Amplite 比色法醛类定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法，如HPLC-MS 或者GC-MS，这种方案成本昂贵、操作繁杂，不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒使用独特的染料，该染料与醛反应后形成荧光产物。本试剂盒提供灵敏的一步法醛类检测，检测灵敏，可以在100ul检测体积中能检测到1nmol的醛类。试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何额外步骤，就可以轻易地实现自动化。终反应信号可通过酶标仪在405或者550nm处方便地读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法醛类定量试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备酶反应（50μL）
2.添加2X AldeView 黄色工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30至60分钟
4.监测405或550 nm处的吸光度增加

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1醛标准溶液（10 mM）：
将1mL稀释缓冲液（组分D）加入到醛标准品（组分C）的小瓶中以制备10mM醛标准溶液。

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取10mM醛标准溶液，进行1:10稀释，得到1000μM醛标准溶液（AS7）。 然后进行1：3连续稀释，得到醛标准品（AS6-AS1）的剩余连续稀释液。

3.工作溶液

将5 mL测定溶液（组分B）加入AldeView 黄色（组分A）中，并充分混合。 注意：5 mL 2X AldeView 黄色反应混合物足以容纳1个平板。 反应混合物不稳定。 在2小时内使用。 注意：分析方案（组分B）具有潜在危险，处理时戴上手套。

样品分析

表1.白色/透明底96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品（AS1-AS7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：BSA和吐温20都会干扰测定，样品中使用低于0.001％的BSA和0.01％的吐温20。 注意：如果含醛样品来自酶反应，例如果糖-1,6-二磷酸酯和果糖-1,6-二磷酸醛缩酶，则根据需要制备50μL酶反应（对于384孔板25μL）。 将酶反应在37°C孵育至少1小时。 应根据需要优化酶反应的组分（例如，特定酶反应可能需要优化的缓冲系统）。 在大多数情况下，如果您没有优化的酶缓冲液，稀释缓冲液（组分D）也可用于运行酶反应。

2.在醛标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeView 黄色工作溶液，使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLAldeView 黄色工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.将反应混合物在室温下孵育30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在405或550 nm处监测吸光度的增加。 注意：不同浓度的醛可能会与AldeView 黄色形成不同的颜色。 在较低浓度下，405nm处的吸光度给出佳结果。 然而，在较高浓度下，吸光度倾向于移至550nm。

参考文献

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12–26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65–73

相关产品

Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。近年来对细胞膜脂类过氧化成醛的成因，活性以及毒性研究受到广泛的关注。快速地检测醛类在生物学研究、食品工业、化学研究和环境污染监督中都是一项非常重要的任务。有许多试剂和试剂盒都可以用来定量分析总醛含量。现存的醛类检测法大都基于分离法，如HPLC-MS 或者GC-MS，这种方案成本昂贵、操作繁杂，不适合高通量及经济型的检测要求。Amplite比色法醛类定量检测试剂盒 *蓝色* 利用独有的荧光染料与醛反应产生高亮的蓝色荧光产物。该比色试剂盒提供灵敏的即用即读模式，能检测到低至0-4uM的醛类。试剂盒可以用于96或384微孔板分析，并且无需任何分步骤，就可以轻易地实现自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法醛类定量试剂盒 蓝色。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备醛标准品和/或测试样品（50μL）
2.添加2X AldeView 蓝色工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育20分钟
4.添加AldeView 蓝色增强剂（50μL）
5.在室温下孵育20分钟
6.监测620nm处的吸光度增加

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C,避免反复冻融循环。
1.1醛标准溶液（10 mM）：
将1mL测定缓冲液（组分B）加入到醛标准品（组分D）的小瓶中以制备10mM醛标准溶液。

2.标准溶液

2.1醛标准溶液

取10mM醛标准溶液，在测定缓冲液（组分B）中以1：100的比例制备100μM醛标准溶液（AS7）。 取100μM醛标准溶液（AS7）并进行1：2连续稀释，得到连续稀释的醛标准品（AS6-AS1）和分析缓冲液（组分B）。

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶AldeView Blue（组分A）中，制成2X AldeView Blue工作溶液。 注意：对于一个板，5 mL 2X AldeView Blue工作溶液就足够了。 2X AldeView 蓝色工作溶液不稳定，好在2小时内使用。

样品分析

表1.在具有透明底部的白色96孔微孔板中的醛标准品和测试样品的布局。 AS =醛标准品（AS1-AS7,1.56至100μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备醛标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用12.5μL试剂代替50μL。

2.在醛标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中加入50μLAldeView Blue工作溶液，使总醛测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入12.5μLAldeView Blue工作溶液，总体积为25μL/孔。

3.在室温下孵育反应20-30分钟，避光。

4.每孔加入50μLAldeView Blue Enhancer（组分C）。 对于384孔板，每孔加入25μLAldeView Blue Enhancer。

5.在室温下孵育反应20分钟，避光。

6.使用吸光度读板仪在620至660 nm（大620 nm）下监测吸光度的增加。

参考文献

Aldehyde-mediated protein degradation is responsible for the inhibition of nucleotide excision repair by cigarette sidestream smoke
Authors: Guang Yang, Yukako Komaki, Yuko Ibuki
Journal: Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis (2018)

Biological Activity of Peptide-conjugated Polyion Complex Matrices Consisting of Alginate and Chitosan
Authors: Chikara Fujimori, Jun Kumai, Kyotaro Nakamura, Yingzi Gu, Fumihiko Katagiri, Kentaro Hozumi, Yamato Kikkawa, Motoyoshi Nomizu
Journal: Peptide Science (2016)

Hepatic Deficiency of Augmenter of Liver Regeneration Exacerbates Alcohol-Induced Liver Injury and Promotes Fibrosis in Mice
Authors: Sudhir Kumar, Jiang Wang, Richa Rani, Chandrashekhar R Gandhi
Journal: PloS one (2016): e0147864

Integrated self-assembling drug delivery system possessing dual responsive and active targeting for orthotopic ovarian cancer theranostics
Authors: Chun-Jui Lin, Chen-Hsiang Kuan, Li-Wen Wang, Hsi-Chin Wu, Yunching Chen, Chien-Wen Chang, Rih-Yang Huang, Tzu-Wei Wang
Journal: Biomaterials (2016): 12–26

Fiber-optic protease sensor based on the degradation of thin gelatin films
Authors: Bastien Schyrr, Stéphanie Boder-Pasche, Réal Ischer, Rita Smajda, Guy Voirin
Journal: Sensing and Bio-Sensing Research (2015): 65–73

相关产品

Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它参与许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病性血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症相关的生物事件。也许H₂O₂生物学引人入胜的方面是近的报道，抗体有能力将分子氧转化为过氧化氢，从而有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种反应物种将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。此Amplite 比色过氧化氢检测试剂盒使用我们独特的Amplite IR过氧化物酶底物来定量溶液和细胞提取液中的过氧化氢。在过氧化氢氧化时，无色的Amplite IR产生强烈的蓝色产物，其pH值与pH 4至10无关。现有比色法过氧化氢分析（来自其他供应商）通常具有严重的样品干扰，这些样品干扰是由生物样品的固有吸收。 Amplite IR产品的近红外吸收大限度地减少了测定背景，因为生物样品很少吸收超过600 nm的光。它也可以用于通过酶偶联反应检测各种氧化酶活性。该试剂盒是与HTS液体处理仪器兼容的优化“混合和读取”分析。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法过氧化氢检测试剂盒。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备H₂O₂工作溶液（50μL）
2.添加H₂O₂标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-60分钟
4.监测650 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Amplite IR过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite IR过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中。

2.过氧化物酶原液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

3. H₂O₂标准溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中。 注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

H₂O₂标准
将5μL20mM H₂O₂标准溶液加入995μL测定缓冲液（组分C）中，得到100μM H₂O₂标准品（HS7）。 取200μL100μM H₂O₂标准品进行1：2连续稀释，得到 H₂O₂标准品（HS6-HS1）的连续稀释液。

3.工作溶液

将50μLEKYellow 储备液和50μL肠激酶底物储备液加入5 mL分析缓冲液（组分C）中; 混合均匀，制成肠激酶（EK）工作溶液（组分A + B + C）。 注意：对于一个96孔板，测定混合物就足够了。 它不稳定，立即使用。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔板中H2O2标准品和测试样品的布局。 HS = H2O2标准品（HS1-HS7,1.563至100μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.H₂O₂测定上清液反应

1.1根据表1和2中提供的布局制备H2O2标准品（HS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLH₂O₂工作溶液，使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLH₂O₂工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

1.4用吸光度读板仪在650nm处监测吸光度。

H₂O₂测定细胞
Amplite 比色过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。以下是建议的说明书，可以进行修改以满足特定的研究需求。

除了应使用细胞培养系统中使用的培养基替换测定缓冲液（组分C）外，应按照给定的方式制备H₂O₂细胞工作溶液。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）; （b）中。汉克斯平衡盐溶液（HBSS）;或（c）无血清培养基。

在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要细胞。注意：包括阴性对照（单独的培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

向细胞和H₂O₂标准品的每个孔中加入50μL H₂O₂细胞工作溶液，使总H2O2测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLH₂O₂细胞工作溶液，总体积为50μL/孔。

在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

用吸光度读板仪在650nm处监测吸光度。

参考文献

Plasma-activated medium selectively eliminates undifferentiated human induced pluripotent stem cells
Authors: Ryo Matsumoto, Kazunori Shimizu, Takunori Nagashima, Hiromasa Tanaka, Masaaki Mizuno, Fumitaka Kikkawa, Masaru Hori, Hiroyuki Honda
Journal: Regenerative Therapy (2016): 55–63

相关产品

Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 蓝色底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到HRP小瓶（组分D）中以制备20U / mL HRP储备溶液。

1.3 H₂O₂溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂溶液。 注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液（组分C）中，得到300mU / mL的HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 – SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液（100X）和50μL的H₂O₂储备溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析缓冲液（组分C）中，使总体积为5 mL的HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。

参考文献

Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
Authors: Almeida LE, Imasato H, Tabak M.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 216

Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295

Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547

Vesicular transport route of horseradish C1a peroxidase is regulated by N- and C-terminal propeptides in tobacco cells
Authors: Matsui T, Nakayama H, Yoshida K, Shinmyo A.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol (2003): 517

Development of a novel enzyme/prodrug combination for gene therapy of cancer: horseradish peroxidase/indole-3-acetic acid
Authors: Greco O, Folkes LK, Wardman P, Tozer GM, Dachs GU.
Journal: Cancer Gene Ther (2000): 1414

Preparation, morphological characterization, and activity of thin films of horseradish peroxidase
Authors: Vianello F, Zennaro L, Di Paolo ML, Rigo A, Malacarne C, Scarpa M.
Journal: Biotechnol Bioeng (2000): 488

Synthesis and purification of horseradish peroxidase-labeled oligonucleotides for tyramide-based fluorescence in situ hybridization
Authors: van Gijlswijk RP, van de Corput MP, Bezrookove V, Wiegant J, Tanke HJ, Raap AK.
Journal: Histochem Cell Biol (2000): 175

Evidence for free radical formation during the oxidation of 2′-7′-dichlorofluorescin to the fluorescent dye 2′-7′-dichlorofluorescein by horseradish peroxidase: possible implications for oxidative stress measurements
Authors: Rota C, Chignell CF, Mason RP.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 873

In situ identification of cyanobacteria with horseradish peroxidase-labeled, rRNA-targeted oligonucleotide probes
Authors: Schonhuber W, Zarda B, Eix S, Rippka R, Herdman M, Ludwig W, Amann R.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 1259

Relative number of cells projecting from contralateral and ipsilateral nucleus isthmi to loci in the optic tectum is dependent on visuotopic location: horseradish peroxidase study in the leopard frog
Authors: Dudkin EA, Gruberg ER.
Journal: J Comp Neurol (1999): 212

相关产品

Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测葡萄糖-6-磷酸的试剂盒，Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于葡萄糖-6-磷酸（G6P）是葡萄糖转运到细胞中的关键中间体。 G6P也可以转化为糖原或淀粉，用于储存在肝脏和肌肉中。 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）利用G6P产生NADPH形式的还原当量。 这在G6PDH缺乏导致溶血性贫血的红细胞中尤为重要。 AAT Bioquest的Amplite™比色葡萄糖-6-磷酸盐检测试剂盒为检测生物样品（如血清，血浆，尿液）以及细胞培养样品中的G6P提供了一种简单，灵敏，快速的方法。 在偶联酶测定中，G6P浓度与NADPH成比例相关，NADPH由显色NADPH传感器特异性监测。 吸收信号可以通过吸收酶标仪在~575nm处读取。 使用Amplite™G6P检测试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测低至1μM的G6P。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法葡萄糖-6-磷酸检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例

概述

制备G6P测定混合物（50μL）

加入G6P标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻试剂盒组分

操作方法

1.准备NADP储备溶液（100X）：

向小瓶中加入100μLH2O（组分C）以制备100X NADP储备溶液。

2.准备G6P原液：

将100μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到G6P标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM G6P标准溶液。

注意：未使用的G6P标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在冰箱中。

3.准备G6P标准品的系列稀释液（0至100μM）：

3.1将10μLG6P储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM G6P标准溶液。 然后将10μL的1mM G6P储备溶液加入990L 1x PBS缓冲液中以产生100μMG6P标准溶液。

注意：稀释的G6P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1 mM G6P标准溶液进行1：3连续稀释，得到30,10,3,1,0.3,0.1和0μM的G6P标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将G6P标准品和含有G6P的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

4.准备G6P分析混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAP原液（100X，步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种G6P测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行G6P检测：

5.1将50μLG6P测定混合物（来自步骤4.2）加入G6P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3使用吸光度板读数器在A575nm / A605nm处检测吸光度比率的增加。

参考文献

The microsomal enzyme 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase 3 faces the cytoplasm and uses NADPH generated by glucose-6-phosphate dehydrogenase
Authors: Legeza B, Balazs Z, Nashev LG, Odermatt A.
Journal: Endocrinology (2013): 205

A novel cytofluorometric assay for the detection and quantification of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency
Authors: Shah SS, Diakite SA, Traore K, Diakite M, Kwiatkowski DP, Rockett KA, Wellems TE, Fairhurst RM.
Journal: Sci Rep (2012): 299

Effects of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency on the metabolic and cardiac responses to obesogenic or high-fructose diets
Authors: Hecker PA, Mapanga RF, Kimar CP, Ribeiro RF, Jr., Brown BH, O’Connell KA, Cox JW, Shekar KC, Asemu G, Essop MF, Stanley WC.
Journal: Am J Physiol Endocrinol Metab (2012): E959

Effects of laparoscopic Roux-en-Y gastric bypass on glucose-6 phosphate dehydrogenase activity in obese type 2 diabetics
Authors: Schneider AM, Rawat D, Weinstein LS, Gupte SA, Richards WO.
Journal: Surg Endosc (2012): 823

High prevalence of hemoglobin disorders and glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD) deficiency in the Republic of Guinea (West Africa)
Authors: Millimono TS, Loua KM, Rath SL, Relvas L, Bento C, Diakite M, Jarvis M, Daries N, Ribeiro LM, Manco L, Kaeda JS.
Journal: Hemoglobin (2012): 25

Molecular characterization of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficient variants in Baghdad city – Iraq
Authors: Al-Musawi BM, Al-Allawi N, Abdul-Majeed BA, Eissa AA, Jubrael JM, Hamamy H.
Journal: BMC Blood Disord (2012): 4

Alternative targeting of Arabidopsis plastidic glucose-6-phosphate dehydrogenase G6PD1 involves cysteine-dependent interaction with G6PD4 in the cytosol
Authors: Meyer T, Holscher C, Schwoppe C, von Schaewen A.
Journal: Plant J (2011): 745

Frequency of glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in malaria patients from six African countries enrolled in two randomized anti-malarial clinical trials
Authors: Carter N, Pamba A, Duparc S, Waitumbi JN.
Journal: Malar J (2011): 241

Glucose-6-phosphate dehydrogenase status and severity of malarial anaemia in Nigerian children
Authors: Orimadegun AE, Sodeinde O.
Journal: J Infect Dev Ctries (2011): 792

Implementation and analysis of a pilot in-hospital newborn screening program for glucose-6-phosphate dehydrogenase deficiency in the United States
Authors: Nock ML, Johnson EM, Krugman RR, Di Fiore JM, Fitzgerald S, Sandhaus LM, Walsh MC.
Journal: J Perinatol (2011): 112

相关产品

Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。 在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。 D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内主要取决于肾脏排泄。 D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。 D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。 血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中过度生长的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒（L＃乳酸检测Cat＃13814和13815，D-lactate检测Cat＃13810和13811）提供荧光和吸光度检测方法，用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。 生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。 在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过生色NADH传感器特异性监测。 通过吸光度酶标仪在~575nm或~A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号，以提高测定灵敏度。 使用这种Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的D-乳酸。 它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量D-乳酸的各种应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法D-乳酸检测试剂盒。 

适用仪器

96孔板测定示例

概述

制备D-乳酸测定混合物（50μL）

加入D-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。

2.准备D-乳酸储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微量培养板中。

4.准备D-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且混合均匀。

注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行D-乳酸测定：

5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

参考文献

Dendrobium huoshanense polysaccharide regionally regulates intestinal mucosal barriers function and intestinal microbiota in mice
Authors: Song-Zi Xie, Bing Liu, Hui-Yu Ye, Qiang-Ming Li, Li-Hua Pan, Xue-Qiang Zha, Jian Liu, Jun Duan, Jian-Ping Luo
Journal: Carbohydrate Polymers (2018)

Exploring the Probiotic and Compound Feed Fermentative Applications of Lactobacillus plantarum SK1305 Isolated from Korean Green Chili Pickled Pepper
Authors: Kai-Min Niu, Damini Kothari, Sang-Buem Cho, Sung-Gu Han, In-Geun Song, Sam-Churl Kim, Soo-Ki Kim
Journal: Probiotics and Antimicrobial Proteins (2018): 1–12

Arenobufagin inhibits prostate cancer epithelial-mesenchymal transition and metastasis by down-regulating β-catenin
Authors: Liping Chen, Weiqian Mai, Minfeng Chen, Jianyang Hu, Zhenjian Zhuo, Xueping Lei, Lijuan Deng, Junshan Liu, Nan Yao, Maohua Huang
Journal: Pharmacological Research (2017)

Fibroblast Activation Protein Alpha-Activated Tripeptide Bufadienolide Anti-tumor Prodrug with Reduced Cardiotoxicity
Authors: Li-Juan Deng, Long-Hai Wang, Cheng-Kang Peng, Yi-Bin Li, Mao-Hua Huang, Min-Feng Chen, Xue-Ping Lei, Ming Qi, Yun Cen, Wen-Cai Ye
Journal: Journal of Medicinal Chemistry (2017)

Neuronal Culture Microenvironments Determine Preferences in Bioenergetic Pathway Use
Authors: Juliane Sünwoldt, Bert Bosche, Andreas Meisel, Philipp Mergenthaler
Journal: Frontiers in Molecular Neuroscience (2017): 305

The use of KnockOut serum replacement (KSR) in three dimentional rat testicular cells co-culture model: An improved male reproductive toxicity testing system
Authors: Xiaofang Zhang, Lei Wang, Xiaodong Zhang, Lijun Ren, Wenjing Shi, Yijun Tian, Jiangbo Zhu, Tianbao Zhang
Journal: Food and Chemical Toxicology (2017)

High glucose and interleukin 1β-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells involves in down-regulation of monocarboxylate transporter 4
Authors: Dong Wang, Qingjie Wang, Gaoliang Yan, Yong Qiao, Ling Sun, Boqian Zhu, Chengchun Tang, Yuchun Gu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 607–614

Intracellular ATP decrease mediates NLRP3 inflammasome activation upon nigericin and crystal stimulation
Authors: Johji Nomura, Alexander So, Mizuho Tamura, Nathalie Busso
Journal: The Journal of Immunology (2015): 5718–5724

相关产品

Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测乳酸的试剂盒，乳酸是手性的并且具有两种光学异构体：L-乳酸和D-乳酸。在代谢和运动过程中，乳酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH）不断从丙酮酸产生。 监测乳酸水平是评估组织需氧量和利用率之间平衡的好方法，在研究细胞和动物生理学时非常有用。D-乳酸不被哺乳动物代谢，其从体内主要取决于肾脏排泄。D-和L-乳酸存在于许多发酵乳制品中，例如酸奶和奶酪，以及腌制蔬菜，腌制肉类和鱼类。D-和L-乳酸含量是食品的质量指标，如鸡蛋，牛奶，果汁和葡萄酒。血液中异常高浓度的D-乳酸通常是胃肠道中过度生长的反映。

AAT Bioquest的Amplite 乳酸盐检测试剂盒（L＃乳酸检测Cat＃13814和13815，D-lactate检测Cat＃13810和13811）提供荧光和吸光度检测方法，用于检测L-乳酸盐或D-乳酸盐。生物样品，如血清，血浆，尿液，以及细胞培养样品。在酶偶联测定中，乳酸与NADH成比例相关，其通过生色NADH传感器特异性监测。通过吸光度酶标仪在~575nm或~55075nm / A605nm的吸光度比下可以容易地读取信号，以提高测定灵敏度。使用此Colorimetric Amplite L-乳酸测定试剂盒，我们能够在100μL反应体积中检测到低至4μM的L-乳酸。它应用广泛，可以很容易地适用于需要测量L-乳酸的各种应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法L-乳酸检测试剂盒。

适用仪器

96孔板测定示例

概述

制备L-乳酸测定混合物（50μL）

加入L-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100×NAD储备溶液。

2.准备L-乳酸盐储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入L-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的L-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

3.准备L-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLL-乳酸盐储备液（来自步骤2）加入990L PBS缓冲液中，以产生1mM L-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的L-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM L-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到L-Lactate标准品的300,100,30,10,3,1和0μM连续稀释液。

3.3如表1和2中所述，将L-乳酸盐标准品和含L-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微孔板中。

4.制备L-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备溶液（100X，来自步骤1）加入到组分A的瓶子中（来自步骤4.1），并充分混合。

注意：这种L-乳酸盐测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的L-乳酸盐测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

5.运行L-乳酸测定：

5.1将50μLL-乳酸盐测定混合物（来自步骤4.2）添加至L-乳酸盐标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中以使得总L-乳酸盐测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，在每个孔中加入25μL样品和25μLL-乳酸盐测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。

参考文献

Exploring the Probiotic and Compound Feed Fermentative Applications of Lactobacillus plantarum SK1305 Isolated from Korean Green Chili Pickled Pepper
Authors: Kai-Min Niu, Damini Kothari, Sang-Buem Cho, Sung-Gu Han, In-Geun Song, Sam-Churl Kim, Soo-Ki Kim
Journal: Probiotics and Antimicrobial Proteins (2018): 1–12

Hypoxia induces lactate secretion and glycolytic efflux by downregulating mitochondrial pyruvate carrier levels in human umbilical vein endothelial cells
Authors: Dong Wang, Qingjie Wang, Gaoliang Yan, Yong Qiao, Boqian Zhu, Bo Liu, Chengchun Tang
Journal: Molecular medicine reports (2018)

Arenobufagin inhibits prostate cancer epithelial-mesenchymal transition and metastasis by down-regulating β-catenin
Authors: Liping Chen, Weiqian Mai, Minfeng Chen, Jianyang Hu, Zhenjian Zhuo, Xueping Lei, Lijuan Deng, Junshan Liu, Nan Yao, Maohua Huang
Journal: Pharmacological Research (2017)

Fibroblast Activation Protein Alpha-Activated Tripeptide Bufadienolide Anti-tumor Prodrug with Reduced Cardiotoxicity
Authors: Li-Juan Deng, Long-Hai Wang, Cheng-Kang Peng, Yi-Bin Li, Mao-Hua Huang, Min-Feng Chen, Xue-Ping Lei, Ming Qi, Yun Cen, Wen-Cai Ye
Journal: Journal of Medicinal Chemistry (2017)

Neuronal Culture Microenvironments Determine Preferences in Bioenergetic Pathway Use
Authors: Juliane Sünwoldt, Bert Bosche, Andreas Meisel, Philipp Mergenthaler
Journal: Frontiers in Molecular Neuroscience (2017): 305

The use of KnockOut serum replacement (KSR) in three dimentional rat testicular cells co-culture model: An improved male reproductive toxicity testing system
Authors: Xiaofang Zhang, Lei Wang, Xiaodong Zhang, Lijun Ren, Wenjing Shi, Yijun Tian, Jiangbo Zhu, Tianbao Zhang
Journal: Food and Chemical Toxicology (2017)

High glucose and interleukin 1β-induced apoptosis in human umbilical vein endothelial cells involves in down-regulation of monocarboxylate transporter 4
Authors: Dong Wang, Qingjie Wang, Gaoliang Yan, Yong Qiao, Ling Sun, Boqian Zhu, Chengchun Tang, Yuchun Gu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 607–614

Intracellular ATP decrease mediates NLRP3 inflammasome activation upon nigericin and crystal stimulation
Authors: Johji Nomura, Alexander So, Mizuho Tamura, Nathalie Busso
Journal: The Journal of Immunology (2015): 5718–5724

相关产品

Amplite 比色法L-丙氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒，L-丙氨酸（L-Ala）作为重要蛋白质的构建块起着至关重要的作用。 L-丙氨酸主要由来自乳酸的肌肉细胞合成并通过肝脏吸收到血液中。 它被谷氨酸丙酮酸转氨酶转化为丙酮酸，进入代谢主流。 L-Ala对葡萄糖的产生和血糖管理至关重要，并且对免疫系统和肾结石的预防起着重要作用。 L-丙氨酸缺乏通常表示营养不良，低蛋白饮食和压力。 AAT Bioquest的Amplite 比色法L-丙氨酸测定试剂盒提供了一种灵敏的比色测定方法，用于量化生物样品中的L-丙氨酸。 它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可在575 nm的吸光度酶标仪上通过Quest Fluor L-丙氨酸传感器检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法L-丙氨酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
2.添加L-丙氨酸标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.检测575 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸探针（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液。

1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸标准溶液（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸标准溶液。

2.标准溶液

L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7）。取100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7），并在PBS中进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的L-丙氨酸标准溶液（AS6-AS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。

3.2 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix2和25 uL的200X L-丙氨酸探针储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中，并充分混合以制成L-丙氨酸工作溶液。 注意：L-丙氨酸工作溶液不稳定-请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.563至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。

3.将反应液在37°C孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。

参考文献

Reactivity of beta-methylamino-L-alanine in complex sample matrixes complicating detection and quantification by mass spectrometry
Authors: Glover WB, Liberto CM, McNeil WS, Banack SA, Shipley PR, Murch SJ.
Journal: Anal Chem (2012): 7946

Synthesis and characterization of silver/alanine nanocomposites for radiation detection in medical applications: the influence of particle size on the detection properties
Authors: Guidelli EJ, Ramos AP, Zaniquelli ME, Nicolucci P, Baffa O.
Journal: Nanoscale (2012): 2884

Detection of farnesyltransferase interface hot spots through computational alanine scanning mutagenesis
Authors: Perez MA, Sousa SF, Oliveira EF, Fernandes PA, Ramos MJ.
Journal: J Phys Chem B (2011): 15339

Molecular beacon based bioassay for highly sensitive and selective detection of nicotinamide adenine dinucleotide and the activity of alanine aminotransferase
Authors: Tang Z, Liu P, Ma C, Yang X, Wang K, Tan W, Lv X.
Journal: Anal Chem (2011): 2505

Highly specific substrates of proteinase 3 containing 3-(2-benzoxazol-5-yl)-l-alanine and their application for detection of this enzyme in human serum
Authors: Wysocka M, Lesner A, Guzow K, Kulczycka J, Legowska A, Wiczk W, Rolka K.
Journal: Anal Chem (2010): 3883

In-capillary derivatization and stacking electrophoretic analysis of gamma-aminobutyric acid and alanine in tea samples to redeem the detection after dilution to decrease matrix interference
Authors: Su YS, Lin YP, Cheng FC, Jen JF.
Journal: J Agric Food Chem (2010): 120

SAFETY study: alanine aminotransferase cutoff values are set too high for reliable detection of pediatric chronic liver disease
Authors: Schwimmer JB, Dunn W, Norman GJ, Pardee PE, Middleton MS, Kerkar N, Sirlin CB.
Journal: Gastroenterology (2010): 1357

[Rapid detection of alanine aminotransferase with near-infrared spectroscopy]
Authors: Huang FR, Zhang J, Luo YH, Li SP, Zheng SF, Chen XD.
Journal: Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi (2010): 2620

An electrochemical biosensor array for rapid detection of alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase
Authors: Song MJ, Yun DH, Hong SI.
Journal: Biosci Biotechnol Biochem (2009): 474

Detection of the mitochondrial and catalytically active alanine aminotransferase in human tissues and plasma
Authors: Glinghammar B, Rafter I, Lindstrom AK, Hedberg JJ, Andersson HB, Lindblom P, Berg AL, Cotgreave I.
Journal: Int J Mol Med (2009): 621

相关产品

Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测甘油的试剂盒，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物，和植物使用G3P产生ATP。 它用于再生脑和骨骼肌细胞中的NAD +。 G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。 Amplite G3P分析试剂盒提供了量化G3P灵敏的方法之一。 该试剂盒使用Amplite Red底物来量化G3P的浓度，其与酶偶联反应循环中形成的过氧化氢的浓度成比例。 该试剂盒是与HTS应用兼容的优化“混合和读取”格式。 如图1所示，它可在100μL检测体积内检测到12.5μMG3P。检测方法可以使用方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。 使用吸光度酶标仪可以在〜576 +/- 5 nm处轻松读取信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.制备3-磷酸甘油工作溶液（50 µL）
2.加入3-磷酸甘油标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm OD处的吸光度增加

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 G3P标准溶液（10 mM）：
将250 µL ddH₂O加到G3P标准品（组分D）的小瓶中，制成10 mM G3P标准品溶液。

2.标准溶液配制

G3P标准
将100 µL 10 mM G3P标准储备液添加到900 µL 1X PBS缓冲液中，以生成1000 µM G3P标准溶液。 将200 µL的1000 µM G3P标准溶液加入800 µL的1X PBS缓冲液中，以生成200 µM的G3P标准溶液（CS7），然后进行1：2的系列稀释，以得到其余的G3P标准液（CS6-CS1）。 注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到瓶酶混合液（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液（200X）加入同一瓶酶混合液（组分B）中，制成G3P工作溶液（终瓶应包含组分A，B和C）。 注意：应立即使用G3P工作溶液，并远离光线。

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板中的G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准（CS1-CS7，6.25至200 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将G3P标准品（CS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底部/黑色壁微孔板中。对于384孔板，请使用 每孔25 µL试剂，而不是50 µL。 注意：根据需要处理细胞或组织。

2.在G3P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液，以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G3P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.在避光的条件下，将反应在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm（或570 nm / 610 nm的比率）处监控吸光度的增加。

参考文献

CCAAT/enhancer binding protein-beta negatively regulates the expression of glycerol-3-phosphate dehydrogenase 1 in pig PK-15 cells
Authors: Gao Y, Pan Y.
Journal: J Appl Genet (2011): 451

Interaction of fosfomycin with the glycerol 3-phosphate transporter of Escherichia coli
Authors: Santoro A, Cappello AR, Madeo M, Martello E, Iacopetta D, Dolce V.
Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 1323

Rickettsia prowazekii uses an sn-glycerol-3-phosphate dehydrogenase and a novel dihydroxyacetone phosphate transport system to supply triose phosphate for phospholipid biosynthesis
Authors: Frohlich KM, Roberts RA, Housley NA, Audia JP.
Journal: J Bacteriol (2010): 4281

Design and synthesis of small molecule glycerol 3-phosphate acyltransferase inhibitors
Authors: Wydysh EA, Medghalchi SM, Vadlamudi A, Townsend CA.
Journal: J Med Chem (2009): 3317

Effects of salinity changes on the growth of Dunaliella salina and its isozyme activities of glycerol-3-phosphate dehydrogenase
Authors: Chen H, Jiang JG, Wu GH.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 6178

The presence of distal and proximal promoters for rat mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase
Authors: Aneja KK, Guha P, Shilpi RY, Chakraborty S, Schramm LM, Haldar D.
Journal: Arch Biochem Biophys (2008): 35

Aging and acyl-CoA binding protein alter mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase activity
Authors: Kannan L, Knudsen J, Jolly CA.
Journal: Biochim Biophys Acta (2003): 12

CTP:glycerol 3-phosphate cytidylyltransferase (TarD) from Staphylococcus aureus catalyzes the cytidylyl transfer via an ordered Bi-Bi reaction mechanism with micromolar K(m) values
Authors: Badurina DS, Zolli-Juran M, Brown ED.
Journal: Biochim Biophys Acta (2003): 196

Stimulation of rat liver mitochondrial sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase by polymyxin B via enhanced extraction of lysophosphatidic acid
Authors: Roy A, Guha N, Veras ID, Chakraborty S, Haldar D.
Journal: Lipids (2003): 965

Purification and characterization of cytosolic glycerol-3-phosphate dehydrogenase from skeletal muscle of jerboa (Jaculus orientalis)
Authors: Berrada W, Naya A, Iddar A, Bourhim N.
Journal: Mol Cell Biochem (2002): 117

相关产品

Amplite 硫醇快速定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于硫醇定量的试剂盒，具有马来酰亚胺基团的各种交联剂广泛用于将蛋白质与蛋白质或蛋白质交联至其他生物分子。马来酰亚胺交联技术的关键点是与单一蛋白质或抗体连接的马来酰亚胺的定量。马来酰亚胺可以在302nm下通过分光光度法直接测定。然而，620M-1cm-1的小消光系数使得该测定不敏感，并且该测定由于在相同波长下的蛋白质吸光度而进一步复杂化。 AAT Bioquest的Amplite 快速比色马来酰亚胺定量试剂盒使用我们专有的马来酰亚胺传感器Maleimide Blue ，在~780nm处具有大吸光度，可快速准确地量化马来酰亚胺。该测定的原理是马来酰亚胺蓝 与马来酰亚胺连接的样品反应，并且所得产物通过单个旋转柱以除去过量的传感器。测量纯化产物的吸收光谱，并且可以从780nm和280nm（对于蛋白质）或260nm（对于寡核苷酸和核酸）的吸光度比计算马来酰亚胺与蛋白质的比率。这种Amplite 快速马来酰亚胺定量试剂盒可在传统的比色皿，NanoDrop 分光光度计或方便的96孔吸光板读数器中进行，带有UV透明板。该试剂盒已广泛用于从蛋白质，寡核苷酸和核酸样品中快速定量马来酰亚胺基团。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 硫醇快速定量试剂盒。

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）
2.添加GSH标准品或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10至60分钟
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加（截止= 515 nm）

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 GSH标准溶液（1 mM）：
将200μLddH2 O加入到GSH标准品（组分C）的小瓶中以制备1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液。

1.2 Thiolite Green原液（100X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到Thiolite Green（组分A）的小瓶中以制备100X Thiolite Green原液。

2.标准溶液配制
将30μL的1mM（1nmol /μL）GSH标准溶液加入到970μL的测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol /μL）GSH标准溶液。 取30μM（30 pmol /μL）GSH标准溶液，进行1：3连续稀释，得到用分析缓冲液（组分B）连续稀释的GSH标准品（SD7-SD1）。 注意：稀释的GSH标准溶液不稳定。 在4小时内使用。

3.工作溶液配制

将50μL100XThiolite Green原液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成GSH工作溶液。 注意：这种GSH工作溶液足以容纳一个96孔板。 在室温下不稳定，应在2小时内及时使用。 避免暴露在光线下。 注意：或者，可以通过按比例添加含有分析缓冲液（组分B）的100X Thiolite Green原液来制备GSH工作溶液。

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  –  SD7,0.014至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备GSH标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。 注意：根据需要处理细胞或组织样本。

2.向GSH标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLGSH工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLGSH工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应10至60分钟，避光。

4.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下监测荧光增加。

参考文献

Activation of transcription factors in human bronchial epithelial cells exposed to aqueous extracts of mainstream cigarette smoke in vitro
Authors: Takashi Sekine, Tadashi Hirata, Toshiki Mine, Yasuo Fukano
Journal: Toxicology mechanisms and methods (2016): 22–31

Amplite 比色法尿素定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。尿素是动物蛋白质和氨基酸代谢的终降解产物。它在肝脏中产生，由肾脏分泌并通过尿液排泄。尿素的测定在临床实验室中用于监测健康状况是非常有用的。血尿素氮（BUN）测试是尿素形式的血液中氮的量的量度，主要用于肌酸酐测试，以评估肾功能，帮助诊断肾脏疾病。我们的Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单灵敏的比色法，用于定量生物样品中的尿素浓度，如血清，血浆和尿液等。该分析基于尿素在分析缓冲液中的酶偶联反应，后生产出蓝色的产品。产生的颜色强度与样品中尿素的浓度成比例，其可以在660-670nm处比色测量。这种Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单的分析方法，可在150μL分析体积中检测低至10μM的尿素。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法尿素定量试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备尿素标准品或测试样品（50μL）
2.添加尿素工作液（50μL）
3.在室温或37°C孵育30-60分钟
4.添加分析缓冲液II
5.读取665 nm处的吸光度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. Assay Enzyme Mix储备液（100X）：
将100μLddH2 O加入到测定酶混合物（组分A）的小瓶中以制备100X测定酶混合物储备溶液。

2.标准溶液

2.1尿素标准
将1μL1.0M尿素标准品（组分D）加入999μLDPBS中以产生1.0mM标准尿素溶液（US7）。 取1.0mM尿素标准溶液进行1：3连续稀释，得到剩余的尿素标准溶液（US6-US1）。

3.工作溶液

将50μL重构的测定酶混合物储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液I（组分B）中以制备尿素工作溶液。 注意：尿素工作溶液应及时使用，避光。 随着储存时间的延长，测定灵敏度会降低。 建议使用新鲜尿素工作溶液以获得佳效果。

样品分析

表1.透明底部96孔微孔板中尿素标准品和测试样品的布局。 US =尿素标准（US1-US7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备尿素标准品（US），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向尿素标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL尿素工作溶液，使总尿素测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL尿素工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温或37°C下孵育反应30-60分钟，避光。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分C），使得总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每个孔中加入25μL测定缓冲液II（组分C），总测定体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育10-15分钟，并使用吸光度酶标仪监测660-670nm处的吸光度增加。注意：添加分析缓冲液II（组分C）后颜色变为黄色，孵育后尿素标准品或样品孔将显示蓝绿色。颜色的强度将在15-30分钟内达到大值，并且与尿素的浓度成比例。注意：终颜色在室温下稳定约1小时，颜色强度会随时间降低。

参考文献

A novel and sensitive resonance scattering assay for detection of urea in serum coupled urease catalytic reaction and NH4+ associated particle reaction
Authors: Liang A, Qin H, Zhou L, Zhang Y, Ouyang H, Wang P, Jiang Z.
Journal: Bioprocess Biosyst Eng (2011): 639

Dimethyl formamide-free, urea-NaCl fluorescence in situ hybridization assay for Staphylococcus aureus
Authors: Lawson TS, Connally RE, Vemulpad S, Piper JA.
Journal: Lett Appl Microbiol. (2011)

Evaluation of diuron (3-[3,4-dichlorophenyl]-1,1-dimethyl urea) in a two-stage mouse skin carcinogenesis assay
Authors: Ferrucio B, Franchi CA, Boldrin NF, de Oliveira ML, de Camargo JL.
Journal: Toxicol Pathol (2010): 756

Sample prep for proteomics of breast cancer: proteomics and gene ontology reveal dramatic differences in protein solubilization preferences of radioimmunoprecipitation assay and urea lysis buffers
Authors: Ngoka LC.
Journal: Proteome Sci (2008): 30

Immobilization of urease from pigeonpea (Cajanus cajan) on agar tablets and its application in urea assay
Authors: Mulagalapalli S, Kumar S, Kalathur RC, Kayastha AM.
Journal: Appl Biochem Biotechnol (2007): 291

Improvement of the decision efficiency of the accuracy profile by means of a desirability function for analytical methods validation. Application to a diacetyl-monoxime colorimetric assay used for the determination of urea in transdermal iontophoretic extracts
Authors: Rozet E, Wascotte V, Lecouturier N, Preat V, Dewe W, Boulanger B, Hubert P.
Journal: Anal Chim Acta (2007): 239

Enzymatic assay for determination of bicarbonate ion in plasma using urea amidolyase
Authors: Kimura S, Yamanishi H, Iyama S, Yamaguchi Y, Kanakura Y.
Journal: Clin Chim Acta (2003): 179

New enzymatic assay for serum urea nitrogen using urea amidolyase
Authors: Kimura S, Iyama S, Yamaguchi Y, Kanakura Y.
Journal: J Clin Lab Anal (2003): 52

Utilization of lacrimal urea assay in the monitoring of hemodialysis: conditions, limitations and lacrimal arginase characterization
Authors: Farkas A, Vamos R, Bajor T, Mullner N, Lazar A, Hraba A.
Journal: Exp Eye Res (2003): 183

Stool antigen assay (HpSA) is less reliable than urea breath test for post-treatment diagnosis of Helicobacter pylori infection
Authors: Bilardi C, Biagini R, Dulbecco P, Iiritano E, Gambaro C, Mele MR, Borro P, Tessieri L, Zentilin P, Mansi C, Vigneri S, Savarino V.
Journal: Aliment Pharmacol Ther (2002): 1733

相关产品

Amplite 比色法尿素定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。尿素是动物蛋白质和氨基酸代谢的终降解产物。它在肝脏中产生，由肾脏分泌并通过尿液排泄。尿素的测定在临床实验室中用于监测健康状况是非常有用的。血尿素氮（BUN）测试是尿素形式的血液中氮的量的量度，主要用于肌酸酐测试，以评估肾功能，帮助诊断肾脏疾病。我们的Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单灵敏的比色法，用于定量生物样品中的尿素浓度，如血清，血浆和尿液等。该分析基于尿素在分析缓冲液中的酶偶联反应，后生产出蓝色的产品。产生的颜色强度与样品中尿素的浓度成比例，其可以在660-670nm处比色测量。这种Amplite 比色尿素分析试剂盒提供了一种简单的分析方法，可在150μL分析体积中检测低至10μM的尿素。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法尿素定量试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备氯化铵标准品或测试样品（50μL）
2.添加分析缓冲液I（50μL）
3.在室温或37°C孵育5分钟
4.添加分析缓冲液II（50μL）
5.在室温下孵育30-60分钟
6.监测吸光度增加到660 – 670 nm

溶液制备 

1.标准溶液

1.1氯化铵标准
将1μL1.0M氯化铵标准品（组分C）加入999μLDPBS中，生成1000μM氯化铵标准溶液（AS7）。 取1000μM氯化铵标准溶液（AS7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的氯化铵标准品（AS6-AS1）和DPBS。

样品分析

表1.在96孔微孔板中的氯化铵标准品和测试样品的布局。 AS =氯化铵标准品（AS1-AS7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备氯化铵标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向每个氯化铵标准品，空白对照和测试样品的孔中加入50μL测定缓冲液I（组分A），使总测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL测定缓冲液I，总体积为50μL/孔。

3.将反应在室温或37℃下孵育5分钟。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分B）以使总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，每孔加入25μLAssayBuffer II，总体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育反应30-60分钟。

6.用吸光度酶标仪在660-670nm处监测吸光度的增加。注意：加入分析缓冲液II（组分B）后颜色变为黄色，含氯化铵标准品的孔或样品孵育后会显示蓝绿色。颜色的强度将在30-60分钟内达到大值。

参考文献

High pleural ammonia negatively interferes with the measurement of adenosine deaminase activity
Authors: Loh TP, Tan KM, Chew S, Chan DS.
Journal: BMJ Case Rep (2013)

Role of branched chain amino acids in cerebral ammonia homeostasis related to hepatic encephalopathy
Authors: Bak LK, Waagepetersen HS, Sorensen M, Ott P, Vilstrup H, Keiding S, Schousboe A.
Journal: Metab Brain Dis. (2013)

Systemic inflammation and ammonia in hepatic encephalopathy
Authors: Tranah TH, Vijay GK, Ryan JM, Shawcross DL.
Journal: Metab Brain Dis (2013): 1

A review of ammonia-oxidizing bacteria and archaea in Chinese soils
Authors: Shen JP, Zhang LM, Di HJ, He JZ.
Journal: Front Microbiol (2012): 296

Ammonia transport by terrestrial and aquatic insects
Authors: Weihrauch D, Donini A, O’Donnell MJ.
Journal: J Insect Physiol (2012): 473

Ammonia-lowering strategies for the treatment of hepatic encephalopathy
Authors: Rose CF.
Journal: Clin Pharmacol Ther (2012): 321

Catalytic mechanisms and biocatalytic applications of aspartate and methylaspartate ammonia lyases
Authors: de Villiers M, Puthan Veetil V, Raj H, de Villiers J, Poelarends GJ.
Journal: ACS Chem Biol (2012): 1618

Drivers of archaeal ammonia-oxidizing communities in soil
Authors: Zhalnina K, de Quadros PD, Camargo FA, Triplett EW.
Journal: Front Microbiol (2012): 210

Effect of Helicobacter pylori eradication on blood ammonia levels in cirrhotic patients: a systematic review
Authors: Qin SY, Jiang HX, Ning HJ, Nie HM, Tao L, Hu BL, Guo XY.
Journal: Hepatogastroenterology (2012): 2576

Is there in vivo evidence for amino acid shuttles carrying ammonia from neurons to astrocytes
Authors: Rothman DL, De Feyter HM, Maciejewski PK, Behar KL.
Journal: Neurochem Res (2012): 2597

相关产品

锌是一种必需的微量元素，在许多生物过程中起着重要作用。它是许多酶，蛋白质结构和遗传表达控制所必需的必需因子。锌的状态也会影响细胞分裂，生长，分化，发育和衰老的基本过程。缺锌的临床症状包括皮质炎，低下，腹泻，愈合不良，发育迟缓，性腺机能减退，胎儿生长障碍和畸形。在研究和发现中非常需要简单，直接和自动化的锌离子测量程序。 AAT Bioquest的Amplite 比色锌定量试剂盒使用我们专有的Zn-620 提供了一种检测生物样品中锌浓度的稳定方法，其中锌与探针结合，增强吸收在620 nm附近。在无锌溶液中，吸光度为480nm，而当锌离子与探针结合时，其在620nm处显示出大的增加（> 100倍）。锌的浓度可以用比色法测定，吸光度比为A610nm / A480nm。该检测方法可用于血清，血浆和尿液等生物样品，检测灵敏度为1μM。 AAT Bioquest的Amplite 荧光锌定量试剂盒（＃19000）更加灵敏，可用于检测低至0.1μM的Zn离子。

Zn²⁺检测样品分析方案

概述

测试样品（50μL）或Zn²⁺

添加锌探针试剂50μL

在室温下孵育5-10分钟读取A610nm / A480nm的吸光度比

操作步骤

1.ZnCl₂标准品和试样制剂：

1.1将10μL的100mM ZnCl₂标准溶液（组分C）加入990L测定缓冲液（组分B）中，得到1mM ZnCl₂标准溶液。

1.2将10μL的1mM锌标准溶液（组分C）加入到990L测定缓冲液（组分B）中，得到100μMZnCl₂标准溶液。

1.3取300μL的100μMZnCl2标准溶液（来自步骤1.2）进行1：2连续稀释，得到50,25,12.5,6.25,3.13,1.56和0μM连续稀释的ZnCl2标准品。

1.4用测定缓冲液（组分B）将测试样品稀释至5-100μM范围。加入50μLZnCl2标准品，稀释样品并对照到每个孔中，如说明书中的表1和2所示。

2.运行锌测定：

2.1将25μLZn-620（组分A）加入5 mL测定缓冲液（组分B）中以制备Zn测定混合物。 向ZnCl₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLZn测定混合物（参见说明书中步骤1.5，表1和2）以使总ZnCl₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

2.2在室温下孵育反应5-10分钟，避光。

2.3用吸光度读板仪在610 nm和480 nm处检测吸光度的增加。

参考文献

After oxidation, zinc nanoparticles lose their ability to enhance responses to odorants
Authors: Samantha Hagerty, Yasmine Daniels, Melissa Singletary, Oleg Pustovyy, Ludmila Globa, William A MacCrehan, Shin Muramoto, Gheorghe Stan, June W Lau, Edward E Morrison
Journal: BioMetals (2016): 1–14

相关产品

Amplite 比色法钙离子定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于钙离子定量的试剂盒，钙对所有生物体都是必不可少的，特别是在细胞生理学中，钙离子Ca²⁺进出细胞质的运动是许多细胞过程的信号。钙是人体中质量第五丰富的元素，它是一种具有许多功能的常见细胞离子信使，也可作为骨骼中的结构元素。钙在调节血管收缩和舒张，神经冲动传递，肌肉收缩和激素分泌中起重要作用。钙的血清水平在人体内的相当有限的范围（9至10.5mg / dL）内受到严密调节。低钙血症和高钙血症都是严重的医学疾病。低钙水平的原因包括慢性肾功能衰竭，维生素D缺乏和严重酒精中毒可能发生的低血镁水平。 Amplite 钙检测试剂盒提供了一种在生理溶液中检测钙的简单方法。该试剂盒使用我们的Calcium Blue 作为显色钙指示剂。其吸光度随钙结合而变化。 Calcium Blue 在中性pH范围内紧密结合钙，产生钙蓝色 – 钙复合物，在~650 nm处具有强烈的吸收。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法钙离子定量试剂盒。 

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

样品实验方案

简要概述

准备测试样品和钙标准溶液（50μL）
添加Calcium Blue 试剂（50μL）
在室温下孵育5-10分钟
监测600或650 nm处的吸光度强度

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
钙标准溶液（3 mM）：
将10μL标准钙（300mM）（组分C）加入到990μL稀释缓冲液（组分B）中以得到钙标准溶液（3mM）并充分混合。

2.钙标准溶液配制

操作步骤

表1.透明底96孔微孔板中钙标准品和测试样品的布局。

CS =钙标准（CS1-CS7）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

钙测定

将连续稀释的钙标准品从150μM加至2.34μM加入CS1至CS7的孔中，一式两份。

向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLCaliumBlue （组分A），使总钙测定体积达到100μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

血清或尿液样本的分析方案

表3.每个孔的试剂组成

钙测定

1.将1.5μM至0μM的连续稀释的钙标准品一式两份加入CS1至CS7的孔中。

2.向钙标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入200μL钙蓝™（组分A），使总钙测定体积达到210μL/孔。 注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μL测定反应混合物。

3.在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

4.用OD 600 nm或650 nm的吸光度板读数器监测吸光度强度。

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（吸光度）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算钙样品。 

参考文献

High efficiency single-step biomaterial-based microparticle fabrication via template-directed supramolecular coordination chemistry
Authors: Kwok Kei Lai, Reinhard Renneberg, Wing Cheung Mak
Journal: Green Chemistry (2016): 1715–1723

Microcystin-LR causes sexual hormone disturbance in male rat by targeting gonadotropin-releasing hormone neurons
Authors: Xueting Wang, Jie Ding, Zou Xiang, Peipei Jiang, Jing Du, Xiaodong Han
Journal: Toxicon (2016): 45–55

相关产品