SCICONS | mRNA疫苗生产中双链RNA (dsRNA)残留检测方案

随着mRNA疫苗在抗击COVID-19中的成功应用,针对双链RNA(dsRNA)抗体的需求持续增长。mRNA是DNA通过T7 RNA聚合酶转录生成,dsRNA杂质随之产生,为了监测dsRNA杂质的去除情况,双链RNA (dsRNA) ELISA试剂盒常被应用于mRNA产品的质控环节。

双链RNA (dsRNA) ELISA试剂盒 Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit利用双抗夹心ELISA原理,检测核酸提取物中的病毒dsRNA或非病毒来源的天然或合成dsRNA,以及检测人工合成(m)RNA制剂中的dsRNA杂质。基于使用两种双链RNA(dsRNA)特异性单克隆抗体,Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit可以灵敏和选择性地检测dsRNA分子(大于40 bp),而不依赖于它们的核苷酸组成和序列,该检测具有高度的特异性。

产品优势:

  • mRNA疫苗中dsRNA杂质残留的监测
  • dsRNA杂质的检测灵敏度高、特异性强
  • 试剂盒适用于检测植物和动物病毒
  • 用于区分细菌病原体和病毒病原体

SCICONS品牌产品

SCICONS是一家向全球研究者提供检测双链RNA(dsRNA)小鼠单克隆抗体的公司,其在1990年就开始利用杂交瘤细胞系生产抗双链RNA(anti-dsRNA)的单克隆抗体,热销的单抗克隆包括J2、K1、K2和J5,这些抗体识别dsRNA的特异性非常强,与DNA或单链RNA ( ssRNA )没有交叉反应,抗体识别具有序列非依赖性,靶向天然存在的长度大于40个碱基对的双链RNA( dsRNA )以及合成的RNA poly ( I :C) 和poly ( A : U )。

SCICONS品牌J2抗体已成为双链RNA(dsRNA)识别的金标准,在国际知名期刊已发表超过200多篇高水平文章。SCICONS于2021年被Nordic-MUbio公司收购,现作为Nordic-MUbio品牌的一个产品线对外销售,产品包括抗体、对照和ELISA检测试剂盒等。

Scicons 双链DNA检测系列产品

货号

英文品名

规格

10010200

Mouse anti double-stranded RNA (J2)

200 µg

10010500

Mouse anti double-stranded RNA (J2)

500 µg

10040200

Mouse anti double-stranded RNA (J5)

200 µg

10040500

Mouse anti double-stranded RNA (J5)

500 µg

10020200

Mouse anti double-stranded RNA (K1)

200 µg

10020500

Mouse anti double-stranded RNA (K1)

500 µg

10050100

Mouse anti double-stranded RNA (J2, J5 and K1) Comparison Kit

3 x 100 µg

10613002

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based)

Kit

10623002

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (K1 based)

Kit

10623005

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (K1 based)

Kit

10613005

Double-stranded RNA (dsRNA) ELISA kit (J2 based)

Kit

10030010

Mouse anti double-stranded RNA (K2)

10 ml

10030005

Mouse anti double-stranded RNA (K2)

5 ml

SCICONS | mRNA疫苗生产中双链RNA (dsRNA)残留检测方案

J2抗体应用

J2抗体最初用于植物病毒的研究,2006年J2被证明可用于检测所有被正链RNA病毒感染的细胞中产生的dsRNA以来,该抗体在更多领域得到了广泛应用。

  1. J2可用于检测丙型肝炎病毒、登革热病毒、鼻病毒、基孔肯雅病毒、狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒、猪瘟病毒、雀麦花叶病毒等多种病毒的dsRNA中间体。
  2. J2已被用于阐明抗病毒反应是如何启动的,并通过对病毒核酸复制位点进行超微结构定位研究,来探索病毒的生命周期。
  3. J2也被推荐为检测未知病原体是细菌还是病毒的工具。
  4. J2也被用于监测体外合成的m RNA制剂中ds RNA的去除情况。

References

• S. J. Richardson, A. Willcox, D. A. Hilton, S. Tauriain­en, H. Hyoty, A. J. Bone, A. K. Foulis, N. G. Morgan. Use of antisera directed against dsRNA to detect viral infections in formalin-fixed paraffin-embedded tissue. J Clin Virol. (2010) 49(3); 180-5. doi: 10.1016/j. jcv.2010.07.015.

• F. Weber, V. Wagner, S. B. Rasmussen, R. Hartmann, S. R. Paludan. Double-stranded RNA is produced by positive-strand RNA viruses and DNA viruses but not in detectable amounts by negative-strand RNA viruses. J Virol (2006), 80(10):5059-64. doi: 10.1128/ JVI.80.10.5059-5064.2006.

• S. Welsch, S. Miller, I. Romero-Brey, A. Merz, C. K. E. Bleck, P. Walther, S. D. Fuller, C. Antony, J. Kri­jnse-Locker, R. Bartenschlager. Composition and Three-Dimensional Architecture of the Dengue Virus Replication and Assembly Sites. Cell Host & Microbe (2009) 5(4); 365-375. doi.org/10.1016/j. chom.2009.03.007.

• K. Knoops, M. Bárcena, R. W. Limpens, A. J. Koster, A. M. Mommaas, E. J. Snijder. Ultrastructural charac­terization of arterivirus replication structures: re­shaping the endoplasmic reticulum to accommodate viral RNA synthesis. J Virol. (2012) 86(5); 2474-2487. doi:10.1128/JVI.06677-11.

Nordic-MUbio是一家总部设在荷兰的生产和研发高质量免疫学试剂公司,能够为流式细胞术、细胞生物学、免疫学、癌症研究、干细胞等领域提供广泛的产品组合。 2021年4月13日Nordic-MUbio宣布收购Scicons,为世界范围内的研究者提供检测dsRNA的单克隆抗体及相关产品。除此之外,Nordic-MUbio公司供应2000多种用于生物医学和兽医研究的基础免疫学试剂,包括抗血清、抗体、免疫复合物、纯化蛋白、对照品、血清蛋白标准品和其他校准品,包括高度特异性的单克隆抗体,以及用于不同试验体系的标记二抗等。上海金畔是Nordic-MUbio品牌中国一级代理,为客户提供完善的技术支持与售后服务。如对上述产品感兴趣,欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录上海金畔生物科技有限公司官网www.jinpanbio.cn查询订购。

基于Mass Spectrum检测的AAE方法分析HCP – 更清楚和更真实了解工艺中HCP的残留情况

为什么要验证HCP抗体覆盖率?

在对工艺中HCP(宿主细胞蛋白)的监控和产品放行中,ELISA一直被用作HCP检测的金标准。这主要是因为ELISA可以在mg/ml级别的产品蛋白中有效地检测ng/ml级别的HCP残留。并且ELISA的操作简便,是经典的免疫学检测方法。但ELISA检测HCP也有方法的局限性,比如不能从ELISA的结果中知道样品中有哪些HCP,或者用于ELISA检测的抗体与哪些HCP发生了免疫反应。因此,监管部门要求在使用ELISA检测过程中HCP残留含量时,不仅要通过方法学验证证明试剂盒的准确度,精密度,灵敏度等,而且还需要证明使用的HCP抗体有广泛的反应性,即HCP抗体覆盖率。

基于Mass Spectrum检测的AAE方法分析HCP – 更清楚和更真实了解工艺中HCP的残留情况

夹心法HCP ELISA工作原理

AAE是检测HCP抗体覆盖率的更有效方法

2014年,作为过程污染物残留检测产品领先开发商,Cygnus结合多年HCP抗体及试剂盒开发经验,推出了Affinity Antibody Extraction(AAE)方法验证覆盖率,突破了传统2DWB方法验证覆盖率的局限性,更真实准确反应HCP抗体覆盖率。AAE提取富集的样品和未经AAE提取的样品分别经过2D PAGE分离后使用银染的方法对得到的点进行匹配、计数、计算覆盖率。这种方法一经上市后,广泛得到生物制药企业和监控部门的认可。

基于Mass Spectrum检测的AAE方法分析HCP – 更清楚和更真实了解工艺中HCP的残留情况

AAE和银染验证HCP抗体覆盖率原理

AAE+MS更清晰地展示了工艺中HCP残留情况,进一步对产品质量安全做风险评估

现阶段,常用的HCP抗体覆盖率验证的方法都存在其自身的局限性。AAE方法解决了传统2DWB中的低灵敏度和低特异性的问题。而且,由于AAE可以在富集本身含量较低的HCP的同时,还可以大幅降低中间品和终产品中的药物蛋白。这使对中间品和终产品中HCP与HCP抗体的反应情况的分析成为可能。尽管如此,AAE和银染分析也不能具体得知样品中具体有哪些种类的HCP,尤其是那些与人体有较高免疫原性和对药物有较大影响的HCP。基于以上问题的考虑,Cygnus利用更精准的质谱检测方法与AAE相结合,推出了新一代的AAE和Mass Spectrum覆盖率验证服务。

基于Mass Spectrum检测的AAE方法分析HCP – 更清楚和更真实了解工艺中HCP的残留情况

AAE和Mass Spectrum验证HCP抗体覆盖率工作流程

AAE与Mass Spectrum可对上游和下游工艺中的样品进行分析,覆盖率的结果更高、更真实。更主要的是质谱可以对样品中是否存在潜在高风险的HCP做出鉴定并提供这些蛋白相关含量,分子量,等电点等信息。无论是药物研发人员,还是监管人员都可以对某个工艺中HCP残留情况有清楚的了解,从而做出更好的判断。

上海金畔生物科技有限公司是美国Cygnus Technologies公司中国区一级代理,负责销售Cygnus全线产品以及覆盖率验证,专属试剂盒定制等服务,并提供产品和服务售前和售后技术支持、服务样品寄送、进度跟踪、服务报告整理等一站式服务。如感兴趣请拨打上海金畔生物科技有限公司热线电话:021-50837765。

独家现货供应KPL ELISA底物显色系统

ELISA 法作为免疫诊断技术之一,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断,也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定。ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。

影响 ELISA 实验成功的因素有很多,除了抗原抗体反应外最关键的是实验最后一步——加入底物,酶与底物反应后通过肉眼观察或酶标仪读取 OD 值来分析样本。KPL将 ELISA底底物显色系统进行优化,所提供的 ELIISA专用显色系统相对传统或者普通显色底物而言,具有更高的灵敏度,质量更加稳定,批次间差异小,无致癌性危险,多样化的底物显色系统可以满足广大客户的各种需求。KPL 提供的ELISA 底物均为溶液形式,便于使用。以下为 KPL 提供的 ELISA 底物。

品牌

货号

品名

中文/常用名称

规格

KPL

53-00-02

SureBlue Reserve TMB 1-Component

四甲基联苯胺

400 mL

KPL

52-00-02

SureBlue TMB 1-Component

四甲基联苯胺

400 mL

KPL

50-76-00

TMB 2-Component

四甲基联苯胺

400 mL

KPL

50-66-00

ABTS 1-Component

2, 2′-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6 磺酸)

600 mL

KPL

50-62-00

ABTS 2-Component

2, 2′-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6 磺酸)

600 mL

KPL

50-88-00

BluePhos2-C

5-溴-4-氯-3-吲哚基-磷酸盐

600 mL

KPL

50-80-00

pNPP

对硝基苯磷酸二钠

500 mL

KPL

54-61-00

LumiGLO Peroxidase

鲁米诺发光底物

240 mL

KPL

54-71-02

LumiGLO Reserve

鲁米诺发光底物Reserve级

1000 cm2

KPL

55-60-03

PhosphaGLO AP Substrate

PhosphaGLO AP酶发光底物

30 mL

KPL

55-60-01

PhosphaGLO Reserve AP

PhosphaGLO AP酶发光底物Reserve级

30 mL

SureBlue TMB 产品(货号:52-00-02)已经有 20 多年的历史, 是 TMB 的优化产品,一直以性能稳定、使用方便深受广大科研工作者及诊断试剂生产商的青睐。与 HRP反应后生成蓝色物质。产品具有灵敏度高、有效期长、使用方便等优点,加上批次间差异小和背景低等特点,SureBlue 被推荐为 ELISA 实验的首选底物。

产品特色:

灵敏度高;

质量稳定,严格的质量控制确保批次间产品实验差异不超过15%;

有效期长,2-8℃保存24个月后产品仍具有高灵敏度与低背景的活性;

单组分产品使用方便;

安全环保, 无致癌性、 不含任何有害物质如 DMSO、 DMF等。

SureBlue Reserve(货号:53-00-02)是对SureBlue的进一步优化, 灵敏度要高

于SureBlue,并且有效期长达24个月。

产品特色:

灵敏度极高,可检测0.4ng/ml HRP,是SureBlue产品的2倍;

有效期长,2-8℃可稳定保存24个月;

质量稳定,批次间产品实验差异小于10%;

单组分产品使用方便;

安全环保,不含任何有害物质如 DMSO、DMF等。

TMB 2-Component(货号:50-76-00)

产品特色:

有效期长, 可于2-8℃稳定保存2年;

灵敏度高于 ABTS、OPD;

无毒无害、安全环保。

ABTS[2, 2′-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6 磺酸)](货号:50-66-00,50-62-00),其反应产物呈蓝绿色,且灵敏度和稳定性均好。吸收峰在 404nm~415nm 之间。KPL的 ABTS底物溶液有单组分和双组分 2 种产品可供选择。

产品特色:

线性检测范围宽的;

稳定,可于 2-8℃保存一年以上且批次间差异小;

适用于低背景和中等灵敏度要求;

反应不受光线影响;

反应速度慢可用于动力学研究;

无毒无害、安全环保。

KPL 对传统的 BCIP(货号:50-88-00)进行了优化,开发了使用方便、色彩多样、高灵敏度、高信噪比的系列 AP 底物。AP 与 FirePhos反应生成的红色物质于 500nm 左右形成较大吸收峰,而BluePhos的蓝色反应物则在 600nm左右形成较大吸收峰。

产品特色:

灵敏高,FirePhos and BluePhos可检测0.5pg 的 AP;

背景低于 pNPP;

稳定性好,可于 2-8℃稳定保存 2 年以上;

使用方便,均为 2 组分,等体积混合即可;

反应前后色彩对比鲜明,易做结果判定。

KPL的pNPP产品(货号:50-80-00)全部以片剂形式提供,每片pNPP用5ml稀释液溶解即可, 减少了实验人员与pNPP的接触。 pNPP与AP反应后呈黄色,在405-410nm处形成较大吸收峰。

LumiGLO Chemiluminescent Peroxidase Substrate(货号:54-61-00,54-71-02)是基于鲁米诺开发的一种非同位素的 HRP底物,当有 H2O2存在时,HRP可催化鲁米诺发光,且这个反应相当迅速。该底物检测信号与被检蛋白浓度呈非常好的正相关关系,灵敏度高。

产品特色:

既可用于ELISA又可用于 WB;

信号产生迅速;

灵敏度高,是同类产品的 2 倍以上, LumiGLO 可检测 pg级蛋白,而 LumiGLO Reserve

可检测 fg 级蛋白;

全部试剂均为即用型的,使用方便;

工作液可存放 8~24h;

发光时间长,可持续 1~2 小时;

可于 2-8℃稳定保存 1 年以上。

PhosphaGLO(货号:55-60-03,55-60-01) 是源于二氧杂环烷的一种AP 化学发光底物,该类底物灵敏度极高,尤其适用于目的蛋白峰度较低的样品的检测。

产品特色:

既可用于ELISA又可用于 WB;

PhosphaGLO 可检测 pg 级蛋白,而PhosphaGLO Reserve 则可检测 fg 级蛋白;

发光持久,可持续 5 天;

单组分即用型产品使用方便。

KPL公司是美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,历经30年历史,也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。为全球科研与诊断试剂生产厂商持续提供最优质的产品。如果你对上述KPL产品及相关技术信息感兴趣,请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司垂询相关的最优产品和解决方案,或索取相关手册和资料。我们会为您做的更多!