Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 红色荧光 价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 红色荧光

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒,过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小,因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比,过氧化酶也更便宜;其主要缺点是在保护剂(例如叠氮化钠)存在的条件下溶解性低;而在低浓度下,过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA(酶联免疫吸附实验)、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue,我们的超灵敏HRP显色底物,即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物,它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物(例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue)具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质,在664nm处有大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA,酶促反应动力学分析,氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理,并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 576 ± 5nm
推荐孔板: 透明底板
   
荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
Cutoff: 575nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液(50μL)
2.添加HRP标准品和/或测试样品(50μL)
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液(100X):
将250μLDMSO(组分E)加入到Amplite 红色过氧化物酶底物(组分A)的小瓶中以制备100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。 应立即使用原液,避光。

2. HRP标准溶液(20 U / mL):
将1mL测定缓冲液(组分C)加入到辣根过氧化物酶(组分D)的小瓶中以制备20U / mL的HRP标准溶液。

3. H2O2储备溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2储备溶液。 注意:稀释的H2O2溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL分析缓冲液(组分C)中加入1μL的20U / mL HRP标准溶液,得到10mU / mL HRP标准溶液(SD7)。 取10 mU / mL HRP标准溶液(SD7)并进行1:3连续稀释,得到连续稀释的HRP标准品(SD6-SD1)和分析缓冲液(组分C)。

 

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H2O2储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液(组分C)中以制备HRP工作溶液,避光。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品(SD1-SD7,0.01至10 mU / mL); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
SD1 SD1
SD2 SD2
SD3 SD3    
SD4 SD4    
SD5 SD5    
SD6 SD6    
SD7 SD7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
SD1-SD7 50ul 连续稀释液(0.01至10 mU / mL)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品(SD),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。注意:高水平的HRP(例如,> 100mU / mL终浓度)可能由于Amplite TM Red(至非荧光)的过度氧化而导致荧光信号降低。

2.向HRP标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液,使总HRP测定体积为100μL/孔。对于384孔板,在每个孔中加入25μLHRP工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

4.用荧光板读数器在激发= 540±10nm,发射= 590±10nm(佳Ex / Em = 540 / 590nm,截止= 575nm)监测荧光增加。注意:也可以将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。

 

参考文献

Identification of acetylcholinesterase inhibitors using homogenous cell-based assays in quantitative high-throughput screening platforms
Authors: Shuaizhang Li, Ruili Huang, Samuel Solomon, Yitong Liu, Bin Zhao, Michael F Santillo, Menghang Xia
Journal: Biotechnology journal (2017): 1600715

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 Cat#11553
Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒 Cat#11551
Amplite 发光法过氧化酶检测试剂盒 Cat#11559