月度归档：2022年07月

KPL荧光标记二抗种类繁多，如何选择？

发表于由

一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC, RRX, TR, PE, Rhodamine）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验，对于Western Blot和ELISA，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使Biotin/Avidin检测系统。其中荧光素是具有光致荧光特性的染料，荧光染料种类很多，目前常用于荧光标记二抗的主要有以下几种：

  • 异硫氰酸荧光素-Fluorescein Isothiocyanate (FITC)

FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。FITC分子量为389.4，较大吸收光波长为490～495nm，较大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。由于FITC是小分子化合物，每一个抗体可标记几个FITC分子，IgM通常用小分子的荧光素标记，如FITC、Cy3/5、Texas Red等。FITC荧光二抗主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。然而FITC的缺点是淬灭快，因此要和抗淬灭剂一起使用。

  • 四甲基异硫氰酸罗丹明-Tetramethyl Rhodamin Isothiocyanate(TRITC)，Rhodamine Red-X(RRX), Texas Red(TR)

这些罗丹明的衍生物耦联基团具有不同的吸收波长 (550, 570, 596nm)和较大发射波长（570, 590, 620nm）。在使用装有氪氩灯的激光共聚焦扫描显微镜作三标记的实验时，RRX尤其有用，可以和Cy2(或者FITC)和Cy5一起使用，因为RRX的发射波长在Cy2和Cy5中间，而且和这两者覆盖都很少，氪氩灯激发光为488nm，598nm和647nm，分别是Cy2(FITC), RRX和Cy5的理想激发波长。因为FITC和PE可以被氩灯的488nm波长激发, 在流式细胞仪中用FITC作双标，另一种用藻红蛋白（PE）耦联基团要比罗丹明好。TRITC为罗丹明的衍生物，呈紫红色粉末，较稳定，较大吸收光波长为 550nm，较大发射光波长为620nm，呈现橙红色荧光，与FITC的绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。因TRITC荧光淬灭慢，也可用于单独标记染色。

  • 菁类染料-Cyanine dyes(Cy2, Cy3, Cy5)

Cy2耦联基团激发波长为492nm，发光波长为510nm的绿色可见光。Cy2和FITC使用相同的滤波片。由于Cy2比FITC在光下更稳定，要避免使用含有磷酸化的苯二胺的封片剂，因为这种抗淬灭剂和Cy2反应，在染色片储存后会导致荧光微弱和扩散。Cy3和Cy5比其他的荧光团探针要更亮，更稳定，背景更弱。Cy3耦联基团激发光的较大波长为550nm，最强发射光为570nm。因为激发光和发射光波长很接近TRITC, 在荧光显微镜中，可使用和TRITC一样的滤波片。Cy3在氩光灯（514nm或528nm）下可以被激发出50％的光强，在氦氖灯（543nm）或者汞灯（546nm）下则约75％。Cy3可以和荧光素一起作双标。Cy3还可以和Cy5一起在共聚焦显微镜实验中作多标记。Cy5耦联基团的激发波长较大650nm，发光波长较大670nm。在氪氩灯（647nm）下它们可被激发出98％的荧光，在氦氖灯下（633nm）为63％。Cy5可以和很多其他的荧光基团一起用在多标记的实验中。由于它的较大发射波长在670nm，Cy5很难用裸眼观察，而且不能用汞灯作理想的激发。通常观察Cy5时采用具有合适激发光和远红外检测器的共聚焦显微镜，在水相封片剂中应当加入抗淬灭剂。使用传统的表面荧光显微镜时，不推荐使用Cy5。

  • 藻红蛋白或藻胆色素蛋白-Phycoerythrin(PE)

存在于被称为藻红的多聚微粒中，位于叶绿素的反应中心，在自然结构中，藻红蛋白吸收光能，吸收后转化成能量，供其发育生长。当藻红蛋白被分离和纯化后，其蛋白质变得具有很强的荧光，能吸收不同波长的光，发出亮红色的荧光，此时不再接受任何外来的光，也不能转移光能。藻红蛋白PE的吸收波长范围较广，较大的吸收波长为566nm，较大的发射波长为574nm。藻红蛋白作为荧光标记物具有以下优点：首先具有强的长波长激发和发射荧光，可避免来自其他生物材料荧光的干扰；并且具有极高的发射量子产率；另外PE具有非常高的水溶性而且与许多生物学或合成材料的多位点稳定交联。

注：由于观察荧光需要一定波长的激发光，必须根据实验室已有的仪器可发光的波段进行选择。另外注意多标记中对探针色彩区分程度的要求，例如，若丹明红-X (RRX)和德克萨斯红(TR)荧光素的区别就比四甲基若丹明（TRITC）或者Cy3的区别明显。如果对灵敏度有更高的要求，则Cy3和Cy5就比其他的荧光团探针要亮。

上海金畔生物科技有限公司代理的全球知名二抗和底物生产厂商Seracare（KPL）提供丰富的荧光标记二抗，可检测抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类等物种；另外，还有IgG、IgA、IgM以及IgG(Fc)、IgG(ab’)2等不同类型抗体。小编下面汇总了部分常用荧光二抗：

FITC

TRITC

Cy3

Cy5

PE

抗人

5230-0425

–

5230-0355

5230-0370

–

抗小鼠

5230-0427

5230-0336

5230-0364

5230-0376

–

抗大鼠

5230-0301

–

5230-0361

–

–

抗豚鼠

5230-0303

–

–

–

–

抗兔

5230-0426

5230-0332

5230-0359

5230-0372

–

抗猪

5230-0297

–

–

–

–

抗山羊

5230-0294

–

5230-0358

5230-0371

–

抗鹿

5230-0329

–

–

–

–

抗火鸡

5230-0327

–

–

–

–

抗鸡

5230-0325

–

–

5230-0379

–

抗鸭

5230-0326

–

–

–

–

抗马

5230-0320

–

–

–

–

抗猫

5230-0317

–

–

–

–

抗狗

5230-0314

–

–

–

–

抗牛

5230-0293

–

–

–

–

链和亲霉素

5270-0028

–

5270-0022

5270-0023

5270-0021

如对产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录官方网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

TMEM59L Polyclonal Antibody-赛默飞世尔科技Thermofisher

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    • 抗体名：

      TMEM59L Polyclonal Antibody

    • 靶点：

      TMEM59L

    • 浓度：

      0.63 mg/ml

    • 应用范围：

      Immunocytochemistry, Immunofluorescence, Western Blot

    • 宿主：

      Rabbit

    • 适应物种：

      Human, Mouse

    • 克隆性：

      单克隆

    • 保存条件：

      -20° C, Avoid Freeze/Thaw Cycles

    • 形态：

      Liquid

    • 亚型：

      IgG

    • 免疫原：

      Recombinant fragment corresponding to a region within amino acids 14 and 284 of Human TMEM59L

    • 规格：

      100 µL

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nunc

支原体污染解决方案， 给细胞更多的安全与保护

发表于由

什么是支原体？

支原体是一种大小介于细菌和病毒之间(最小直径 0.2μm)并独立生活的微生物，没有细胞壁，表面由胞质膜构成，约有 1%的支原体可通过滤菌器。支原体污染细胞后，培养液可不发生混浊，多数情况下细胞病理变化轻微或不显著。细微变化也可由于传代、换液而缓解，因此易被忽视。但个别严重者，可致细胞增殖缓慢，甚至从培养器皿脱落。支原体污染细胞后会影响下游试验结果。

为什么要重视细胞培养中的支原体污染？

1、污染率高：在细胞研究领域，支原体是臭名昭著的污染源，二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一，而目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究（许多曾发表在顶尖杂志上），表现出支原体污染的迹象；

2、影响日趋严重：虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效，但它会影响数百个基因的表达，并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染的数据中（淋巴瘤细胞），已经鉴定出 61 个被支原体改变的基因，干扰了实验结果。这无疑是对时间，资源，经费很大的浪费；

3、难察觉：支原体污染完全是不留痕迹的，污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响，无法用肉眼识别，除非采用专门的支原体检测方法检测；

4、污染源多：“草率操作”、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源；

5、难去除：支原体体积小，无细胞壁，约有 1%的支原体可通过过滤器，且一般抗生素根本无法有效抑制或者去除支原体，另外，部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果，从而影响细胞的状态；

6、重视程度日益增加：学术杂志发表实验结果需验证支原体污染影响，在国际上，支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一，同时也是有效规避支原体污染的重要方法之一。

世界性难题！！！！Nature 収布癿文献表明细胞研究领域中存在严重的支原体污染问题

Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a


如何保护细胞细胞不受支原体的污染？

上海金畔生物科技有限公司代理的德国 PanReac Applichem 所提供 Myco 系列支原体清除产品可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效地清除支原体污染，而且没有细胞毒性。另有支原体检测与预防系列产品可以给细胞提供更多的安全保护。

一、AppliChem 支原体清除系列

对于普通细胞系，遭受污染以后可以通过重新复苏，购买等途径更换样本，但是对于一些较难获得的珍贵样本，如干细胞，原代细胞，经过特殊处理的，或订购困难的细胞，一旦遭受支原体污染后，一定要马上进行处理。AppliChem研发的支原体清除的 Myco 系列产品，可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性，从而有效的清除支原体污染，并可以针对不同程度，不同细胞样本进行针对性处理，处理过程简单，对细胞不会造成任何副作用。

支原体污染解决方案， 给细胞更多的安全与保护

名称

主要成分

适用样本

使用斱法

Myco-3

（货号 A5240）

环丙沙星

贴壁细胞，可清除大多数支原体污染

100 倍稀释加入培养基，每 2-3 天换液，连续处理14天

Myco-1

（货号 A5222）

泰妙菌素

贴壁细胞，配合能解决顽固型支原体或者使用 Myco-3 处理停用后又出现支原体污染的情况

100 倍稀释加入培养基，与 Myco-2 配合使用。使用 Myco-1 处理 4 天后换 Myco-2 处理 3 天，如此重复 2-3 次即可

Myco-2

（货号 A5233）

二甲胺四环素

二、AppliChem 细胞污染预防系列

有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防，如工作环境定期消毒处理，严格实验操作，保证器皿无菌等各方面。在实验室中，CO2 培养箱，CO2 培养箱水盘，水浴锅是非常重要的污染源。AppliChem 研发有系列污染预防系列产品专门针对这 3 大污染源，可有效预防真菌（及芽孢）、细菌、病毒等污染。使用方便，无腐蚀性，安全高效。
​支原体污染解决方案， 给细胞更多的安全与保护

名称

适用环境

预防微生物

使用斱法

Incubator-Clean

（货号 A5230）

CO2 培养箱， 工作等台等

支原体，真菌及芽孢、细菌、病毒（包拪 HIV，HBV 等）

即用型，喷雾处理完全湿润即可，无需转移出细胞，建议每 2 周处理一次

Incuwater-Clean

（货号 A5219）

C02 培养箱水盘

支原体，真菌及芽孢、细菌、病

毒（包拪 HIV，HBV 等）

100 倍稀释加入水盘灭菌水中，建议每 2-4 周更换灭菌水

Aquabator-Clean

（货号 A9390）

水浴锅

细菌，真菌

100 倍稀释加入水浴锅，建议每 1-2 周吐水浴锅加入一次，每 4-6 周给水浴锅更换一次水

三、Applichem 支原体检测系列

传统的支原体检测方法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA 荧光染色检测以及 PCR 检测，除 PCR 检测方法以外，其他检测方法大多耗时长，要求检测人员具有丰富的经验，并且无法获得足够的灵敏度和特异性，对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。

AppliChem 设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于 PCR 方法，根据支原体 16S rRNA 保守序列设计引物，经过 PCR 反应扩增其 16S rRNA 片段，后采用琼脂糖电泳方法检测 270bp 条带。相对传统方法而言，具有强大优势：

  • 高灵敏度：敏感度高达 100~1000CFU/ml，仅需  要 0.5 – 1.0 ml 细胞上清样本即可检测；
  • 检测品种广泛：可检测常规品种，同时对于稀有  亚 种 也 能 同 效 检 测 ， 如 M. pneumoniae,  Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis,M.bovis，几乎覆盖自然界 80 余个品种；
  • 快速：操作时间只需 30 分钟，全程 5 个小时内  即可得到检测结果；
  • 可靠：试剂盒中包括有阳性对照 DNA，可保证  实验结果的可重复性，减小因操作带来的误差；
  • 安全性：无支原体培养过程，有效避免污染扩大。

支原体污染解决方案， 给细胞更多的安全与保护

支原体污染解决方案， 给细胞更多的安全与保护

产品型号

检测方法

适用仪器

试剂盒组分

PCR Mycoplasma Test Kit

（货号 A3744）

普通 PCR-电​泳检测

普通​ PCR 仪器

Reaction Mix Buffer Solution

Positive Template Control

qPCR Mycoplasma Test Kit

（货号 A9019）

荧光定量 PCR

LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®.

Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) Rehydration Buffer(BLUE)

Positive Control DNA(GREEN) Internal Control DNA(YELLOW) PCR Grade Water(WHITE)

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上海金畔生物科技有限公司是PanReac Applichem 中国一级代理，为用户提供完善的技术支持与售后服务。如对产品感兴趣欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

邀您参加第九届国际生物药大会暨展览会BioCon Expo 2022 （限量观展名额免费赠送）

发表于由

BioCon Expo 2022 第九届国际生物药大会暨展览会即将于2022年7月20-22日在杭州国际博览中心盛大开启。本届展会预计将有250余家展商参展，活动将设展示区、15+场细分论坛及开幕式等，围绕生物药多个细分品类（抗体蛋白-单抗/双抗/多抗/ADC/融合蛋白/重组蛋白药物、细胞治疗药物、基因治疗药物、核酸药物、新型疫苗、溶瘤病毒、血液制品、多肽类药物等）从立项BD到市场准入、从监管解析到申报策略、从原液到制剂，从质量分析到工艺开发，从临床前到临床，从CMC到生产供应链，从投融资到人才战略，展开精彩分享与研讨，推动行业的全速发展。

邀您参加第九届国际生物药大会暨展览会BioCon Expo 2022 （限量观展名额免费赠送）

会议信息

会议时间：2022年07月20日-22日

会议地点：中国·杭州·国际博览中心

上海金畔生物科技有限公司展位：E05
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同期论坛

邀您参加第九届国际生物药大会暨展览会BioCon Expo 2022 （限量观展名额免费赠送）

上海金畔生物科技有限公司再次受邀参展（展位E05），诚邀各位业内朋友莅临与交流！

免费观展名额赠送：扫码下方海报二维码关注上海金畔生物科技有限公司公众号“jinpanbio”回复“我要报名”，填写表单即有机会获取赠送参会名额。报名时间截止7月8日，名额有限，先到先得！

邀您参加第九届国际生物药大会暨展览会BioCon Expo 2022 （限量观展名额免费赠送）

上海金畔生物科技有限公司将展出丰富产品：

  • 细胞培养–细胞培养基基础成分，超滤植物蛋白胨，复合型细胞培养添加物，支原体预防/清除/检测试剂，无血清细胞冻存液，重组胰酶，泡沫稳定剂等；
  • 转染&药物筛选–CHOgro细胞瞬转系统，GMP级重组病毒生产转染试剂，高通量IgG快速定量检测试剂盒；
  • 纯化工艺–GMP级DENARASE全能核酸酶，药典级生化试剂（如Tris、Bis-tris、氨基酸、尿素等）；
  • 质量检测–HCP/HCD残留检测试剂盒，BSA/Protein A/核酸酶等工艺杂质残留检测试剂盒，病毒清除工艺验证试剂盒，免疫检测用抗体/底物；
  • 制剂辅料–高纯度、低内毒素、符合多国药典的注射级药用辅料（包括海藻糖、蔗糖、氨基酸、琥珀酸钠等），多个产品已在CDE备案注册，海藻糖和蔗糖处于激活状态；
  • 药物评价–血药浓度检测试剂盒，药物抗体检测试剂盒；
  • 高端仪器–数字PCR系统；
  • 技术服务–HCP抗体覆盖率验证服务（AAE与质谱方法），工艺专属HCP抗体/试剂盒开发服务。

展出产品涉及Cygnus、Pfanstiehl、Kerry、Applichem、KPL、Mirus、c-LEcta、ValitaCell、达普生物等数十个品牌。

上海金畔生物科技有限公司（Beijing XMJ Scientific Co., Ltd，以下简称上海金畔生物科技有限公司）由留美归国生物领域专业人士创办，专业服务生物制药企业16年，团队在制药原辅料供应领域积累了丰富的经验、熟悉国内外法规要求，除稳定供货外上海金畔生物科技有限公司熟悉并一直为客户提供必要的技术服务、支持文件与使用协调支持，配合国际国内审计并保持优秀审计记录，助力客户终产品顺利上市。

上海金畔生物科技有限公司现已是AppliChem、Kerry、Cygnus、Pfanstiehl、C-LEcta、Seracare等数十个品牌的中国一级代理或一级代理，整合了一条覆盖细胞培养、蛋白纯化、质量检测、制剂辅料等环节的优质产品线，公司自2020年起增加了数字PCR仪等高端仪器设备，可为客户提供一站式服务。

如对会议或者产品感兴趣，欢迎随时拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或了解更多信息。