解酶。具体而言，β-己糖胺酶将末端 β-D-葡萄糖醛酸残基从粘多糖链的非还原末端裂解。在人类中，这些酶存在于许多组织类型的溶酶体中。 β-己糖胺酶活性的丧失会导致代谢疾病和健康问题。检测受检样品中的β-己糖胺酶活性对于疾病检查具有重要意义。
β-己糖胺酶活性比色测定提供了一种简单而灵敏的方法来监测生物样品（组织、细胞、血清、尿液）中的己糖胺酶活性。该测定使用合成的对硝基苯酚衍生物 (R- p NP) 作为底物并释放p NP，可在吸光度 (OD 405 nm) 处进行测量。该测定可以检测各种样品中低至 50 µU 的 NAGase 活性。
应用：
该试剂盒用于测定生物样品中己糖胺酶的活性。
主要特征：
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快速、灵敏： 线性检测范围（20 µL 样品）：37°C 反应 30 分钟，检测范围为 0.05 至 50 U/L。
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高通量： 可以在 HTS 液体处理系统上轻松实现自动化，每天处理数千个样品。
储存条件：
该套件在冰上运输。将所有组件储存在-20℃的无霜冰箱中。收到后保质期为12个月。
准备
标准曲线
荧光寿命的测定
荧光寿命的测定
荧光寿命的测定
吸收光后，分子在释放吸收的能量之前保持一定时间的电子激发态。在这里，不同的光化学过程以不同的概率相互竞争。除了无辐射失活外，还可以发射光，例如以荧光的形式。
之后激发分子数（n1）已降至1/e的系数（约37%），称为荧光寿命（τ佛罗里达州):
n1（t） = n1（0） e（- t / τ佛罗里达州)
有机染料的衰减行为可以用来识别它。然而，荧光寿命(荧光衰减时间)不是一个固定的量，而是受染料所处环境即溶剂和温度的影响。
ATTO染料 的荧光寿命通常在纳秒范围内（10 -9秒）。对于我们的目录，使用下述“时间相关单光子计数”方法确定 22 °C 水溶液（PBS，pH 7.4）中羧基衍生物的值。为此使用了来自HORIBA Jobin Yvon的使用寿命测量设备TemPro 。
时间相关单光子计数 （TCSPC）
激发后荧光光子的发射是一个统计过程。因此，单个分子保持激发态的持续时间也是一个统计量。然而，如果我们观察许多相同分子的集合，我们会得到一个定义明确的衰变统计量。
在当今常用的荧光寿命测量方法TCSPC方法中，这些统计数据的时间分辨非常好 – 低至皮秒范围（10-12 s） – 并以高检测灵敏度进行测量。为此，用周期性的极短光脉冲照射样品。激发后，样品发射荧光光子。测量第一个光子到达探测器之前的确切时间量。这些单个事件被计数，即作为“计数”输入直方图。随着这种单个实验的非常频繁的重复，最终通过加计数来获得样品衰变曲线的指数过程。
在每个激光脉冲和计数过程之后，必须重置测量电子设备。在此死区时间内无法记录任何光子。因此，以每 100 个激发脉冲仅检测到约 1 个光子的方式选择条件。否则，在较高的速率下，直方图中的短时间会被高估并且衰减曲线会扭曲（“堆积”）。实际上，测量通常以所谓的“时间反转”模式进行，即荧光光子开始时间测量，而由另一个二极管记录的激光脉冲停止时间测量。
在测量染料样品之前，应提供有关染料的以下信息：
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吸收和荧光最大值，例如来自溶液或文献值的吸收和荧光光谱的测量。
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荧光衰减时间的近似数量级，例如根据以前的测量、可比系统的测量或文献值估计。
光谱数据决定了激发光源的选择——如今通常使用强激光或半导体二极管——以及用于发射光谱选择的截止滤光片的选择。应选择此滤光片以防止散射的激发光到达检测器。
除了选择合适的激发光源和合适的边缘滤光片外，还必须遵守其他实验要求：
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样品溶液在激发波长及以上的1cm比色皿中的吸光度应<0.1，以避免重吸收。例如，稀释溶液还可以防止由聚集和浓度缺失引起的问题。
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散射样品溶液会导致评估期间意外缩短寿命的“出现”。例如，可以通过μ过滤样品溶液来避免这种情况。
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通常，透明液体在 1 厘米荧光比色皿中以 90° 排列的方式测量。
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检测时间窗口应足够长（至少 10000 个计数）。
在根据TCSPC原理进行荧光寿命测量的情况下，还需要确保计数率不超过脉冲激发光源重复率的2%。如上所述，这避免了所谓的“堆积”。
为了降低计数率，
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稀释供试品溶液。
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中性玻璃滤光片可以插入激发通道，从而降低激发光的强度。
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可以将波长较长的边缘滤光片插入发射通道，从而减小检测到的荧光的光谱范围。
要将计数率提高到 2%，可以应用反向度量。
在测量荧光衰减时间时，还应测量散射溶液.dem例如0.01%Ludox AS40胶体二氧化硅溶液，以确定仪器功能，即电子器件的响应。这种参考测量的结果可以在以后的数据评估中考虑在内。
通过提供的软件进行数据分析。在这里，测量的数据点由曲线拟合。荧光衰变曲线的理论过程与放射性衰变一样，对应于一阶反应，因此是单指数的。但是，它也可能导致更高的指数曲线，以便更好地拟合测量点。例如，在一个溶液中存在具有不同荧光寿命的不同物种时，可能就是这种情况。
下图说明了一批 阿托 488 卡波西与 天宝装置。可以识别上述参数，例如检测时间窗口（峰计数>10000），使用Ludox溶液的参考测量/提示以及样品的测量。CHISQ = 1.1 且标准差均匀分布的双指数评估结果证明是最佳拟合的。荧光衰减时间 阿托 488 22 °C 水溶液 （PBS， pH 7.4） 中的羧基为 4.1 ns，该样品中的相对比例为 96.78 %。
软件中选择的补偿曲线的质量以及确定的荧光寿命的正确性等由参数χ2 （CHISQ，XSQ）和加权残差。
良好的契合度可以通过以下方式识别：
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χ 2 < 1.2 并且在添加另一个组件时没有显着变化（单指数 -> 双指数等）
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加权残差的均匀分布，标准差
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与以前的测量值或文献值一致
商业设备的供应商提供大量的手册和产品文档，通常详细描述相关设备的正确操作和所提供的软件。通过遵守给出的说明，例如，测量具有已知荧光衰减时间的染料，您将拥有必要的常规和经验来测量所用设备的“正确”寿命
荧光量子产率的测定
荧光量子产率的测定
除了荧光的光谱位置外，荧光量子产率（η fl；英文fluorescence quantum y field，QY）是荧光团的一个重要光学参数。除了消光系数的大小，当染料用作荧光标记时，量子产率的水平特别决定了获得的信号强度：因此在英语用法中，消光系数和量子产率的乘积被称为作为荧光团的“亮度”。
量子产率本质上取决于染料的分子结构，但也受到许多外部因素的影响。这些包括环境的温度、粘度、极性和pH值。这种环境可以由溶剂分子和任何溶剂组成，也可以由例如偶联的生物分子或细胞膜组成，荧光染料位于其附近。通过改变荧光，可以得出有关环境某些特性的结论：可以说，荧光染料充当分子探针。
荧光量子产率定义为以荧光形式发射的光子数（= 光量子）与样品先前吸收的光子数之比：如果所有
吸收的光子都以荧光形式发射，则量子产率为 1 或 100 % 获得。然而，激发态的非辐射失活过程总是与发射竞争，因此部分吸收的能量以热量的形式释放到环境中。
正是这种现象被用于绝对判定通过“量热”方法（例如热开花方法）的量子产率。这需要相对复杂的测试设置以及对测量概念和评估的全面理论理解。
更简单地说，荧光团（样品）的未知量子产率可以通过将其与荧光光谱仪中标准或参考染料（参考）的已知量子产率进行比较来确定。这种所谓的相对确定可以通过不同的方式进行：
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在单次测量中比较样品与参考染料
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在几个单独的测量中将样品与几种参考染料进行比较
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将样品与不同浓度的参考染料进行比较，并对获得的测量值进行后续评估。
结果的统计准确性随着进行的比较测量的次数而增加。
使用相对方法的理论先决条件是要比较的两种溶液，样品和参考，在激发波长下具有相同的吸收，因此吸收相同数量的光子。然后两种溶液在相同条件下记录的积分荧光光谱的商（IF = 荧光带的面积）给出两种染料的量子产率比，这样就可以很容易地计算出未知的量子产率：
记录样品和参考的整个荧光光谱（积分荧光强度）的重要性通过以下示例用这种比较方法进行了说明：染料
ATTO 488羧基和ATTO 430LS羧基在吸收光谱的交叉点被激发（相同的吸收) 和测量的荧光光谱。与标准品（罗丹明 6G）的比较测量导致ATTO 488羧基的荧光量子产率为 80%。使用此值，使用描述的相关方法获得ATTO 430LS的 65% 的值羧基。另一方面，如果您只查看相应荧光最大值处的强度，您只能从ATTO 488羧基的已知 80% 中获得 33% 的ATTO 430LS羧基。这种强烈的差异是由于荧光带的宽度不同，即两种染料的荧光光谱分布不同。 通过使用相同的测量参数，可以从设备端实现用于记录样品和参考荧光光谱的相同条件。这些包括光束路径的几何形状（例如 90° 或正面布置）、检测器放大（增益）、狭缝宽度（或带通）和相同的激发波长。
例如，可以选择样品和参比的长波吸收带的交点作为激发波长。然后，在染料条带的相应最大值处的吸收可能略有不同。
使用示例 阿托 488 羧基和 阿托 532 羧基在各自的吸收最大值处的吸光度值略有不同，这一点变得很清楚：在记录了两种测量溶液的吸收光谱后，可以通过叠加两种光谱来确定两种溶液具有相同吸光度（此处为0.0183）的交点（此处为513.1 nm）。（对于较小的值，吸光度和吸光度相同。
另一方面，如果决定在样品和参考的吸收最大值处激发，则两种溶液在各自波长下必须具有相同的吸收。在所示示例中，ATTO 488羧基可在 500 nm 激发，ATTO 532羧基可在 532 nm 激发；两种溶液的吸光度均为 0.0420。
在这种情况下，必须在荧光测量中对两个激发波长下的不同激发强度进行相应的校正。在现代荧光光谱仪中，这种与波长相关的强度差异由光电二极管确定为标准，同时还测量激发光源随时间的强度波动。此校正必须在测量期间通过设备软件激活，因为此后将无法再进行。
此外，所选测量范围应覆盖整个荧光光谱，即长波边缘的测量强度应几乎降至检测器噪声水平。
即使满足所有这些要求，荧光量子产率的精确测定在实践中也非常苛刻，需要做好充分的准备和仔细的测量。
关于量子产率测量和可能的误差来源的说明
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参比染料必须合适，并且必须足够精确地知道其量子产率。例如，可以通过将其与另一个参考进行比较来确保这一点。
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参比染料的选择方式应使其能够在与样品相同的范围内被吸收，即激发。理想情况下，两个吸收光谱重叠，并且可以在荧光测量期间在两个波段的交叉点激发。
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必须保持所有玻璃器皿和比色皿绝对清洁。
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使用的溶剂应具有“光谱学”规格，并应检查其固有荧光。
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例如，如果由于溶解度的差异而将不同的溶剂用于样品和参比，则必须通过在计算中包括两个折射率n来考虑这一点：
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对于荧光测量，应使用光程长度为 10 mm 的标准荧光比色皿。
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为了减少重吸收效应的发生，10mm电池中的吸光度不应超过0.05。
在较高浓度下，可能会发生所谓的内部滤光片效应，这极大地伪造了荧光测量：
一方面，激发光不再深入溶液，这可能导致比色皿中心的样品激发减少。
另一方面，从那里发出的荧光在离开比色皿之前通过溶液时被光束路径中的其他荧光团部分（重新）吸收。这导致荧光光谱在短波范围内被切断。 -
必须注意确保吸收测量的基线不会因未溶解颗粒或脏比色皿窗口的光散射而失真。
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顺便说一下，这种散射现象也会干扰荧光测量，因为散射光可以到达溶液中颗粒或比色皿表面上的检测器。因此，在测量前应μ过滤所使用的溶剂和溶液，并用不起毛的布从外部擦拭比色皿窗口。注意：指纹！
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荧光测量的测量参数（增益、狭缝宽度）必须适应发生的荧光强度，以便所使用的检测器（例如光电倍增管）不会因过多的光而损坏。测量必须在探测器的线性范围内进行，因为只有这样，测量的光强度才会与照射的光强度成正比。
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人们应该意识到温度对测量结果的影响。
许多制造商现在都包含使用其荧光光谱仪测量荧光量子产率的精确说明和工作说明，也可以从相应网站下载。通常也可以在这里找到有关相应设备设置和测量参数的详细信息和注意事项。正在努力开发荧光标准的方法和程序。我们给出的荧光光谱是用HORIBA Jobin Yvon的
Fluorolog 3荧光光谱仪测得的。为此，ATTO-染料在 22°C 下检查水溶液（PBS，pH 7.4）中的相应羧基衍生物。测量是在标准的 90° 排列中进行的，具有水平的激发和发射极化。为了确定ATTO染料的荧光量子产率，将具有荧光量子产率的荧光团用作参考染料。取决于光谱范围，例如B、使用罗丹明6G、罗丹明630等。
荧光光谱的一般信息
在吸收光谱仪的情况下，几乎只使用双光束装置，其中样品溶液和参比物质（例如带有纯溶剂的比色皿）“同时”扫描。结果，获得的频谱成为所谓的 设备特性 这是由于单色器（光栅、狭缝）和镜子反射的不同透射率，除其他外，对于不同的偏振光和特定的检测器特性。
由于荧光光谱中原则上不存在这种参考光束路径，因此必须以不同的方式校正每个荧光光谱仪的器件特性，具体取决于光学元件和光束路径的路径，这些特性是不同的，以获得样品的“真实”荧光光谱。
在现代荧光光谱仪的情况下，控制和评估软件通常包含所谓的 校正功能，可用于在测量过程中直接或通过用户的后续指令校正被测设备光谱。此校正功能由制造商创建，例如，通过将相关设备测量的发射光谱与校准灯的实际发射光谱进行比较。
除此之外，在每次荧光测量中都应考虑另一种现象。这些是 荧光偏振： 只有当荧光团在激发态的生命周期内能在培养基中自由移动时，才能获得非偏振荧光。在这种情况下，水平和垂直偏振荧光的比例是相同的。
自由迁移率受溶剂的温度相关粘度和分子体积的影响。
在丙酮、甲醇、乙醇和水等低粘度溶剂中，这种极化效应通常只在室温测量中寿命在纳秒范围内的小型有机荧光团中起次要作用。
但是，如果样品和/或参比的荧光由于分子尺寸和/或荧光寿命的强烈不同而不再非偏振甚至不同的偏振，则可能导致测量的荧光光谱伪造，从而导致错误计算的量子产率。
为了确定荧光基团溶液的荧光偏振，有一种相对简单的方法，可以在J. R. Lakowicz中找到其理论推导和解释。
研究与大分子（聚合物、蛋白质、DNA等）偶联的荧光标记物的荧光偏振，其自由迁移率在其激发态的生命周期内受到限制甚至受到抑制，可以与FRET技术相结合，为分子结构（几何形状，距离，方向）和相关动态现象提供重要的见解。
如何进行土壤电导率的测定
如何进行土壤电导率的测定
土壤电导率（soil conductivity）指土壤传导电流的能力，通过测定土壤提取液的电导率来表示。测定结果单位以mS/m（即10μS/cm）表示。当测定结果大于或等于100mS/m（即1000μS/cm）时，保留三位有效数字；当测定结果小于100mS/m时，保留至小数点后一位。
土壤电导率是土壤提取液中的阴离子和阳离子的总和，代表了土壤的含盐量。测定土壤的电导率可以直接反应出土壤混合盐的含量，对于确定各种田间参数时空分布的差异有重大意义，从而也为基于信息和知识的现代精细农业的普及推广打下基础。
原理
国家标准HJ 802-2016《土壤 电导率的测定 电极法》给出了土壤电导率的测定方法，要求取自然风干的土壤样品，以 1:5（m/V）的比例加入水（电导率不高于0.2mS/m，即2μS/cm），在 20℃±1℃的条件下振荡提取，然后用电导率仪测定 25℃±1℃条件下提取液的电导率。需要注意的是，当待测土壤的提取液电导率小于1mS/m（即10μS/cm）时，空气中的二氧化碳和氨对电导率的测定影响较大，在封闭的小空间中进行操作，可消除或降低其干扰。
方法
（1）样品准备
● 按照HJ/ T 166的相关规定采集、制备和保存样品。
（2）标定
● 配置电导率标准溶液或使用市售电导率标准溶液
● 使用电导率标准溶液校正电导率仪
（3）样品制备
● 称取 20.00 g 土壤样品于 250 ml 振荡瓶中，加入 20℃±1℃的 100 ml水，盖上瓶盖，放在往复式水平恒温振荡器上，于 20℃±1℃振荡 30 min。静置 30 min 后，过滤或离心，提取液收集于100 ml 烧杯中，待测。
● 相同的步骤做空白试样
（4）测量
● 用水冲洗电极数次，再用待测的提取液冲洗电极。将电极插入待测提取液，按照电导率仪的使用说明书要求，将温度校正为25℃±1℃，测定土壤提取液的电导率。直接从电导率仪上读取电导率值，同时记录提取液的温度。
● 相同的步骤测试空白试样。空白电导率值不应超过1mS/m（即10μS/cm）。否则，应查找原因，重新测定。
● 记录测定结果。
四、仪器及配件推荐
HycultBiotech 补体旁路，大鼠，测定HIT412
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详细介绍
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HycultBiotech 补体旁路，大鼠，测定
HIT412测量通过LPS介导的替代途径活性。补体缺乏或补体系统中的其他缺陷可以通过并行或单独地对每个途径进行测定来容易地筛选。
描述：
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ELISA包含基于Wistar菌株的阳性对照，其可用作过程对照，以确保替代补体级联已经运行。此阳性对照不能用于确定批次之间的激活水平。我们建议在您的研究中包括您自己的100%补体活性参考样本和阴性对照（如未保存的活化血清），以确定您的样本的活化水平。请注意，补体活性水平是大鼠菌株依赖性的，可能会受到样本收集和处理方式的影响。
先天免疫系统是抵御外来病原体的第一道防线。这一对策的一个主要组成部分是补充制度。补体系统由一个复杂的蛋白质和受体家族组成，这些蛋白质和受体存在于循环、组织和其他体液中。目前，还介绍了自适应免疫的几个环节。该系统由三个确定的途径组成，这些途径被一组特定的分子激活。补体激活通过一系列蛋白质的蛋白水解裂解以顺序的方式进行，从而产生活化产物，这些活化产物通过与特定细胞受体和其他血清蛋白的相互作用介导各种生物活性，在一个中心组成部分汇聚成最后的共同路径。
即C3的活化导致C3a和C3b的形成。这种切割激活末端补体途径，最终形成末端C5b-9补体复合物（TCC）。经典途径是通过C1q与抗体复合物的结合启动的，而替代途径和凝集素途径是通过补体组分与外来病原体表面的特异性碳水化合物基团和脂多糖（LPS）的相互作用以抗体无关的方式激活的。替代途径也起到其他途径的扩增环的作用。在某些条件下，补体系统可能对宿主不利，导致例如自身免疫性疾病和感染。
C3缺乏与SLE有关。替代途径的改变，如ficolin缺乏，增加了感染的易感性。甘露糖结合凝集素（MBL）是凝集素途径的主要成分，与细菌、真菌和病毒感染有关。测量经典或替代途径活性的一种常见方法是红细胞溶血。此外，已经描述了一些测定MBL途径活性的方法。并非所有的化验都很容易进行。
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注意事项：仅供研究使用。不用于人体或动物，也不用于诊断。用户有责任在使用本产品时遵守所有地方/州和联邦法规。Hycult Biotech对使用或衍生本产品可能导致的任何侵权行为不承担责任。
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脂联素测定DZ188A
脂联素测定
简要描述：脂联素测定，产品型号：DZ188A。规格：R1 / R2（双瓶液体稳定）方法：双瓶液体稳定，免疫比浊法
详细介绍
产品咨询
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|---|---|---|---|
| 应用领域 | 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合 |
脂联素测定，产品型号：DZ188A 。
脂联素测定，描述：
产品特点
用于测定血清中的总脂联素浓度。该测定的线性范围为1.12-40mg / L，并且具有≤4.9％的运行内和运行间精密度CV。研究表明，脂联素表达下降与胰岛素抵抗相关。脂联素似乎是连接脂肪组织和全身葡萄糖代谢的有效胰岛素增强剂。
预期用途
Diazyme Adiponectin Assay用于乳胶增强免疫比浊法测定血清中总脂联素浓度。仅供美国研究使用
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