标签归档：增殖

使用点击化学测定细胞增殖和 DNA 复制

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使用点击化学测定细胞增殖和 DNA 复制

细胞增殖测定广泛应用于细胞毒性研究、癌症研究和细胞生物学的许多其他领域。其中许多可以通过荧光标记对增殖细胞进行可视化，并且适合高通量筛选。

检测复制的 DNA 可以说是检测增殖的最直接方法。这是通过使用溴脱氧尿苷 (BrdU)核苷实现的，该核苷在复制过程中融入 DNA。然后，细胞 DNA 中的这些核苷修饰可以通过抗 BrdU 抗体检测到。尽管具有特异性，但这种测定方法繁琐且难以重现，因为需要用刺激性试剂处理细胞，以使 DNA 暴露于抗体，否则这些抗体不会穿透细胞结构。

一种更温和的替代方案是乙炔基脱氧尿苷 (EdU)，可以通过将其添加到培养基中或注射到动物体内来将其递送至细胞。掺入 DNA 后，该核苷可在铜 (I) 催化下与各种荧光染料叠氮化物结合，从而对复制的 DNA 进行荧光染色。该测定易于执行、快速且可重复。它不需要对细胞进行严酷的处理（只需要用 Triton 进行透化），因此可以更好地保存细胞结构。在用叠氮化染料处理和最后的洗涤步骤（步骤 8）后，可以使用具有各种发射波长的荧光团（例如 Hoechst、DAPI或荧光标记抗体）来标记细胞。

所需试剂

  • 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 (EdU)

  • 铜 (II)-BTTAA 络合物— сlick сhemistry 催化剂

  • 抗坏血酸— 铜的还原剂

  • 叠氮化物荧光染料

  • DMSO，标签级— 叠氮化物溶剂

  • Triton X-100（或 Tween-20）

  • PBS，pH 7.4

  • 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4

协议

确切的方案取决于特定的细胞或组织类型，但一般工作流程如下所述：

  1. 将细胞/组织与 10–20 μM EdU 孵育所需的时间。

  2. 用含 3.7% 甲醛的 PBS 固定细胞 15 分钟。

  3. 用 PBS 清洗细胞。

  4. 用含有 0.2% Triton X-100（或 0.5% Tween-20）的 PBS 透化细胞 30 分钟。

  5. 再次用 PBS 清洗细胞。

  6. 在 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4（对于磺化叠氮化物）或 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4（含 50% DMSO）中制备含有 2 mM 铜 (II)-BTTAA 复合物、10 mM 抗坏血酸和 5 μM 叠氮化染料的混合物（对于非磺化叠氮化物）。该混合物应新鲜制备，因为铜 (I) 在水溶液中不稳定。

  7. 将细胞与点击反应混合物一起孵育 30 分钟。

  8. 用 PBS 清洗细胞。

  9. （可选）如果细胞必须用不同的荧光团标记，请使用标准方案继续染色。

磺化（水溶性）叠氮化物，例如磺基氰叠氮化物和 AF 叠氮化物，可产生最佳效果。当使用非磺化叠氮化物（例如氰叠氮化物或 BDP 叠氮化物）时，确保反应混合物中 DMSO 浓度为 50%。

点击化学的应用——测定细胞增殖和 DNA 复制

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点击化学的应用——测定细胞增殖和 DNA 复制

细胞增殖测定广泛应用于细胞毒性研究、癌症研究和细胞生物学的许多其他领域。其中许多可以通过荧光标记对增殖细胞进行可视化，并且适合高通量筛选。

检测复制的 DNA 可以说是检测增殖的最直接方法。这是通过使用溴脱氧尿苷 (BrdU)核苷实现的，该核苷在复制过程中融入 DNA。然后，细胞 DNA 中的这些核苷修饰可以通过抗 BrdU 抗体检测到。尽管具有特异性，但这种测定方法繁琐且难以重现，因为需要用刺激性试剂处理细胞，以使 DNA 暴露于抗体，否则这些抗体不会穿透细胞结构。

一种更温和的替代方案是乙炔基脱氧尿苷 (EdU)，可以通过将其添加到培养基中或注射到动物体内来将其递送至细胞。掺入 DNA 后，该核苷可在铜 (I) 催化下与各种荧光染料叠氮化物结合，从而对复制的 DNA 进行荧光染色。该测定易于执行、快速且可重复。它不需要对细胞进行严酷的处理（只需要用 Triton 进行透化），因此可以更好地保存细胞结构。在用叠氮化染料处理和最后的洗涤步骤（步骤 8）后，可以使用具有各种发射波长的荧光团（例如 Hoechst、DAPI 或荧光标记抗体）来标记细胞。

所需试剂

  1. 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 (EdU)

  2. Cu-TBTA 络合物— сlick сhemistry 催化剂

  3. 抗坏血酸— 铜的还原剂

  4. 叠氮化物荧光染料

  5. DMSO，标签级— 叠氮化物溶剂

  6. Triton X-100（或 Tween-20）

  7. PBS，pH 7.4

  8. 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4

确切的方案取决于特定的细胞或组织类型，但一般工作流程如下所述：

  1. 将细胞/组织与 10–20 μM EdU 孵育所需的时间。

  2. 用含 3.7% 甲醛的 PBS 固定细胞 15 分钟。

  3. 用 PBS 清洗细胞。

  4. 用含有 0.2% Triton X-100（或 0.5% Tween-20）的 PBS 透化细胞 30 分钟。

  5. 再次用 PBS 清洗细胞。

  6. 在 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4（对于磺化叠氮化物）或 100 mM Tris 缓冲液，pH 7.4，含有 50% DMSO（对于非-磺化叠氮化物）。该混合物应新鲜制备，因为铜 (I) 在水溶液中不稳定。

  7. 将细胞与点击反应混合物一起孵育 30 分钟。

  8. 用 PBS 清洗细胞。

  9. （可选）如果细胞必须用不同的荧光团标记，请使用标准方案继续染色。

磺化（水溶性）叠氮化物，例如磺基氰叠氮化物和 AF 叠氮化物，可产生最佳效果。当使用非磺化叠氮化物（例如氰叠氮化物或 BDP 叠氮化物）时，确保反应混合物中 DMSO 浓度为 50%。

MTT 细胞增殖检测30-1010K

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MTT 细胞增殖检测

简要描述：MTT 细胞增殖检测，产品编码：30-1010K。
储存条件：2°C至8°C。
发货信息：2500次反应。

详细介绍

产品咨询

品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合

MTT 细胞增殖检测，产品编码：30-1010K。

MTT 细胞增殖检测，描述：

细胞活力和增殖的测量构成了细胞群对外部因素反应的众多体外测定的基础。四唑盐的还原现在被广泛接受为检查细胞增殖的可靠方法。黄色四唑MTT（3-（4，5-二甲基噻唑基-2）-2，5-二苯基四唑溴化物）被代谢活性细胞还原，部分通过脱氢酶的作用，产生还原等价物，如NADH和NADPH。所得的细胞内紫色甲臜可以通过分光光度法溶解和定量。

MTT细胞增殖测定测量细胞增殖速率，相反，当代谢事件导致细胞凋亡或坏死时，细胞活力降低。检测步骤的数量已尽可能减少，以加快样品处理。在没有细胞的情况下，MTT试剂产生的背景吸光度值较低。对于每种细胞类型，建立细胞数量和产生的信号之间的线性关系，从而可以准确量化细胞增殖速率的变化。

产品类别：试剂

应用：质量管理，细胞生长和活力

发货信息：2500 次反应

储存条件：2°C 至 8°C

上海金畔生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌

  6. 质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式。

XTT 细胞增殖检测试剂盒30-1011K

发表于由

XTT 细胞增殖检测试剂盒

简要描述：XTT 细胞增殖检测试剂盒，产品编码：30-1011K。
储存条件：-20°C 或更低。

详细介绍

产品咨询

品牌 其他品牌 供货周期 一个月
应用领域 医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合

XTT 细胞增殖检测试剂盒，产品编码：30-1011K。

XTT 细胞增殖检测试剂盒，描述：

多年来，四唑盐已被广泛用作组织化学定位研究和细胞生物学测定的检测试剂 （1，2）。第二代四唑染料XTT可有效用于细胞增殖、细胞毒性和细胞凋亡测定（2，3，4）。XTT通过细胞效应子的混合物还原为可溶的，颜色鲜艳的橙色衍生物。通过使用中间电子载体PMS（N-甲基二苯并吡嗪甲基硫酸盐），XTT测定的灵敏度大大提高。PMS 有助于推动 XTT 还原及其甲臜衍生物的形成。

产品类别：试剂

应用：细胞生长和活力

产品格式：冷冻

发货信息：1000 次检测

储存条件：-20°C 或更低

上海金畔生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌

  6. 质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式。

Exalpha Biologicals品牌BrdU细胞增殖活性检测试剂盒

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一 细胞增殖检测的意义

细胞增殖是生物体的重要生命特征，是生物体生长、发育、繁殖以及遗传的基础。监测细胞群的生长对细胞的状态研究很有必要。科研工作者们经常需要检测细胞增殖情况，比如验证抗肿瘤药物的药效时，监测细胞增殖及存活情况；研究肿瘤侵袭与转移模型时，分析细胞转移或侵袭的路径；分析创伤的修复或组织的重建时，检测细胞生长情况等等。检测细胞增殖及活性变化则可以很好的反映细胞的生长状况。

Exalpha Biologicals品牌BrdU细胞增殖活性检测试剂盒

二 细胞增殖的研究方法

细胞增殖的研究方法有很多种，根据检测原理不同，主要分为DNA合成检测法、代谢活性检测法、细胞增殖标志物检测法等。本文重点介绍DNA合成检测之Brdu检测法，传统DNA合成检测方法使用胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入DNA，然后通过放射自显影或闪烁计数对DNA进行定量，该方法由于存在放射性物质、实验周期长、操作繁琐，且需要昂贵的设备，目前已被BrdU（5-Bromo-2-deoxyuridine，5-溴脱氧尿嘧啶核苷）检测方法取代，BrdU作为一种胸苷类似物，可选择性地掺入增殖细胞的DNA中，而且可稳定存在，并带到子代细胞中，细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量，从而判断细胞的增殖能力。

Exalpha Biologicals品牌BrdU细胞增殖活性检测试剂盒

BrdU分子结构

小编整理汇总了常见细胞增殖检测方法，详见下表。

细胞增殖检测方法汇总

方法分类

检测方法

检测原理

DNA合成检测

Brdu检测法

BrdU是胸腺嘧啶核苷的类似物，能够在细胞增殖时期代替胸苷掺入增殖细胞的DNA中，而后利用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量，从而判断细胞增殖能力

DNA合成检测

胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）渗入法

用同位素3H标记TdR作为DNA合成前体掺入DNA合成代谢过程，通过测定放射性强度，反应细胞DNA代谢及增殖情况

代谢活性检测

MTT比色法

在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成蓝紫色的Formazan结晶，再利用酶标仪测定，以反映出活细胞数目，间接反应细胞增殖情况

细胞增殖标志物检测

Ki67,PCNA,MCM-2等相关抗原检测

通过观察增殖细胞中表达但非增殖细胞中不存在的特定蛋白质，来反映细增殖情况

荧光染料检测

羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）检测法

CFSE是一种荧光染料，脂溶性高，进入细胞，可以与胞内氨基酸发生不可逆的结合，在细胞的分裂过程中能进入子代细胞，同时荧光强度减半，再用流式细胞仪或荧光显微镜进行分析

实时动态电极阻抗检测

RTCA实时无标记细胞分析技术

将微电极列阵整合在细胞培养板孔底部，构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化改变的细胞阻抗检测传感系统。当微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时，这种改变与细胞的实时功能状态改变呈相关性

三 Exalpha Biologicals品牌BrdU检测试剂盒

因组织细胞内无内源性BrdU存在，可利用BrdU相关抗体来检测和定位掺入活跃增殖细胞新合成DNA的BrdU，Exalpha Biologicals 品牌BrdU检测试剂盒的优势在于使用细胞层作为固相，将BrdU试剂掺入微孔板中的细胞，除了对细胞增殖情况进行评估外，还可以从单个培养物中分析细胞数量、形态和细胞抗原等信息。同时Exalpha Biologicals 品牌BrdU检测试剂盒可通过试剂盒自带的固定/变性溶液一步完成细胞固定、透化和DNA变性等实验流程，大大缩短了实验时间。Exalpha Biologicals 品牌BrdU检测试剂盒中包含检测细胞增殖活性所需的所有组分、操作简便、无放射性、广泛的样本适用性，已得到众多科研工作者的青睐。

四 Exalpha Biologicals品牌BrdU检测试剂盒试剂盒优势

简便：提供预稀释的滴管瓶，现用现配

安全：无放射性成分

完整：包含缓冲液、酶、阳性对照玻片和染色参考玻片

灵活：可用于任何物种组织样本

灵敏：极低的背景干扰

经济：成本低，高通量，多种规格

Exalpha Biologicals品牌BrdU细胞增殖活性检测试剂盒

经BrdU处理的小鼠小肠免疫组织化学染色图

 

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品牌

货号

产品类型

产品名称

应用

Exalpha

X1327K1

试剂试剂盒

BrdU Cell Proliferation Assay Kit

ELISA

Exalpha

X1623K1

试剂试剂盒

BrdU Chemiluminescent Cell Proliferation Assay Kit

ELISA

Exalpha

X1545K

免疫组化试剂盒

BrdU Immunohistochemistry Kit

ICC
IHC (frozen & paraffin)

Cell Biolabs

CBA-251

试剂试剂盒

CytoSelect™ BrdU Cell Proliferation ELISA Kit

ELISA

Exalpha

X1028

BrdU单抗

Mouse anti BrdU (bromodeoxyuridine)

FC、IHC

Exalpha

MUB0200P

BrdU抗体

Mouse anti Bromodeoxyuridine / BrdU

FC、ICC、IHC(frozen & paraffin)

Exalpha

A205P

BrdU多抗

Sheep anti BrdU (bromodeoxyuridine)

FC、IHC(frozen & paraffin)、IP、WB

Exalpha

X1543M

BrdU单抗
FITC标记

Mouse anti BrdU (bromodeoxyuridine), conjugated with FITC

FC、IHC

Agrisera

AS16 3995

BrdU多抗

Bromodeoxyuridine

IHC、IP、WB

Agrisera

AS16 3998

BrdU单抗

Bromodeoxyuridine (monoclonal, clone MoBU)

determined by the investigator

Exalpha

X2834

BrdU试剂

Bromodeoxyuridine (BrdU)

IHC

Exalpha Biologicals品牌BrdU细胞增殖活性检测试剂盒

上海金畔生物科技有限公司代理的Exalpha Biologicals成立于1998年，是一家位于美国波士顿的生命科学公司，专门提供尖端抗体、试剂、试剂盒和定制IgY服务等。2016年5月Exalpha Biologicals与Nordic-MUbio达成长期销售协议，Exalpha Biologicals产品可通过Nordic-MUbio直接销售给世界各地的客户。Nordic-MUbio是一家总部位于荷兰发展迅猛的抗体试剂公司，Nordic-MUbio提供单克隆抗体、生物标志物、即用型流式细胞术抗体等产品组合。2022年4月Absolute Biotech将包括Absolute antibody、LSBio、Kerafast、Exalpha、Nordic-MUbio和Everest在内多个生命科学品牌联合成一个新公司，为世界各地的科研人员提供独特抗体、细胞系、其他试剂及产品定制服务。欲了解更多产品信息，请访问http://www.absolutebiotech.com。

Exalpha Biologicals品牌BrdU细胞增殖活性检测试剂盒

上海金畔生物科技有限公司是Absolute Biotech中国区代理，Exalpha Biologicals代理为用户提供完善的技术和售后服务。如您对上述产品感兴趣，欢迎拨打全国客服热线021-50837765或登录官网www.jinpanbio.cn查询和了解。

参考文献

  • Nakamura, S., et al. Application of bromodeoxyuridine (BrdU) and anti-BrdU monoclonal antibody for the in vivo analysis of proliferative characteristics of human leukemia cells in bone marrows. Oncology 1991, 48, 285-289
  • Wilson, G., Cell kinetic studies using a monoclonal antibody to bromodeoxyuridine. Methods Mol. Biol. 1998, 80, 255-266
  • Gray, J. (Ed), Special Issue: Monoclonal antibodies against bromodeoxyuridine Cytometry 1985, Vol. 6(6)
  • Gutschalk, C.M., et al. ‘Granulocyte Colony-Stimulating Factor and Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Promote Malignant Growth of Cells from Head and Neck Squamous Cell Carcinomas In vivo.’ Cancer Res., 66, 8026-8036 (2006).
  • Gray, J. (Ed), Special Issue: Monoclonal antibodies against bromodeoxyuridine Cytometry 1985, Vol. 6(6)
  • Hawker JR Jr., ‘Chemiluminescence-based BrdU ELISA to measure DNA synthesis.’ J Immunol Methods. 2003 Mar 1;274(1-2):77-82.
  • Ang, L.P.K., et al. ‘Development of a conjunctival epithelial equivalent with improved proliferative properties using a multistep serum-free culture system.’ Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2004, 45, 1789-1795
  • Dual inhibition of IGF-IR and ALK as an effective strategy to eradicate NPM-ALK+ T-cell lymphoma Bhawana George, Suraj Konnath George, Wenyu Shi, Abedul Haque, Ping Shi, Ghazaleh Eskandari, Magnus Axelson, Olle Larsson, Ahmed O. Kaseb & Hesham M. Amin. Journal of Hematology & Oncologyvolume 12, Article number: 80 (2019). ISSN: 1756-8722
  • Wen-Ning Zhao, Norma K. Hylton, Jennifer Wang, Peter S. Chindavong, Begum Alural, Iren Kurtser, Aravind Subramanian, Ralph Mazitschek, Roy H. Perlis, Stephen J. Haggarty. Activation of WNT and CREB Signaling Pathways in Human Neuronal Cells in Response to the Omega-3 Fatty Acid Docosahexaenoic Acid (DHA). Mol Cell Neurosci. 2019 Sep; 99: 103386.
  • Eleni Venetsanakos, Ken A. Brameld, Vernon T. Phan, Erik Verner, Timothy D. Owens, Yan Xing, Danny Tam, Jacob LaStant, Kwan Leung, Dane E. Karr, Ronald J. Hill, Mary E. Gerritsen, David M. Goldstein, Jens Oliver Funk, and J. Michael Bradshaw. The Irreversible Covalent Fibroblast Growth Factor Receptor Inhibitor PRN1371 Exhibits Sustained Inhibition of FGFR after Drug Clearance Mol Cancer Ther. 2017, 16(12); 2668–76.
  • Nakamura, S., et al. Application of bromodeoxyuridine (BrdU) and anti-BrdU monoclonal antibody for the in vivo analysis of proliferative characteristics of human leukemia cells in bone marrows. Oncology 1991, 48, 285-289
  • Wilson, G., Cell kinetic studies using a monoclonal antibody to bromodeoxyuridine. Methods Mol. Biol. 1998, 80, 255-266
  • Gray, J. (Ed), Special Issue: Monoclonal antibodies against bromodeoxyuridine Cytometry 1985, Vol. 6(6)
  • Gutschalk, C.M., et al. ‘Granulocyte Colony-Stimulating Factor and Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Promote Malignant Growth of Cells from Head and Neck Squamous Cell Carcinomas In vivo.’ Cancer Res., 66, 8026-8036 (2006).
  • Gray, J. (Ed), Special Issue: Monoclonal antibodies against bromodeoxyuridine Cytometry 1985, Vol. 6(6)