4-氟间苯二酚 CAS 103068-41-3-AAT Bioquest荧光染料

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4-氟间苯二酚 CAS 103068-41-3价格 1386
产品规格

1 g

产品货号

4-氟间苯二酚 CAS 103068-41-3

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 128.10 溶剂 DMF
存储条件 在零下15度以下保存
产品概述

产品基本信息

产品名称:4-氟间苯二酚

CAS:103068-41-3

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:128.10

溶剂:DMF

激发波长(nm):N/A

发射波长(nm):N/A

 

产品介绍

4-氟代间苯二酚是可用于制备荧光染料如荧光素,香豆素和试卤灵类似物的前体。它是制备俄勒冈绿色染料的关键前提。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的4-氟间苯二酚。 

2,4-二氟间苯二酚 CAS 195136-71-1-AAT Bioquest荧光染料

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2,4-二氟间苯二酚 CAS 195136-71-1价格 2111
产品规格

1 g

产品货号

2,4-二氟间苯二酚 CAS 195136-71-1

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 146.09 溶剂 DMF
存储条件 在零下15度以下保存
产品概述

产品基本信息

产品名称:2,4-二氟间苯二酚

CAS:195136-71-1

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:146.09

溶剂:DMF

激发波长(nm):N/A

发射波长(nm):N/A

 

产品介绍

2,4-二氟间苯二酚是可用于制备荧光染料如荧光素,香豆素和试卤灵类似物的前体。 它是制备Pacific蓝染料的关键前提。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的2,4-二氟间苯二酚。 

Amplite 比色法醛类定量试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法醛类定量试剂盒价格 4245
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 比色法醛类定量试剂盒

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Amplite 比色法醛类定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法,如HPLC-MS 或者GC-MS,这种方案成本昂贵、操作繁杂,不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒使用独特的染料,该染料与醛反应后形成荧光产物。本试剂盒提供灵敏的一步法醛类检测,检测灵敏,可以在100ul检测体积中能检测到1nmol的醛类。试剂盒可以用于96或384微孔板分析,并且无需任何额外步骤,就可以轻易地实现自动化。终反应信号可通过酶标仪在405或者550nm处方便地读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法醛类定量试剂盒。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 550nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备酶反应(50μL)
2.添加2X AldeView 黄色工作溶液(50μL)
3.在室温下孵育30至60分钟
4.监测405或550 nm处的吸光度增加

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1醛标准溶液(10 mM):
将1mL稀释缓冲液(组分D)加入到醛标准品(组分C)的小瓶中以制备10mM醛标准溶液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取10mM醛标准溶液,进行1:10稀释,得到1000μM醛标准溶液(AS7)。 然后进行1:3连续稀释,得到醛标准品(AS6-AS1)的剩余连续稀释液。

 

3.工作溶液

将5 mL测定溶液(组分B)加入AldeView 黄色(组分A)中,并充分混合。 注意:5 mL 2X AldeView 黄色反应混合物足以容纳1个平板。 反应混合物不稳定。 在2小时内使用。 注意:分析方案(组分B)具有潜在危险,处理时戴上手套。

 

样品分析

表1.白色/透明底96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品(AS1-AS7,1至1000μM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(1至1000μM)
BL 50ul 分析缓冲液
TS 50ul 测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品(AS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意:BSA和吐温20都会干扰测定,样品中使用低于0.001%的BSA和0.01%的吐温20。 注意:如果含醛样品来自酶反应,例如果糖-1,6-二磷酸酯和果糖-1,6-二磷酸醛缩酶,则根据需要制备50μL酶反应(对于384孔板25μL)。 将酶反应在37°C孵育至少1小时。 应根据需要优化酶反应的组分(例如,特定酶反应可能需要优化的缓冲系统)。 在大多数情况下,如果您没有优化的酶缓冲液,稀释缓冲液(组分D)也可用于运行酶反应。

2.在醛标准品,空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeView 黄色工作溶液,使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLAldeView 黄色工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在室温下孵育30至60分钟,避光。

4.用吸光度读板仪在405或550 nm处监测吸光度的增加。 注意:不同浓度的醛可能会与AldeView 黄色形成不同的颜色。 在较低浓度下,405nm处的吸光度给出佳结果。 然而,在较高浓度下,吸光度倾向于移至550nm。

 

参考文献

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12–26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65–73

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色 Cat#10053
Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒 Cat#40004
Amplite 荧光法醛类定量试剂盒 Cat#10052

Amplite 荧光法醛类定量试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法醛类定量试剂盒 价格 2823
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 荧光法醛类定量试剂盒

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Amplite 荧光法醛类定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法,如HPLC-MS 或者GC-MS,这种方案成本昂贵、操作繁杂,不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒使用独特的染料,该染料与醛反应后形成荧光产物。本试剂盒提供灵敏的一步法醛类检测,检测灵敏,可以在100ul检测体积中能检测到1nmol的醛类。试剂盒可以用于96或384微孔板分析,并且无需任何额外步骤,就可以轻易地实现自动化。终反应信号可通过酶标仪在405或者550nm处方便地读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法醛类定量试剂盒。 注:该探针会与硫醇发生反应,如果样品含有硫醇,请用 2-5 mM H2O2 处理样品(包括对照)30 分钟。然后进行测定。

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 365nm
Em: 435nm
cutoff: 420nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备酶反应溶液(50μL)
2.添加AldeLight 蓝色工作溶液(50μL)
3.在室温下孵育15至30分钟
4.加入25μL反应缓冲液
5.监测Ex / Em = 365 / 435nm处的荧光增加

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

1.1 AldeLight Blue原液(250X):
将40μLDMSO(组分E)加入AldeLight™Blue(组分A)小瓶中,制成250X AldeLight™Blue原液。

1.2 醛标准溶液(10 mM):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入到小瓶标准品(组分D)中以制备10mM醛标准溶液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取10mM醛标准溶液,进行1:10稀释,得到1000μM醛标准溶液(AS7)。 然后进行1:3连续稀释以获得剩余的醛标准品(AS6-AS1)。

 

3.工作溶液

将20μL250XAldeLight Blue原液添加到5 mL分析缓冲液(组分B)中,并充分混合以制备AldeLight Blue工作溶液。 注意:对于一个板,5 mL AldeLight Blue工作溶液就足够了。 反应混合物不稳定,好在2小时内使用。

 

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品(AS1  –  AS7,1至1000μM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释(1至1000μM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分B)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品(AS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

注:该探针会与硫醇发生反应,如果样品含有硫醇,请用 2-5 mM H2O2 处理样品(包括对照)30 分钟。然后进行测定。

2.在醛标准品,空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeLight Blue工作溶液,使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLAldeLight Blue工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在室温下孵育15至30分钟,避光。

4.每孔加入25μL反应缓冲液(组分C)。

5.使用荧光板读数器监测Ex / Em = 365 / 435nm处的荧光增加。

 

参考文献

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12–26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65–73

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 比色法醛类定量试剂盒 Cat#10051
Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色 Cat#10053
Amplite 荧光法钙离子定量试剂盒 *红色荧光* Cat#36360

Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色 价格 4245
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。近年来对细胞膜脂类过氧化成醛的成因,活性以及毒性研究受到广泛的关注。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法,如HPLC-MS 或者GC-MS,这种方案成本昂贵、操作繁杂,不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒 *蓝色* 利用独有的荧光染料与醛反应产生高亮的蓝色荧光产物。该比色试剂盒提供灵敏的即用即读模式,能检测到低至0-4uM的醛类。试剂盒可以用于96或384微孔板分析,并且无需任何分步骤,就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色。 

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 620nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备醛标准品和/或测试样品(50μL)
2.添加2X AldeView 蓝色工作溶液(50μL)
3.在室温下孵育20分钟
4.添加AldeView 蓝色增强剂(50μL)
5.在室温下孵育20分钟
6.监测620nm处的吸光度增加

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。
1.1醛标准溶液(10 mM):
将1mL测定缓冲液(组分B)加入到醛标准品(组分D)的小瓶中以制备10mM醛标准溶液。

 

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取10mM醛标准溶液,在测定缓冲液(组分B)中以1:100的比例制备100μM醛标准溶液(AS7)。 取100μM醛标准溶液(AS7)并进行1:2连续稀释,得到连续稀释的醛标准品(AS6-AS1)和分析缓冲液(组分B)。

 

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液(组分B)加入一瓶AldeView Blue(组分A)中,制成2X AldeView Blue工作溶液。 注意:对于一个板,5 mL 2X AldeView Blue工作溶液就足够了。 2X AldeView 蓝色工作溶液不稳定,好在2小时内使用。

 

样品分析

表1.在具有透明底部的白色96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品(AS1-AS7,1.56至100μM),BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
AS1 AS1
AS2 AS2
AS3 AS3    
AS4 AS4    
AS5 AS5    
AS6 AS6    
AS7 AS7    

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AS1-AS7 50ul 连续稀释液(1.56至100μM)
BL 50ul 分析缓冲液
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品(AS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用12.5μL试剂代替50μL。

2.在醛标准品,空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeView Blue工作溶液,使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入12.5μLAldeView Blue工作溶液,总体积为25μL/孔。

3.在室温下孵育反应20-30分钟,避光。

4.每孔加入50μLAldeView Blue Enhancer(组分C)。 对于384孔板,每孔加入25μLAldeView Blue Enhancer。

5.在室温下孵育反应20分钟,避光。

6.使用吸光度读板仪在620至660 nm(大620 nm)下监测吸光度的增加。

 

参考文献

Aldehyde-mediated protein degradation is responsible for the inhibition of nucleotide excision repair by cigarette sidestream smoke
Authors: Guang Yang, Yukako Komaki, Yuko Ibuki
Journal: Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis (2018)

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12–26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65–73

 

相关产品

产品名称 货号
Amplite 比色法醛类定量试剂盒 Cat#10051
Amplite 比色法葡萄糖定量试剂盒 Cat#40004
Amplite 荧光法醛类定量试剂盒 Cat#10052

即用型过氧化氢溶液 50 mM校准、稳定-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
即用型过氧化氢溶液 50 mM校准、稳定价格 1386
产品规格

5×10 mL

产品货号

即用型过氧化氢溶液 50 mM校准、稳定

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 34.01 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

即用型过氧化氢溶液是美国AAT Bioquest生产的ELISA检测试剂,与其它商业化过氧化氢溶液相比,我们制备的H2O2溶液更加稳定。它经过校准,能够更好的保证基于过氧化酶检测的重现性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的即用型过氧化氢溶液。 

实验方案

操作方案

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1.过氧化物酶反应混合物:
用适当的过氧化氢底物浓度和50至500μM过氧化氢制备过氧化物酶反应混合物。

 

样品实验方案

1.加入等体积的过氧化物酶工作溶液和过氧化物酶标准品和含过氧化物酶的样品。

2.在室温下孵育反应15至30分钟,避光。

3.用适当的仪器监测荧光或吸光度。

 

参考文献

Development of enzyme-based bar code-style lateral-flow assay for hydrogen peroxide determination
Authors: Fung KK, Chan CP, Renneberg R.
Journal: Anal Chim Acta (2009): 89

The accuracy of Amplex Red assay for hydrogen peroxide in the presence of nanoparticles
Authors: Lee CW, Chen YC, Ostafin A.
Journal: J Biomed Nanotechnol (2009): 477

Development of a 384-well colorimetric assay to quantify hydrogen peroxide generated by the redox cycling of compounds in the presence of reducing agents
Authors: Johnston PA, Soares KM, Shinde SN, Foster CA, Shun TY, Takyi HK, Wipf P, Lazo JS.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 505

Hydroxyl radical scavenging assay of phenolics and flavonoids with a modified cupric reducing antioxidant capacity (CUPRAC) method using catalase for hydrogen peroxide degradation
Authors: Ozyurek M, Bektasoglu B, Guclu K, Apak R.
Journal: Anal Chim Acta (2008): 196

A reporter system for the individual detection of hydrogen peroxide and singlet oxygen: its use for the assay of reactive oxygen species produced in vivo
Authors: Shao N, Krieger-Liszkay A, Schroda M, Beck CF.
Journal: Plant J (2007): 475

Chemiluminescence assay for tetrahydrobiopterin based on the generation of hydrogen peroxide using isoluminol-microperoxidase in the presence of 1-methoxy PMS
Authors: Arakawa H, Masuda K, Tajima N, Maeda M.
Journal: Luminescence (2007): 245

Homogeneous, unmodified gold nanoparticle-based colorimetric assay of hydrogen peroxide
Authors: Wu ZS, Zhang SB, Guo MM, Chen CR, Shen GL, Yu RQ.
Journal: Anal Chim Acta (2007): 122

Polypyrrole-based optical probe for a hydrogen peroxide assay
Authors: Wang H, Park SM.
Journal: Anal Chem (2007): 240

Hydrogen peroxide-induced chlorophyll a bleaching in the cytochrome b6f complex: a simple and effective assay for stability of the complex in detergent solutions
Authors: Chen XB, Zhao XH, Zhu Y, Gong YD, Li LB, Zhang JP, Kuang TY.
Journal: Photosynth Res (2006): 205

The responses of lymphocytes from Asian and Caucasian diabetic patients and non-diabetics to hydrogen peroxide and sodium nitrite in the Comet assay
Authors: Wyatt N, Kelly C, Fontana V, Merlo DF, Whitelaw D, Anderson D.
Journal: Mutat Res (2006): 154

Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物价格 2111
产品规格

25 mg

产品货号

Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 ~300 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称:Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:~300

溶剂:DMSO

激发波长(nm):324

发射波长(nm):409

 

产品介绍

Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物,金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶蓝色荧光底物。

 

试剂应用文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Milton, Amber
Journal: (2017)
 
Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Chi, Junjie and Gao, Bingbing and Sun, Mi and Zhang, Fengling and Su, Enben and Liu, Hong and Gu, Zhongze
Journal: Analytical Chemistry (2017)
 
Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Albadawi, Hassan and Chen, John W and Oklu, Rahmi and Wu, Yue and Wojtkiewicz, Gregory and Pulli, Benjamin and Milner, John D and Cambria, Richard P and Watkins, Michael T
Journal: Radiology (2016): 152222
 
Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Pulli, Benjamin and Ali, Muhammad and Iwamoto, Yoshiko and Zeller, Matthias WG and Schob, Stefan and Linnoila, Jenny J and Chen, John W
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269
 
Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Zhang, Yinian and Seeburg, Daniel P and Pulli, Benjamin and Wojtkiewicz, Gregory R and Bure, Lionel and Atkinson, Wendy and Schob, Stefan and Iwamoto, Yoshiko and Ali, Muhammad and Zhang, Wei and others, undefined
Journal: Radiology (2015): 822–830
 
Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Huang, Jiansheng and Smith, Forrest and Panizzi, Peter
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85
 
Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Scherag, Frank D and Br, undefined and stetter, Thomas and Rühe, Jürgen
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582
 
Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Pulli, Benjamin and Ali, Muhammad and Forghani, Reza and Schob, Stefan and Hsieh, Kevin LC and Wojtkiewicz, Gregory and Linnoila, Jenny J and Chen, John W
Journal: PLoS One (2013): e67976
 
Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Kozak, Katherine R and Wang, Jianyong and Lye, Melvin and Takkar, Rashi and Kim, Namyong and Lee, Hyunjae and Jeon, Noo Li and Lin, Kedan and Zhang, Crystal and Wong, Wai Lee T and others, undefined
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350
 
Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Kleijn, Anne and Chen, John W and Buhrman, Jason S and Wojtkiewicz, Gregory R and Iwamoto, Yoshiko and Lamfers, Martine L and Stemmer-Rachamimov, Anat O and Rabkin, Samuel D and Weissleder, Ralph and Martuza, Robert L and others, undefined
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物

产品参数
Ex (nm) 648 Em (nm) 668
分子量 ~400 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的荧光探针,我们的Amplite IR是一种荧光性过氧化酶底物,与过氧化酶和H2O2反应时,产生近红外荧光。它可以用来检测H2O2和过氧化酶。Amplite IR产生的物质在647nm处具有大吸收峰,同时在647nm处有大发射峰。这种近红外吸收和荧光将检测的本底降至小,这些本底经常由自我吸收和/或生物样品自身的荧光,但是在600nm附近自身光吸收基本没有。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 过氧化物和过氧化酶近红外荧光底物。 

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 640nm
Em: 680nm
cutoff: 650nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.制备100μMAmplite IR 0.8 U / ml的过氧化物酶在磷酸盐缓冲液,并在孔中加入50微升

2.添加H 2 O 2标准品或测试样品(50μL)

3.在室温下孵育0-30分钟

4.监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光强度

 

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1Amplite IR原液:
加入适量无水DMSO,制成10至25 mM Amplite IR原液。

 

2.工作溶液

Amplite IR工作溶液(2X):
为了在50 mM磷酸盐缓冲液或您选择的缓冲液中达到每孔50至100μM的终浓度,在管中制备100至200μM浓度的溶液。每孔需要50μL。 注意:在硫醇如DTT和b-巯基乙醇存在下,Amplite IR不稳定。高于10μM(终浓度)的硫醇可显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽(从GSH中还原)可能会干扰测定。注意:我们建议您每次进行实验时都使用新鲜原液。

 

操作步骤

1.在上清液中进行H2O2测定

1.1将50μL的2X Amplite IR工作溶液(来自步骤1.2)添加到H 2 O 2标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,以使总H2O2测定体积为100μL/孔。注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μL2XAmplite IR工作溶液。

1.2在室温下孵育反应0至30分钟,避光。

1.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意:Amplite IR过氧化物酶底物易于自氧化,因此一旦加入H2O2反应混合物就读取荧光,以提高信噪比。

1.4空白孔中的荧光(仅使用测定缓冲液)用作对照,并从具有H2O2的那些孔的值中减去。

 

2.运行H2O2测定法的细胞:

2.1Amplite IR可用于测量细胞中H2O2的释放。以下是建议的方案,可根据您的具体研究需要进行修改.Dipite IR工作溶液应按步骤1.2制备,但磷酸盐缓冲液应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括(a)Krebs Ringers磷酸盐缓冲液(KRPB); (b)中。汉克斯平衡盐溶液(HBSS); 或(c)无血清培养基。

2.2在96孔板(50-100μL/孔)中制备细胞,并根据需要细胞。 注意:包括阴性对照(单独培养基和非活化细胞)用于测量背景荧光。

2.3加入50微升H2O2反应混合物至细胞的每个孔中,注意:对于384孔板中,添加25μL细胞和25微升H2O2反应混合物倒入每个孔。

2.4在室温下孵育反应0至30分钟,避光。

2.5使用荧光板读数器监测Ex / Em = 640 / 680nm处的荧光增加。 注意:也可以将板的内容物转移到白色透明底板上,并用吸光度酶标仪在670nm波长下读数。与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。 注意:荧光背景随时间增加,因此减去每个数据点的空白孔的荧光强度值是很重要的。

 

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

Signal Guard HRP偶联物稳定剂-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Signal Guard HRP偶联物稳定剂价格 1386
产品规格

50 mL

产品货号

Signal Guard HRP偶联物稳定剂

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件 在2-8度冷藏保存
产品概述

产品基本信息

产品名称:Signal Guard HRP偶联物稳定剂

储存条件:2-8℃避光防潮

保质期:24个月

  

产品介绍

液体HRP-偶联物的主要优点在于,在溶解或者稀释冻干的或者浓缩的偶联物时了人为误差。多加或者缓冲液加的不够,都会导致分析结果的变化。同时,HRP偶联物液体的缺点在于它的内在不稳定性。我们的HRP偶联物稳定剂制备用来对准备使用的HRP-偶联物进行预稀释,有效提高其偶联物的稳定性。这种稳定剂剂型可以以1:1,000浓度存储,或者已备好直接用于分析(1:100,000)。它可以再4℃下存储24个月,在室温下存贮6个月。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Signal Guard HRP偶联物稳定剂。 

 

参考文献

Inactivation of creatine kinase induced by quercetin with horseradish peroxidase and hydrogen peroxide. pro-oxidative and anti-oxidative actions of quercetin
Authors: Miura T, Muraoka S, Fujimoto Y.
Journal: Food Chem Toxicol (2003): 759

Mechanistic and molecular investigations on stabilization of horseradish peroxidase C
Authors: Schmidt A, Schumacher JT, Reichelt J, Hecht HJ, Bilitewski U.
Journal: Anal Chem (2002): 3037

Electron microscopical demonstration of horseradish peroxidase by use of tetramethylbenzidine as chromogen and sodium tungstate as stabilizer (TMB-ST method): a tracing method with high sensitivity and well preserved ultrastructural tissue
Authors: Gu Y, Chen Y, Ye L.
Journal: J Neurosci Methods (1992): 1

An ultrastructural double-labelling method: immunohistochemical localization of cell adhesion molecule L1 on HRP-labelled developing corticospinal tract axons in the rat
Authors: Joosten EA.
Journal: Histochemistry (1990): 645

The histochemical reaction of horseradish peroxidase in rodent ‘whole-brain’ preparations
Authors: Cooper AM.
Journal: Exp Brain Res (1990): 456

A triple-labeling method: HRP anterograde tract tracing combined with double immunofluorescent cell staining in developing neural tissue of the rat
Authors: Dederen PJ, Joosten EA.
Journal: J Neurosci Methods (1989): 71

Improvement of the tetramethyl benzidine reaction with ammonium molybdate as a stabilizer for light and electron microscopic ligand-HRP neurohistochemistry, immunocytochemistry and double-labelling
Authors: Liang FY, Wan XC.
Journal: J Neurosci Methods (1989): 155

[Ammonium molybdate as stabilizing agent in tetramethyl benzidine reaction of CB-HRP neurohistochemistry and its application to electron microscopy and immunocytochemistry]
Authors: Liang FY, Wan XC.
Journal: Zhongguo Yi Xue Ke Xue Yuan Xue Bao (1989): 142

A new stabilizing agent for the tetramethyl benzidine (TMB) reaction product in the histochemical detection of horseradish peroxidase (HRP)
Authors: Olucha F, Martinez-Garcia F, Lopez-Garcia C.
Journal: J Neurosci Methods (1985): 131

Amplite 红色HRP荧光底物-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 红色HRP荧光底物价格 1386
产品规格

1000 Assays

产品货号

Amplite 红色HRP荧光底物

产品参数
Ex (nm) 571 Em (nm) 584
分子量 N/A 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Amplite 红色HRP荧光底物是美国AAT Bioquest生产的HRP荧光底物,Amplite Red是一种灵敏的荧光过氧化物酶底物,可产生高度红色荧光产物,大吸收为571 nm,大发射为585 nm。与其他HRP底物如二氢荧光素和二氢罗丹明不同,Amplite Red的空气氧化极少。 Amplite Red已被广泛用于检测许多免疫测定中的HRP。Amplite Red也可用于检测痕量的H2O2。 基于Amplite Red的H2O2检测比常用的用于H2O2的东莨菪素测定灵敏度至少高一个数量级。由于H2O2是在许多酶促氧化还原反应中产生的,因此Amplite Red可用于偶联酶促反应,以检测许多氧化酶和/或相关酶/底物或辅助因子如葡萄糖,乙酰胆碱和胆固醇,L-谷氨酸,氨基酸的活性等。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 红色HRP荧光底物。 

点击查看光谱

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
cutoff: 550nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

用Amplite Red测定过氧化物酶(HRP)的方案(用于96孔板)

概述

在磷酸盐缓冲液(50μL)中加入200μMH2O2制备1X Amplite Red工作溶液

加入过氧化物酶标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育10-30分钟

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意:以下是溶液中过氧化物酶测定的推荐方案。 该说明书仅提供指导,实际应根据具体需要进行修改。

 

操作方法

A1.准备Amplite Red过氧化物酶工作溶液:

1.1准备 250X Amplite Red原液:将200mL无水DMSO加入小瓶中,充分混合。 应立即使用原液。 任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃重新冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备1X Amplite 红色过氧化物酶工作溶液:在实验当天,将Amplite Red固体溶解在DMSO中或在室温下解冻等份的Amplite Red储备溶液。通过将20μL250XAmplite Red储备溶液(来自步骤1.1)加入5mL 50mM磷酸盐缓冲液或所选缓冲液(pH7)和200μMH2O2中,制备1X工作溶液。

注意:在硫醇如DTT和β-巯基乙醇存在下,Amplite Red不稳定。 高于10μM(终浓度)的硫醇可显著降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽(从GSH中还原)可能会干扰测定。

 

A2.在上清液中运行过氧化物酶测定:

2.1将50μL的1X Amplite 红色过氧化物酶工作溶液(来自步骤1.2)加入过氧化物酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,在每个孔中加入25μL样品和25μL1XAmplite 红色过氧化物酶工作溶液。

2.2在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

2.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。

2.4空白孔中的荧光(仅含测定缓冲液)用作对照,并从具有过氧化物酶反应的那些孔的值中减去。

 

使用Amplite Red测定H2O2的测定方案(一个96孔板)

概述

在磷酸盐缓冲液(50μL)中制备含有0.4 U / mL过氧化物酶的1X Amplite 红色H2O2工作溶液

添加H2O2标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育10-30分钟

监测Ex / Em = 540 / 590nm处的荧光强度

注意:以下是溶液中H2O2测定的推荐方案。 该说明书仅提供指导,实际应根据具体需要进行修改。

 

操作方法

B1.准备Amplite 红色H2O2工作溶液:

1.1Prepare 250X Amplite Red原液:将200μL无水DMSO加入小瓶中,充分混合。原液应立即使用不可存放过久。任何未使用的溶液需要等分并在<-20℃重新冷冻。

注意:避免反复冻融循环,避免光照。

1.2制备1X Amplite 红色H2O2工作溶液:在实验当天,将Amplite Red固体溶于DMSO中或在室温下解冻等份的Amplite Red原液。通过将20μL250X储备溶液(来自步骤1)加入5mL 50mM磷酸盐缓冲液或所选缓冲液(pH7)和0.4单位/ mL过氧化物酶中,制备1X工作溶液。

注意:在硫醇如DTT和β-巯基乙醇存在下,Amplite Red不稳定。 高于10μM(终浓度)的硫醇可显着降低测定动态范围。NADH和谷胱甘肽(从GSH中还原)可能会干扰测定。

 

B2.在上清液中进行H2O2测定:

2.1将50μL1XAmplite Red H2O2工作溶液(来自步骤1.2)加入H2O2标准品,空白对照和测试样品的每个孔中,使总H2O2测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,在每个孔中加入25μL样品和25μL1XAmplite Red H2O2工作溶液。

2.2在室温下孵育反应10至30分钟,避光。

2.3使用荧光板读数器监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光增加。

空白孔中的荧光(仅使用测定缓冲液)用作对照,并从具有H2O2反应的那些孔的值中减去。

 

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

预活化HRP NHS酯-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
预活化HRP NHS酯 价格 1386
产品规格

300 ug

产品货号

预活化HRP NHS酯

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

ReadiUse 预活化的HRP NHS酯是HRP的单NHS酯。 它可用于容易记蛋白质(例如抗体)或具有氨基的其他生物分子。 ReadiUse 预活化HRP NHS酯易于使用。 它可以用于通过简单混合标记抗体,即抗体的碱性溶液(pH 8.5-9.0)可以直接与HRP NHS酯混合,并将反应混合物摇动1-2小时。 在大多数情况下,所得溶液可直接用于ELISA测定而无需进一步纯化。 ReadiUse 预活化的HRP NHS酯提供了强大的方法来执行抗体与HRP的缀合。 任何合适量的抗体(> 1mg / mL)可以容易地与预活化的HRP NHS酯缀合而无需纯化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的预活化HRP NHS酯。 

实验方案

样品实验方案

1.抗体(IgG)~100μg在20μL~50μL的25mM碳酸氢钠缓冲液(pH = 8.5)中。

2.将IgG溶液转移到HRP-SE小瓶中,充分混合。

3.在室温下反应1~2小时,优选在反应过程中轻轻摇动。

4.加入等体积的100mM Tris-HCl缓冲液(pH = 7.5)+ 0.5%BSA。

5.将混合物储存在4oC,即可使用。 注意:如果目标蛋白质溶液含有其他蛋白质(如BSA),则纯化蛋白质溶液或干扰标记反应。 注意:需要除去叠氮化钠等小分子。 注意: Tris缓冲液和其他胺类化合物也会干扰标记反应。

 

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

预活化马来酰亚胺-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
预活化马来酰亚胺 价格 1386
产品规格

300 ug

产品货号

预活化马来酰亚胺

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件 在零下15度以下保存
产品概述

产品基本信息

产品名称:预活化马来酰亚胺

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品介绍

ReadiUse 预活化马来酰亚胺是硫醇反应性HRP衍生物。它可用于容易记具有硫醇基团的蛋白质(例如抗体)或其他生物分子。ReadiUse 预活化HRP马来酰亚胺坚固且易于使用。它可以用于通过简单混合标记抗体,即抗体的微酸性或中性溶液(pH6-7)可以直接与HRP马来酰亚胺混合,并将反应混合物摇动1-2小时。在大多数情况下,所得溶液可直接用于ELISA测定而无需进一步纯化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的预活化马来酰亚胺。 

 

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

Azido-Cy5酪胺-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Azido-Cy5酪胺价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

Azido-Cy5酪胺

产品参数
Ex (nm) 651 Em (nm) 670
分子量 1030.14 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Azido-Cy5酪酰胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品,对于许多免疫组织化学(IHC)应用,传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是,有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明,酪胺信号放大(TSA)是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术,具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力,该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测,酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中,源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号,并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 Azido-Cy5酪胺含有明亮的Cy5,可以使用标准的Cy5滤波片组轻松检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Azido-Cy5酪胺。 

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Cy5滤波片组
Em: Cy5滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy5滤波片组
实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/封闭细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液,在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

 

操作步骤

        在没有额外说明的情况下,所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液(1000X)加入适量的DMSO,制成1-5mM的酪胺储备液。
注意:未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存

2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液(1X):
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003%H2O2的缓冲液中。
注意:Tris Buffer,pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意:Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7%甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1%Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意:组织固定,脱蜡和再水化,根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。

4.过氧化物酶标记

4.1任选:通过在过氧化物酶猝灭溶液(例如3%过氧化氢)中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性,在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选:如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白,建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液(例如含有1%BSA的PBS)在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液,加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次,每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液,在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次,每次5分钟。

5.酪酰胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪酰胺工作溶液,并在室温下孵育5-10分钟。
注意:如果您观察到非特异性信号,可以缩短酪酰胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪酰胺。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂,如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪酰胺标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660

 

试剂应用文献

Antibody-Driven Proximity Labeling in Fixed Tissues
Authors: Bar, Daniel Z and Collins, Francis S
Journal: (2019): 73–81

 

参考文献

Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescent Enhancement
Authors: Faget L, Hnasko TS.
Journal: Methods Mol Biol (2015): 161
 
Enhanced detection of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus in fixed tissues by in situ hybridization following tyramide signal amplification
Authors: Trang NT, Hirai T, Ngan PH, Lan NT, Fuke N, Toyama K, Yamamoto T, Yamaguchi R.
Journal: J Vet Diagn Invest (2015): 326
 
Rapid and sensitive detection of Escherichia coli O157:H7 in milk and ground beef using magnetic bead-based immunoassay coupled with tyramide signal amplification
Authors: Aydin M, Herzig GP, Jeong KC, Dunigan S, Shah P, Ahn S.
Journal: J Food Prot (2014): 100
 
Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis
Authors: Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC.
Journal: Methods (2014): 46
 
KSHV cell attachment sites revealed by ultra sensitive tyramide signal amplification (TSA) localize to membrane microdomains that are up-regulated on mitotic cells
Authors: Garrigues HJ, Rubinchikova YE, Rose TM.
Journal: Virology (2014): 75
 
Sensitive whole-mount fluorescent in situ hybridization in zebrafish using enhanced tyramide signal amplification
Authors: Lauter G, Soll I, Hauptmann G.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 175
 
Characterization of GABAergic neurons in the mouse lateral septum: a double fluorescence in situ hybridization and immunohistochemical study using tyramide signal amplification
Authors: Zhao C, Eisinger B, Gammie SC.
Journal: PLoS One (2013): e73750
 
Quantification of alpha-tubulin isotypes by sandwich ELISA with signal amplification through biotinyl-tyramide or immuno-PCR
Authors: Draberova E, Stegurova L, Sulimenko V, Hajkova Z, Draber P.
Journal: J Immunol Methods (2013): 63
 
Pitfalls using tyramide signal amplification (TSA) in the mouse gastrointestinal tract: endogenous streptavidin-binding sites lead to false positive staining
Authors: Horling L, Neuhuber WL, Raab M.
Journal: J Neurosci Methods (2012): 124
 
Integrated tyramide and polymerization-assisted signal amplification for a highly-sensitive immunoassay
Authors: Yuan L, Xu L, Liu S.
Journal: Anal Chem (2012): 10737

Cy3 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

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Cy3 酪胺价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

Cy3 酪胺

产品参数
Ex (nm) 555 Em (nm) 569
分子量 863.96 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cy3酪胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品,对于许多免疫组织化学(IHC)应用,传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是,有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明,酪胺信号放大(TSA)是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术,具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力,该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测,酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中,源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号,并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cy3酪胺。 

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Cy3/TRITC滤波片
Em: Cy3/TRITC滤波片
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy3/TRITC滤波片
实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液,在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

操作步骤

        在没有额外说明的情况下,所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液(1000X)加入适量的DMSO,制成1-5mM的酪胺储备液。
注意:未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存

2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液(1X):
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003%H2O2的缓冲液中。
注意:Tris Buffer,pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意:Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7%甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1%Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意:组织固定,脱蜡和再水化,根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。

4.过氧化物酶标记

4.1任选:通过在过氧化物酶猝灭溶液(例如3%过氧化氢)中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性,在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选:如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白,建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液(例如含有1%BSA的PBS)在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液,加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次,每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液,在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次,每次5分钟。

5.酪胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪胺工作溶液,并在室温下孵育5-10分钟。
注意:如果您观察到非特异性信号,可以缩短酪胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪胺。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂,如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪胺标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660

 

参考文献

Tyramide Signal-Amplified Immunofluorescence of MYCN and MYC in Human Tissue Specimens and Cell Line Cultures.
Authors: Schafer, Johanna M and Pietenpol, Jennifer A
Journal: Bio-protocol (2020): e3677
 
Cascade signal amplification for sensitive detection of exosomes by integrating tyramide and surface-initiated enzymatic polymerization.
Authors: Huang, Zhipeng and Lin, Qiuyuan and Yang, Bin and Ye, Xin and Chen, Hui and Weng, Wenhao and Kong, Jilie
Journal: Chemical communications (Cambridge, England) (2020): 12793-12796
 
Detection of Cytokine Receptors Using Tyramide Signal Amplification for Immunofluorescence.
Authors: Wang, Herui and Pangilinan, Ryan L and Zhu, Yan
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2020): 89-97
 
Characterizing the Tumor Immune Microenvironment with Tyramide-Based Multiplex Immunofluorescence.
Authors: Mori, Hidetoshi and Bolen, Jennifer and Schuetter, Louis and Massion, Pierre and Hoyt, Clifford C and VandenBerg, Scott and Esserman, Laura and Borowsky, Alexander D and Campbell, Michael J
Journal: Journal of mammary gland biology and neoplasia (2020): 417-432
 
Procedural Requirements and Recommendations for Multiplex Immunofluorescence Tyramide Signal Amplification Assays to Support Translational Oncology Studies.
Authors: Parra, Edwin Roger and Jiang, Mei and Solis, Luisa and Mino, Barbara and Laberiano, Caddie and Hernandez, Sharia and Gite, Swati and Verma, Anuj and Tetzlaff, Michael and Haymaker, Cara and Tamegnon, Auriole and Rodriguez-Canales, Jaime and Hoyd, Clifford and Bernachez, Chantale and Wistuba, Ignacio
Journal: Cancers (2020)
 
Sensitive Multiplexed Fluorescent In Situ Hybridization Using Enhanced Tyramide Signal Amplification and Its Combination with Immunofluorescent Protein Visualization in Zebrafish.
Authors: Lauter, Gilbert and Söll, Iris and Hauptmann, Giselbert
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2020): 397-409
 
Tyramide signal amplification mass spectrometry (TSA-MS) ratio identifies nuclear speckle proteins.
Authors: Dopie, Joseph and Sweredoski, Michael J and Moradian, Annie and Belmont, Andrew S
Journal: The Journal of cell biology (2020)
 
Highly Sensitive Detection of PCV2 Based on Tyramide Signals and GNPL Amplification.
Authors: Zhang, Shouping and Hu, Bin and Xia, Xiaojing and Xu, Yanzhao and Hang, Bolin and Jiang, Jinqing and Hu, Jianhe
Journal: Molecules (Basel, Switzerland) (2019)
 
An ultrasensitive electrochemical immunosensor for procalcitonin detection based on the gold nanoparticles-enhanced tyramide signal amplification strategy.
Authors: Liu, Pei and Li, Chao and Zhang, Ruixuan and Tang, Qing and Wei, Jia and Lu, Yan and Shen, Pingping
Journal: Biosensors & bioelectronics (2019): 543-550
 
A amperometric immunosensor for sensitive detection of circulating tumor cells using a tyramide signal amplification-based signal enhancement system.
Authors: Zhou, Xiaoyan and Li, Yujian and Wu, Haiping and Huang, Wei and Ju, Huangxian and Ding, Shijia
Journal: Biosensors & bioelectronics (2019): 88-94

Cy5 酪胺-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cy5 酪胺价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

Cy5 酪胺

产品参数
Ex (nm) 651 Em (nm) 670
分子量 890.00 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cy5酪酰胺是美国AAT Bioquest生产的Cy系列产品,对于许多免疫组织化学(IHC)应用,传统的酶促扩增程序足以实现足够的抗原检测。但是,有几个因素限制了这些程序的敏感性和实用性。事实证明,酪胺信号放大(TSA)是一种特别通用且功能强大的酶扩增技术,具有更高的检测灵敏度。 TSA基于HRP在低浓度过氧化氢存在下将含有标记酪胺的底物转化为氧化的高反应性自由基的能力,该自由基可与HRP处或附近的酪氨酸残基共价结合。为了实现大IHC检测,酪胺用荧光团预标记。每个过氧化物酶标记物的多个酪胺底物转换所赋予的信号放大转化了对低丰度靶标的超灵敏检测以及使用较少量的抗体和杂交探针。在免疫组织化学应用中,源自TSA方法的灵敏度增强允许增加一级抗体稀释以减少非特异性背景信号,并且可以克服由次优固定程序或低水平靶表达引起的弱免疫标记。 Cy5酪胺含有明亮的Cy5,可以使用标准的Cy5滤波片组轻松检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cy5酪酰胺。 

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Cy5滤波片组
Em: Cy5滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
滤波片: Cy5滤波片组
实验方案

样品染色示例

概述

1.固定/透化/阻断细胞或组织
2.在封闭缓冲液中加入一抗
3.加入HRP偶联的二抗
4.准备酪胺工作溶液,在室温下在细胞或组织中施用5-10分钟

操作步骤

        在没有额外说明的情况下,所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。该方案适用于细胞和组织染色。

1.制备储存溶液

Tyramide原液(1000X)加入适量的DMSO,制成1-5mM的酪酰胺储备液。
注意:未使用的Tyramide原液可以在2-8℃下储存

2.制备工作溶液

Tyramide工作溶液(1X):
将1μLTyramide原液加入1 mL含有0.003%H2O2的缓冲液中。
注意:Tris Buffer,pH = 7.4时可用于获得佳性能。
注意:Tyramide工作溶液应立即使用。

3.细胞固定和透化

3.1在室温下用PBS中的3.7%甲醛或多聚甲醛固定细胞或组织20分钟。
3.2用PBS冲洗细胞或组织两次。
3.3在室温下用0.1%Triton X-100溶液使细胞透化1-5分钟。
3.4用PBS冲洗细胞或组织两次。
注意:组织固定,脱蜡和再水化,根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水。根据需要使用优选的特定溶液/方案进行抗原修复。

4.过氧化物酶标记

4.1任选:通过在过氧化物酶猝灭溶液(例如3%过氧化氢)中孵育细胞或组织样品10分钟来淬灭内源性过氧化物酶活性,在室温下用PBS冲洗两次。 
4.2可选:如果使用HRP偶联的链霉抗生物素蛋白,建议通过生物素阻断缓冲液阻断内源性生物素。
4.3用优选的封闭溶液(例如含有1%BSA的PBS)在4℃下封闭30分钟。
4.4取出封闭溶液,加入在推荐抗体稀释液中稀释的一抗在室温下60分钟或在4°C下过夜。
4.5用PBS洗涤三次,每次5分钟。
4.6向每个样品中加入100μL二抗-HRP工作溶液,在室温下孵育60分钟。
注意孵育时间和浓度可根据信号强度而变化。
4.7用PBS洗涤三次,每次5分钟。

5.酪酰胺标记

5.1为每个样品准备并应用100μL酪酰胺工作溶液,并在室温下孵育5-10分钟。
注意:如果您观察到非特异性信号,可以缩短酪酰胺的孵育时间。您应该在不同的孵育时间点使用阳性和阴性对照样品优化孵育期。或者您可以在工作溶液中使用较低浓度的酪酰胺。
5.2用PBS冲洗三次。

6.荧光成像

1.根据需要对细胞或组织样本进行计数。AAT提供了一系列细胞核复染试剂,如表1所列。按照试剂提供的说明进行操作。
2.使用具有抗褪色特性的安装介质安装盖玻片。
3.使用适当的过滤器组可视化来自酪酰胺标签的信号。

表1.推荐用于核复染的产品

货号 产品名称 Ex/Em(nm)
17548 Nuclear Blue DCS1 350/461
17550 Nuclear Green DCS1 503/526
17551 Nuclear Orange DCS1 528/576
17552 Nuclear Red DCS1 642/660