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如何使用SialoPaper校准Periotron？

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如何使用SialoPaper校准Periotron？

1。在Periotron流量计的传感器之间放置一个空白的赛洛珀试纸条，调节仪器表面的调零刻度盘，直到显示屏上出现“零”（00）。然后将空白条从传感器之间取出并丢弃。

2。使用微升注射器（可准确输送1.0微升或更少量的液体），仪表上的读数与微升体积相关联，如下所示:      

3。用测试液（蒸馏水、唾液或血清）填充注射器至最大容量（1.0-5.0微升，取决于所选注射器的型号），确保装载的注射器中不含气泡。在针筒中小心按压柱塞以输送固定的体积

，例如0.35微升，其在注射器尖末端呈现为微小的液滴。毫不延迟地将唾液试纸条的平坦表面小心地与测试液滴接触。用注射器中的额外液体小心快速地重复该程序，直到总共

1微升测试液体被准确地输送到唾液试纸条上的3个不同区域。然后将试条放在Periotron传感器之间，使唾液分析仪的整个圆形部分覆盖Periotron仪器的下部传感器。记录数字读数

上的Periotron分数。用该体积（1.00微升）重复该程序三（3）次以上，并记录平均分。      

4。对以下每个（或类似的）已知体积重复该程序:0.5、2.0和3.0微升，并再次记录每个体积的佩里奥特龙分数。      

5。Periotron计算机程序计算将“x”轴上的流体体积（ul）与“y”轴上的Periotron分数相关联的标准曲线（点击这里查看关于标准曲线的文章).      

6。从口腔、小唾液腺、大唾液腺的导管开口或口腔软组织或硬组织表面取样含有未知量唾液的条。然后将其放置在传感器之间。记录Periotron评分，并通过从标准曲线插值确定液

体体积。Periotron Professional将获得的值转换为以ul为单位的体积。

如何为GCF校准Periotron Professional？

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如何为GCF校准Periotron Professional？

带有PerioCol收集条的校准曲线Periotron 制备标准曲线，将Periotron读数与微升流体体积相关联。

在Periotron流量计传感器之间插入空白PerioCol条，通过向左或向右旋转刻度盘将仪器读数设置为零（0）。一旦设置为零，丢弃空白试纸条。

使用可以精确输送0.25至1.25升流体的微升注射器，Periotron得分与体积（l）的关系如下:用测试流体填充注射器至容量（1.25 – 5.0升，取决于所选注射器的型号），确保装载的注射器不含气泡。测试液体是蒸馏水、唾液还是血清没有什么区别；结果基本相同，除了水在范围的上限。小心压下柱塞以输送0.25 l的液体，该液体在注射器以微小液滴的形式出现。立即将试纸末端接触测试液滴。请注意，它会立即被吸收到试纸上。再次毫不拖延地将条带放置在Periotron传感器之间。不久将显示一个Periotron分数。使用该体积（0.25 l）重复该步骤三（3）次以上，并记录平均分数。

使用0.5微升、0.75微升、1.0微升和1.25微升的体积重复上述步骤，并在每种情况下记录平均Periotron分数。

一旦获得所有体积的分数，Periotron Professional将计算一条标准曲线，将“x”轴上的流体体积（l）与“y”轴上的Periotron分数关联起来。请注意，校准通常只需设置一次。要检查校准是否没有或几乎没有随时间变化，只需测量两个（或多个）已知样品的体积。

放置一个含有未知体积流体的条（例如牙龈裂隙流体；GCF）或牙周袋液；PPF）之间，自动确定佩里奥特龙分数。流体体积（l）由标准校准曲线插值确定。

​如何清洁电极？

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​如何清洁电极？

如何清洁电极？

水和/或乙醇是常用于清洁电极的液体。从蒸馏水瓶中滴几滴蒸馏水到已经非常松散地卷起来的纸巾（纸巾）中间效果很好。两端充当把手。这可以在处于打开位置的电极之间轻轻

拉动。然后可以通过在电极之间移动纸巾的干燥部分来干燥电极。通过将上颚松弛地闭合在纸巾上，电极很容易变干。    

在组织的另一个干燥部分重复打开和关闭钳口将确保。在高读数（超过100左右）或在一系列读数（其中有或可能有一些残留的GCF）后，酒精棉签是清洁电极的一种简单方法。将

棉签放在电极之间。将上颚移至棉签可以在电极之间来回移动几次的位置。这将同时清洁两个电极。然后，打开钳口，用纸巾擦干。

如何选择正确的二抗？

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如何选择正确的二抗？

二级抗体用于几种免疫分析中，以检测一级抗体的存在。这些抗体与酶、生物分子或荧光染料结合，以检测一抗。与一级抗体不同，二级抗体是针对一级抗体的种类和同种型产生的，通过在多个位置与一级抗体结合来检测一级抗体。

为了成功选择您的第二抗体，您应该考虑以下因素:

确保匹配良好–宿主物种是产生第二抗体的动物，应始终与第一抗体的宿主不同。例如，如果您使用在兔子中产生的一抗，您将需要在不同于兔子的物种（如山羊、驴或小鼠）中产生的抗兔二抗（图1）。

如何选择正确的二抗？

完整抗体还是片段？–实际上，真正的问题应该是“您的主要抗体是单克隆抗体还是多克隆抗体？”这两个问题的答案通常取决于应用程序。单克隆一抗包含单一同种型的免疫球蛋白。因此，使用特异性识别同种型的二抗至关重要。此外，单克隆动物通常饲养在小鼠、兔和大鼠中。因此，如果主要单克隆抗体是小鼠IgG1，您将需要抗小鼠IgG或特异性较低的F（ab）片段抗小鼠IgG。抗体片段适合用于免疫组织化学和免疫荧光，因为它们的体积较小，能够穿透组织。然而，较小的大小可能会限制与片段结合的染料或酶的选择，导致二抗可能不如全抗体敏感。

多克隆一抗包含几种同种型免疫球蛋白g的混合物。因此，为了最大限度地检测目标，最好使用能识别所有同种型的二抗。多克隆抗体通常以全抗体形式（重链+轻链）饲养在兔、山羊、绵羊和驴中，因此第二宿主物种必须用来自不同物种的IgG池进行免疫，从而使纯化的第二抗体能够识别所有形式。例如，如果初级多克隆抗体是山羊IgG，您将需要抗山羊IgG（H+L）。然而，全抗体可能导致高背景和较低的特异性，因为所有免疫球蛋白共享轻链，这增加了交叉反应性（图2）。

如何选择正确的二抗？

根据您的应用选择共轭物-这取决于第二抗体如何检测信号。例如，免疫组织化学、ELISA和蛋白质印迹应用使用基于生物素标记的比色和化学发光检测来放大信号和提高灵敏度，以及与辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）作用的酶反应。然而，对于免疫标记、荧光显微镜和流式细胞仪实验，使用荧光染料如Alexa Fluor检测信号，这些荧光染料直接与抗体结合以放大信号和灵敏度。

亲和纯化抗体与交叉吸附抗体–该步骤用于提高抗体的特异性，并可在亲和纯化和交叉吸附中进行区分。大多数二抗通过亲和层析纯化，产生高亲和力抗体。这种抗体通常在IHC使用，因为它们产生最小的非特异性结合，也用于蛋白质印迹检测低丰度蛋白。交叉吸附的第二抗体通常经过额外的纯化步骤，以过滤掉与非靶免疫球蛋白种类结合的成员。这一步骤增加了它们的特异性并减少了非特异性背景。这些抗体是为免疫组织化学等特殊应用而设计的。

总之，二级抗体的选择取决于手头的应用和目标丰度所需的灵敏度和纯化水平以及非特异性结合的风险。

BMA是BMA Biomedicals的缩写，是一家位于瑞士北部巴塞尔地区的小型生物技术公司。

由一群免疫学家、生物化学家和生物学家于1989年创建，其主要活动领域是抗体的开发、生产和营销。2005年，BMA被Chemoforma Inc .收购，chemo forma Inc .是一家长期活跃于免疫支持饲料添加剂生产领域的商业合作伙伴。2013年，Chemoforma Inc .收购了总部位于加州的半岛实验室国际公司，该公司专门从事抗肽抗体和放射免疫分析。

BMA的主要专长在于抗体在免疫组织化学和酶免疫分析（ELISAs）中的应用。生产已适应无胎牛血清的培养基。这不仅是对可持续发展和动物福利的重要贡献，而且产品不含污染性牛抗体。它们通常仅供体外研究使用，但支持将适当的产品给诊断领域的公司。

BMA经营自己的设施，拥有先进的分析和生产基础设施。我们的技术诀窍在于单克隆和多克隆抗体的生产和衍生，以及它们在免疫学技术中的应用。BMA还许可外部组织的产品。这些产品可能处于早期开发阶段，最终将由公司进行生产更新。

BMA的产品范围以客户为导向，包括许多专注于有限或专业应用的产品。有些是由BMA自己生产的，有些是有大量出版记录的常规产品。

BMA的产品重点包括以下领域

  • 炎症和传染病
  • 止血
  • 肿瘤相关疾病
  • 兽医试剂，特别是抗猪组织的抗体

我如何使用PerioCol纸校准Periotron？

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我如何使用PerioCol纸校准Periotron？

1。空白PerioCol条放在Periotron流量表的传感器之间，调节仪器表面的调零刻度盘，直到显示屏上出现“零”（00）。然后将空白条从传感器之间取出并丢弃。  

2。使用微升注射器，可精确输送0.1至1.0微升 ml 对于液体，仪表上的读数与液体的体积有关 ml 如下所示:      

3。注射器被填充至最大容量（1.0-5.0ml，取决于所选注射器的型号）与测试流体（蒸馏水、唾液或血清；结果基本相同）确保装载的注射器不含气泡。在注射筒中小心压下柱塞，

以输送0.25m其在注射器前端以微小液滴的形式出现。毫不延迟地将PerioCol条的末端小心地与测试液滴接触，测试液滴立即被吸收到PerioCol条上。同样没有延迟，测试条被放置

在Periotron传感器之间，分数被自动记录。该程序以该体积（0.25）重复三（3）次 ml），并记录平均分数。      

4。对以下每个（或类似的）已知体积重复该过程:0.5、1.0和1.25ml，并再次记录每个体积的Periotron分数。    

5。Periotron计算机程序计算关于流体体积的标准曲线（ml）与“y”轴上的Periotron分数（点击这里查看关于标准曲线的文章).    

6。然后将含有未知液体体积（如GCF）的试条放在传感器之间，自动记录Periotron分数，并通过标准曲线插值确定液体体积。

如何为Sialo校准Periotron Professional？

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如何为Sialo校准Periotron Professional？

带有唾液收集条的校准曲线Periotron

在测定口腔湿度时，制备标准曲线，将Periotron读数与唾液体积（微升）相关联，并将获得的体积与唾液厚度（微米）相关联。

在Periotron流量计传感器之间插入空白唾液试纸条，并通过向左或向右旋转刻度盘将仪器读数设置为零（0）。调零后丢弃空白试纸条。

使用微升注射器（其可以精确地输送1.0升或更少的液体），Periotron得分与液体体积（l）的关系如下:用测试液体填充注射器至容量（1.0 – 5.0升，取决于所选注射器的型号），确保装载的注射器不含气泡。测试流体可以是蒸馏水、唾液或血清；结果是相同的，除了水在范围的上限有一点差异。小心压下柱塞以输送0.35 l的液体，该液体在注射器头部以微小液滴的形式出现。毫不延迟地将唾液试纸条的平坦表面小心地与测试液滴接触。使用注射器中的额外液体快速重复该程序，直到总共1 l的测试液体被准确地输送到唾液试纸条上的三（3）个独立区域。然后将试条放在Periotron 8000测量仪的传感器之间，使唾液分析仪的整个圆形部分覆盖Periotron仪器的下部传感器。然后记录数字读数上的Periotron分数。用该总体积（1 l）重复该程序三（3）次以上，并记录平均分。

使用0.5、1.5、2.0、2.5和3.0微升的体积重复上述步骤，并记录每个体积的平均Periotron分数。

获得所有体积的分数后，将其输入Periotron Professional，该软件将计算出一条标准曲线，将“x”轴上的液体体积（l）与“y”轴上的Periotron分数关联起来。请注意，通常只需要校准一次。要检查校准是否没有或几乎没有随时间变化，只需测量两个（或多个）已知样品的体积。

从口腔中取样含有未知量唾液的条，所述唾液来自一个或多个小唾液腺、大唾液腺的导管开口或口腔软组织或硬组织表面上的残留唾液。然后将其放置在传感器之间。记录Periotron评分，并通过从标准曲线插值确定液体体积。获得的值被转换为以l为单位的体积，对于残留唾液膜，其值被Periotron Professional转换为以m为单位的厚度。

如何使用Periotron？

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如何使用Periotron？

Periotron的设计允许使用各种纸条来收集牙龈裂隙（GCF）和牙周袋（PPF）液体、唾液流量和唾液厚度测量。

电源按钮

前面板上有一个带LED指示灯的圆形黑色电源按钮。按下这个按钮将打开或关闭佩里奥特龙。

电极

Periotron有两个用于测量湿度的电极。上电极是可移动的，由杠杆控制，下电极是固定的。关闭杠杆会将两个电极合在一起，并开始一个测量周期。预设时间（15秒）后，Periotron将显示一个数字。这个数字被称为Periotron得分，代表纸条上的液体量。佩里奥特龙分数可以转换为体积和厚度。

表示盘

三字符七段LED显示屏位于Periotron的前面板上。Periotron分数和错误代码将显示在这里。Periotron的正常运行得分在0到200之间。

模式开关（仅8000型）

模式开关位于标有PERIO/SIALO的Periotron后面板上。该开关将校准范围更改为适合所用收集纸类型的范围。模式状态由前面板上的LED指示（绿色表示Perio模式，黄色表示Sialo模式）。

调零

一个塑料指轮位于前面板上，用于将Periotron调节到零读数。当刚打开Periotron时，只需进行一次。零点调整是将Periotron校准到公共基线以获得准确结果所必需的。

RS-232串行端口（仅8000型）

一个9针串行端口位于Periotron的背面。通过在Periotron和IBM兼容计算机（PC）之间连接零调制解调器电缆，Periotron分数将自动发送到患者跟踪程序（Perio 2.52）。请注意，Windows 95、98、2000或Me操作系统不支持此端口.

SPRI 珠子如何工作？

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SPRI 珠子如何工作？

SPRI 技术是一种先进的方法，可根据核酸的类型和大小选择性、可逆地将核酸与顺磁珠结合。该技术在精确提取、纯化、清洁和尺寸选择核酸方面提供了高性能。

该技术于 20 世纪 90 年代由麻省理工学院怀特海德研究所开发，在人类基因组计划中发挥了至关重要的作用，特别是在桑格测序方案的 PCR 产物纯化中。

我们的基因组试剂利用了 SPRI 技术的力量，使他们能够生产高质量的核酸样本，并在基因组研究中提供可靠、准确的结果。生产的样品支持各种应用，例如 qPCR、ddPCR、桑格测序、下一代测序 (NGS) 和微阵列分析。

SPRI 珠的剖析

每个 SPRI 珠子的尺寸为 1 µm ± 8%，由一个有浮力的聚苯乙烯核心组成，周围环绕着一层薄薄的磁铁矿，使其具有顺磁性，并且易于通过磁场进行操作。 SPRI 珠子表面涂有羧基分子，为 DNA 结合提供电荷基团。

作为 SPRI 试剂的组成部分，SPRI 微珠为核酸结合提供了坚实的支持。我们的基因组试剂的两个主要特点有助于 SPRI 微珠发挥其功能：

  • 拥挤剂将特定大小的核酸从溶液中挤出。

  • 结合缓冲液提供盐离子并调节 pH 以促进核酸和珠子的结合。

是什么让 SPRI 微珠试剂不一样

主要特征 好处
顺磁珠 在液体处理机上轻松实现自动化，例如Biomek i 系列自动化工作站，无需离心或过滤
珠子尺寸均匀 高度可重复的结果
带负电的表面 用水溶液洗脱，不使用离液盐
非苯乙烯聚合物表面 低非特异性结合
高表面积质量比 增加结合能力
快速磁响应时间 快速纯化
尺寸优化 自动化应用的低沉降率

基于 SPRI 微珠的试剂工作流程

第一步：SPRI 珠子直接添加到样品反应中。在专有缓冲液存在的情况下，核酸与珠子表面结合。

第二步：使用磁场将微粒从溶液中拉出。污染物被吸出，微粒被清洗。

第三步：纯化的核酸在水性条件下很容易从微粒上洗脱下来，这为下游应用提供了最大的灵活性。

如何选择离心机

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如何选择离心机

离心机是一种旋转样品以根据密度分离样品成分的仪器。离心机的部件包括电机、转子和制冷装置（对于冷冻离心机）。将样品放置在离心机专用的试管中。然后将这些离心管放入转子中。转子是平衡的圆形转子，并在旋转轴周围布置有孔。这些孔固定离心管。

电机使转子高速旋转；从 300 转/分钟到 100,000 转/分钟。

离心机的速度以 RPM（每分钟转数）和 RCF（相对离心力）表示。 RCF 的单位为 xg 或乘以地球表面的重力。 RCF 与 RPM 相关，取决于样品到离心机转子中心的距离。在给定转速下，距旋转中心的距离越远，RCF 越高。

*离心力不是真实的力；它是运动物体保持运动的趋势、惯性和将样品固定在适当位置的向心力之间的相互作用：

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如何选择离心机

离心机的部件

  • 外壳 – 外壳容纳电机、转子和制冷装置（如果适用）

  • 电机 – 电机提供使样品在转子中旋转的动力

  • 制冷装置 – 有些离心机是制冷的，这些离心机中包含一个紧凑的制冷装置

  • 转子 – 转子固定离心管。转子上孔的尺寸设计用于处理标准离心管

  • 适配器 – 用于转子以减小孔的尺寸。适配器为较小的管子提供必要的支撑。

  • 离心管 – 离心管设计用于承受离心机产生的力。将样品放入试管中并将试管放入转子中

微量离心机

微量离心机是一种台式离心机，设计用于 1.5/2.0ml 微量管和更小的 0.2ml PCR 管。这些离心机的尺寸可以小至 6 x 6 英寸，也可以大至 12 x 24 英寸（对于冷冻离心机）。最小的仅可容纳 6 个微管，最大的可容纳 48 个微管并旋转至 17,000 RPM (30,000 xg)。如何选择离心机

在选择微量离心机时，您必须回答以下问题：您的样品是什么以及它需要什么条件？您的协议需要什么速度，或者多少重力？您将同时旋转多少个样品？您的样品需要冷藏吗？

通用或多用途离心机

这些离心机可处理多种尺寸的离心容器，从 100ml 瓶子到 0.2ml PCR 管。各种转子产品使这些离心机成为用途广泛的离心机。许多型号均可冷藏。在选择多功能离心机时，首先要寻找能够满足您所需的容器尺寸和速度（重力）的转子。例如，如果您在 LabPlanet 上搜索 50ml 转子，搜索将为您提供可处理 50ml 试管的转子选项。寻找具有您所需速度的转子。一旦您选择了转子，适合它的离心机就是您需要的离心机。

选择通用离心机

确定您要旋转的管子尺寸；这可以是 1.5ml 微量离心管、50ml 离心管和/或 250ml 离心瓶。寻找能够以您需要的速度处理您所使用的管子的转子。配备您所需转子的离心机才是正确的离心机.

如何进行ELISA的构建？

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如何进行ELISA的构建？

选择您的关键试剂

固相：应选择专门允许结合检测中的抗原或抗体成分的固相以避免背景噪音。可用固相的例子有微孔板（通常是聚苯乙烯、聚丙烯和聚乙烯）、小管和珠子。小管和珠子通过提供较低的检测限来扩展测定参数。这是因为它们允许灵活的测试数量和测定体积，同时还为涂层和反应的发生提供更大的表面积。珠子的使用可以进一步减少孵育时间，并使 ELISA 能够用于不同的微流体系统，即自动化台式 ELISA。珠子本身可以是磁性的，因此使用磁铁可以轻松地将其分布在整个液相中。

样本：

应选择具有已知分析物浓度的标准样品，以涵盖从检测下限到上限（校准）的整个测定范围。这是为了确保无论样品中可测量的分析物浓度较低还是较高，测定的灵敏度和精确度都是一致的。此外，患者样本应取自并包含各种年龄范围、种族、性别和健康状况，以确保检测的广泛适用性和可靠的结果。在定量之前和定量过程中保持目标分析物稳定对于准确测定浓度至关重要。因此，样品提取、制备和储存中涉及的以下分析前条件尤其重要。

  • 必须选择能够保持分析物稳定性的适当样品基质。

  • 可能需要将蛋白酶抑制剂添加到生物流体样品基质中，以防止天然存在的蛋白酶降解分析物。

  • 收集患者样本时，必须评估运动、禁食、酒精、烟草和季节变化的影响。

  • 必须确定最佳样品储存温度（-80° C、-20° C、2-8° C 或室温）和冻融循环次数

  • 必须研究样品在室温下放置并在检测环境中保持稳定的时间长度。 

  • 移液前必须以标准化方式充分混合或倒置样品，以确保分析物在整个样品基质中均匀分布。

洗涤缓冲液

洗涤缓冲液的目的是洗掉任何未结合或过量的物质，否则可能会产生背景噪音信号并干扰测定和结果。洗涤缓冲液的设计具有与生理条件相似的 pH 值和盐浓度，并含有TRIS ( FT15751 )、PBS 和聚山梨酯等洗涤剂。如果检测到大量“背景噪音”而不是信号强度，则增加洗涤缓冲液的体积、洗涤剂的浓度或/和洗涤步骤的数量通常会有所帮助。这将增加所有未结合材料被去除的可能性。如果怀疑分析物降解或者分析物在程序中被洗掉，则减少洗涤步骤数、洗涤缓冲液体积或缓冲液中去污剂的浓度可能是有益的。

封闭缓冲液

为了防止与其他检测成分发生交叉反应和非特异性抗原结合，需要使用封闭剂。通常将牛奶溶液（脱脂奶粉）、全血清或牛血清白蛋白 (BSA) ( PRO-422 ) 等试剂添加到缓冲液中，并在第一次洗涤步骤后使用，以饱和孔的自由表面。

这种封闭缓冲液也可以含有去污剂，但应避免使用可能干扰测定的生物素或免疫球蛋白等成分。总体封闭缓冲液可以获得更高的信噪比，并且可以在使用的封闭剂的体积、浓度和类型方面进行优化。

酶和底物（信号系统）

常用的信号系统之一是酶联抗体，并且有多种不同形式和物种类型可供选择。常用于 ELISA，其中碱性磷酸酶和磷酸对硝基苯酯底物在目标分析物存在的情况下会产生黄色。检测抗体还可以与过氧化物酶并与氨基水杨酸和邻苯二胺底物一起使用，如果出现阳性结果，它们会呈现棕色。总体酶反应用于证明反应的特异性和速率。信号出现后，可以添加氢氧化钠、盐酸或硫酸来终止反应。 

在测定开发过程中，性能和财务方面在确定应使用哪些试剂以及浓度时起着关键作用。虽然使用较低浓度的酶联抗体可能更具成本效益，但可能有必要增加浓度以确保产生足够的信号强度。如果您的 ELISA 灵敏度较差，可以通过改变抗体类型（从单克隆抗体到多克隆抗体）或采用不同的信号系统来放大信号。第一个例子是二抗被生物素化，然后添加链霉亲和素-HRP。由于四个链霉亲和素分子可以与生物素相互作用，因此通过添加更多的链霉亲和素分子进行检测，可以提高检测少量分析物的能力。此外，通过用多种酶、银纳米颗粒标记检测抗体或使用化学发光或荧光底物等替代底物类型，可以提高灵敏度。 

校准和控制

标准曲线或校准曲线由分布在测定范围内的已知分析物浓度的样品组成。它们在 ELISA 中用作辅助，以便稍后计算目标分子的浓度。应该强调的是，校准品和对照品的矩阵应尽可能与所运行的天然样品的矩阵相似。

运行标准曲线很有用，如果生成的标准曲线较差，可能会导致结果无效或突出检测中的错误。不正确的抗体结合或分析物捕获可能是标准曲线不良的原因。除了校准曲线外，还应使用阳性和阴性对照样品。阴性对照不应包含任何感兴趣分析物的痕迹，因为它们用于检查假阳性和非特异性结合。阳性对照应含有已知浓度的目标分析物。如果测定检测到阳性对照中存在分析物并且阴性对照均为阴性，则测定工作可靠且结果有效。


如何进行ELISA的构建？

使用已知浓度的校准品创建的 ELISA 标准曲线示例，X 表明通过曲线插值获得的未知样品的浓度。

培养箱和混合器

尝试并使用 ELISA 的特定孵育时间和温度，有助于在捕获抗体和目标分析物之间达到结合平衡。控制板周围温度的一种方法是使用确保波动最小的培养箱。此外，使用混合器可以帮助您的 ELISA 达到最佳性能，因为它有助于将试剂分布在整个基质中，以促进更多的结合。一般来说，较长的潜伏期可能有利于灵敏度，因为有更多的时间进行结合。然而，还应该测试缩短的孵育时间。

捕获抗体的固定化方法

当捕获抗体固定到 ELISA 板上时，其方向可能会发生变化，从而降低其亲和力以及与抗原结合的机会。此外，洗涤步骤中抗体的置换可能导致灵敏度和重现性较差。解决这个问题的一种方法是使用单层表面，使抗体能够共价结合到板上，但 Tania García-Maceira 等人已经证明了灵敏度的更大改进。 （2020）通过使用甲壳素涂层的聚苯乙烯表面来实现。使用这种固定形式，抗体通过与几丁质结合域融合，以更好的方向被捕获到微量滴定板上。

如何选择正确类型的灯泡？

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如何选择正确类型的灯泡？

现在大多数人都知道，市场上的 LED 灯可以取代许多常用的灯。然而，您可能注意到它们比要更换的灯泡类型贵几倍。是否值得冒险投资更持久、更高效的替代方案？这取决于几件事，包括你支付多少电费、你每天使用光源多少小时、你所比较的两种灯有多贵，以及更换灯有多困难。

存在一个简单的公式，可以使用以下输入来计算灯一年的运行成本：

  • 每千瓦时电价

  • 电源消耗的瓦数

  • 源平均每天打开的小时数

为了计算灯泡一年的使用成本，我们使用以下公式：

如何选择正确类型的灯泡？

使用这个公式，我们可以比较几种光源每年的使用成本，然后可以了解切换到 LED 可以多快地收回更昂贵的初始成本。您所在地区的电价越贵，灯每天打开的时间越长，LED 就能更快地“收回成本”。

 

我住在纽约，电费相对昂贵。平均价格为23美分/千瓦时。例如，以下是我为客户的一栋办公楼运行的一些样本数字：

每周使用50小时； .23/千瓦时

每根荧光灯管每年的电费：19.14 美元

每个 LED 灯管每年的电力成本：8.97 美元

每个 20 杆卤素灯每年的电力成本：29.90 美元

每个 20 杆 LED 每年的电力成本：每年 3.59 美元

比较不同灯的平均预期寿命也很有用。白炽灯和卤素光源通常可持续使用一到数千小时。荧光源的使用寿命通常为 5 至 15,000 小时。 LED 光源需要每 25 至 5 万小时更换一次。考虑到一年通常有 8760 小时，您可以根据平均日常使用情况快速了解您预计灯泡可以使用多少年。如果一两年需要更换一盏灯，那么改用更高效、更耐用的光源通常是一个合乎逻辑的财务决策。

Bulbtronics 于 1976 年开始生产普通的特种汽车替换灯泡产品线，作为稀缺灯泡供应商。随着我们的成长，Bulbtronics 成为特定市场的各种灯泡、灯、LED、电池和配件的可行来源。我们为自己的知识感到自豪，并致力于追求高标准。 

ozbiosciences脂转染技术是如何工作的？

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ozbiosciences脂转染技术是如何工作的？

脂转染是一种基于脂质的转染该技术属于生化方法，还包括聚合物、DEAE葡聚糖和磷酸钙。

脂转染原理是将核酸与阳离子脂质制剂结合起来。由此产生的分子复合物（称为脂质复合物）随后被细胞吸收。 

脂转染的主要优点是效率高、能够在多种细胞类型中转染所有类型的核酸、易于使用、重现性好和低毒性。此外，该方法适用于所有转染应用（瞬时转染、稳定转染、共转染、反向转染、顺序转染或多重转染……）、高通量筛选测定，并且在一些体内模型中也显示出良好的效率。

它是如何工作的？

用于脂转染的脂质试剂通常由合成的阳离子脂质组成，这些脂质通常与辅助脂质（例如 DOPE（1,2-二油酰磷脂酰乙醇胺）或胆固醇）混合。这些脂质混合物在生理 pH 值下组装在脂质体或胶束中，总体带正电荷，并能够通过静电相互作用与带负电荷的核酸形成复合物（脂质复合物）。基于脂质的转染试剂与核酸的结合导致核酸的紧密压缩和保护，并且这些阳离子复合物主要通过内吞作用内化。

一旦进入细胞，就会有两种导致核酸释放到细胞质中的机制。一种依赖于聚阳离子残基的内体缓冲能力（称为“质子海绵效应”）。另一种描述了细胞带负电荷的脂质中和转染试剂的阳离子残基导致内体膜不稳定的能力。

最后，导致 DNA 核摄取（siRNA 不需要）以及随后基因表达的细胞和分子事件仍然具有高度推测性。然而，细胞分裂对转染效率的重要性支持这样的假设：有丝分裂过程中核膜破坏促进 DNA 核摄取。尽管如此，原代细胞（非分裂）和体内的转染也可以通过脂转染来实现，这证明DNA可以进入发生基因表达的细胞核。

如何分散纳米粉末和纳米颗粒？

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如何分散纳米粉末和纳米颗粒？

如何分散纳米粉末和纳米粒子？
1) 步骤1，先将表面活性剂/分散剂加入溶液中。步骤2、当表面活性剂/分散剂全溶解到溶液中时，添加纳米粉末/纳米粒子。第三步，最后对溶液进行超声波处理（这需要客户自己的经验）。
2) 超声波处理过程中，分散体可能会升温，因此最好每 5 分钟停止一次，等待溶液冷却、消泡，然后再继续。总计 30 分钟：5 分钟 x 6 次。
3) 超声结束后，将分散液离心，除去未分散的团聚颗粒。离心转速应为2000r/min，离心时间为30 min。离心后，根据材料的粒径、浓度和分子量，分散体将稳定一定的时间。
4）如果您没有超声波设备，请使用高速搅拌机，效果也很好（通常20-40分钟）

如何提取游离DNA？

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如何提取游离DNA？

cfDNA 的分离、定量和评估并不是一项简单的任务。它需要敏感且可靠的工作流程。

cfDNA 是一种极其难以处理的样品类型，因为 cfDNA 的产量通常有限且高度碎片化。这就是 MagVigen™ cfDNA 提取试剂盒（货号 #K61003）发挥作用的地方。它可以为 NGS 检测提供更高产量和更高质量的 cfDNA 样本（相对于 Qiagen 试剂盒）。


如何提取游离DNA？

cfDNA 提取工作流程

  1. 1.溶解：溶解等离子体样品。

  2. 2.结合和捕获：将 MagVigen™ 纳米颗粒与样品混合。纳米颗粒与 cfDNA 片段结合。

  3. 3.沉淀和重新分散 1：磁性沉淀珠子直至溶液澄清。珠子响应磁力（通过使用磁铁，例如磁力分离架），使结合的材料能够快速有效地与样品的其余部分分离。通过抽吸除去上清液（未结合的材料），剩下的是纳米颗粒结合的目标。然后将珠粒重新分散在洗涤 1 缓冲液中。

  4. 4.转移：将洗涤 1 溶液转移至 1.5 或 2ml 管中。

  5. 5.沉淀和重新分散 2：磁力沉淀，按照步骤 3 去除上清液。这次将珠粒重新分散在 75% 乙醇中。

  6. 6.清洗和沉淀 2,3：使用 75% 乙醇清洗珠粒。将珠子沉淀并除去所有上清液。将珠粒重新分散在 75% 乙醇中。执行此步骤两次。

  7. 7.洗脱：高质量 cfDNA 的最终洗脱。为下游 NGS、PCR 或其他应用做好准备。
    2次洗脱有助于提高cfDNA产量。

如何去除反应产物中的颜色？

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如何去除反应产物中的颜色？

您是否曾经有过纯化的反应产物，其应该是白色的，纯化后仍保留颜色？如果是这样，您采取了什么措施将其删除？

例如使用微波反应器合成2,4,6-三氯苯胺[1]时遇到了这种情况，图1。

如何去除反应产物中的颜色？

图 1.苯胺与 N-氯代琥珀酰亚胺的微波反应。

反应产生铁锈色的粗混合物。 TLC表明产生了产物和一些副产物。使用庚烷和甲基叔丁基醚 (MTBE) 的正相快速色谱看起来很有前景，但由于反应在与庚烷不混溶的乙腈中进行，我需要将产物从反应溶剂中萃取出来，并重新溶解在与庚烷兼容的溶剂中例如二氯甲烷（DCM）。萃取还将去除一些极性副产物和过量的N-氯代琥珀酰亚胺。

用 DCM 萃取后，我添加二氧化硅并蒸发溶剂以形成干负载（约 300 毫克）。在提取物纯化过程中，一条非常紧密的铁锈色条带穿过硅胶柱，图 2。

如何去除反应产物中的颜色？

图 2.反应混合物 DCM 提取物 (300 mg) 的正相快速纯化显示产物以非常紧密、高度着色的条带洗脱。

该条带生成了良好的色谱图，几乎没有分离的副产物，图 3。

如何去除反应产物中的颜色？


图 3.使用 0-35% MTBE 的庚烷梯度对 300 mg 合成 2,4,6-三氯苯胺进行正相快速纯化。

从300mg上样量中回收183mg红色晶体，表明正相去除了大量杂质。

那么，产品是纯净的，对吗？嗯，不全是。根据戴维斯的文章，该产品应该是“柔软、无色的针状物”，而不是红色晶体。正如他的文章中所述，为了去除产品中的红色，他使用了活性炭和二氧化硅，但没有提供有关颜色去除方案的详细信息。

我本可以尝试使用二氧化硅和极性较小的溶剂（例如庚烷）和 DCM 进行再纯化，但决定使用反相闪蒸来使用更环保的解决方案。经过最少的方法开发后，我发现 60-100% 的甲醇梯度很有希望，图 4。

如何去除反应产物中的颜色？

图 4.正相纯化产物的反相筛选运行。

我将硅胶纯化的红色产物（183 毫克）干燥到 C18 介质上，将其装入干燥上样容器中，并在 12 克 C18 柱上重新纯化。色谱图显示分离良好，产物与多种杂质分离，图 5。

如何去除反应产物中的颜色？


图 5.正相产物馏分的反相快速纯化。

收集的级分表明颜色已从在级分 2 中洗脱的产物中去除，而有色级分稍后洗脱，从级分 4 开始，图 6。

如何去除反应产物中的颜色？

图 6.反相纯化馏分。产物级分是澄清的并且在级分2处洗脱，而有色杂质稍后在级分4-7中洗脱。

将级分 2 中的产物蒸发，得到 58 mg 柔软、无色的针状物，图 6。

如何去除反应产物中的颜色？


图6.2,4,6-三氯苯胺最终产品。

对于这项工作，我使用了以下设备：

  • Biotage®引发剂+微波反应器

  • Biotage® V-10 Touch 溶剂蒸发器

  • Biotage® Selekt Single 快速色谱系统

  • Biotage® Sphere HC（10 克）和 C18（12 克）快速色谱柱

  • Biotage DLV（干式负载容器），配备 Biotage® KP-Sil 和 KP-C18-HS

因此，如果您的产品存在颜色污染，并且之前仅使用硅胶对其进行纯化，请考虑通过反相快速色谱进行再纯化。与其他技术相比，它简单、容易、更环保。