核酸检测常用的5种荧光染料的特点

发表于2024年4月6日由上海金畔生物科技有限公司

核酸检测常用的5种荧光染料的特点

核酸荧光染料对细胞核进行染色，定量测定细胞的荧光强度，从而可以测定细胞核中DNA和RNA的含量，分析细胞周期和细胞增殖情况。有多种荧光染料可以对细胞中的 DNA 或 RNA 进行染色。常用的DNA染料有碘化丙啶（PI）、DAPI、Hoechst 33342等，RNA染料有噻唑橙、吖啶橙等。

1.荧光染料PI（碘化丙啶）

荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可以对DNA进行染色的核染色试剂。它常用于细胞凋亡检测。英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙锭类似物，嵌入双链 DNA 后会发出红色荧光。虽然 PI 不能穿过活细胞膜，但它可以穿过受损的细胞膜并对细胞核进行染色。 PI 通常与 Calcein-AM 或 FDA 等荧光探针一起使用，以同时对活细胞和死细胞进行染色。 PI-DNA复合物的激发波长和发射波长分别为535 nm和615 nm。

2. EB（溴化乙锭）

溴化乙锭是一种高度敏感的嵌入荧光染料，是一种强致癌诱变剂，但价格便宜。它与 DNA 的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，每 2.5 个碱基插入大约 1 个溴化乙锭分子。 EB 的这一特性使其成为常用于琼脂糖凝胶电泳中核酸染色的核酸染料。溴化乙锭在紫外区的302nm和366nm处有吸收峰。在紫外光照射下，溴化乙锭可激发出橙红色荧光（590nm）。与 DNA 结合的溴化乙锭复合物发出的荧光比不结合 DNA 的染料强 20-30 倍，因此溴化乙锭可以检测小至 10 ng 的 DNA 带，并且非常灵敏。

3. 凝胶绿和凝胶红

Biotium公司研发推出的EB替代染料，具有与EB相似的染色效果，且在紫外光照射下不易淬灭，因此可用于胶水回收。但价格较贵。

GelRed和GelGreen是两种优秀的荧光核酸凝胶染色试剂，兼具高灵敏度、低毒性和超稳定性。其水溶性染料已通过美国EPA安全认证，废物可直接倒入下水道，不会造成任何环境污染。

其特点是：
1）灵敏度高：GelRed和GelGreen是市场上灵敏度最高的凝胶核酸染料之一；
2）稳定性佳：可微波炉加热，可常温保存；
3）更安全：艾姆斯测试结果表明该染料的致突变性远小于溴化乙锭（EB）；
4）适应性广：适用于预制胶和胶后电泳染色；
5）染色过程简单：与EB一样，无需担心预制胶和电泳过程中染料降解；电泳后染色过程仅需30分钟，无需脱色或水洗；
6) 对DNA和RNA迁移影响小：对核酸迁移影响比SYBR Green I?小；
7）与标准凝胶成像系统和可见光激发的凝胶观察装置兼容：使用312nm激发的UV凝胶成像系统时，GelRed可以替代EB； GelGreen 足以替代凝胶观察装置中的任一 SYB 染料。然而，这种染料会使小 DNA 片段迁移得更慢（与 EB 相比）。

4. 黄金观 I/II

Goldview对于大的DNA片段有很好的染色效果，但是对于500bp以下的片段则不太好。另一个致命的弱点是它的荧光团在紫外光下很容易猝灭，通常需要5-10分钟。会消失。 Goldview 也不适合胶水回收。 Goldview实际上是AO（吖啶橙，剧毒产品），其荧光效果远不如EB，灵敏度差，底色严重，不适合回收，不稳定，在紫外光下诱导突变的能力较差高。

5. SYBR Green 和 SYBR Gold

稳定性差，毒性大。属于花青素核酸染料。花青素染料并非无毒，只是低毒。电泳等级已修改。改性有以下三种： 1.添加卤素或氰基。 2.插入环状羟基。 3、添加稳定剂。 SYBR Green I 是一种高灵敏度 DNA 荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无需脱色或洗涤。至少可以检测到20pg DNA，比EB染色高25-100倍。当SYBR Green I与双链DNA结合时，荧光信号将增强800-1000倍。 SYBR Green I 染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。 SYBR Green 和 SYBR Gold 的稳定性远不如 EB。SYBR系列染料还可进入细胞对细胞核中的线粒体和DNA进行染色，造成伤害。 SYBR Green I已被证明在紫外线照射下具有很强的诱变能力，使DNA或其他物质发生突变。（您也可能对。。。有兴趣荧光染料示例和应用）

ALDHbr检测试剂盒01711

发表于2024年4月5日由上海金畔生物科技有限公司

ALDHbr检测试剂盒

简要描述：ALDHbr检测试剂盒，产品编码：01711。品牌：STEMCELL
ALDHbr Assay Kit
用于检测人脐带血中的 CD34+ 和 ALDHbr 细胞。

详细介绍

产品咨询

品牌	其他品牌	供货周期	一个月
应用领域	医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合

ALDHbr检测试剂盒，产品编码：01711。品牌：STEMCELL

ALDHbr检测试剂盒，ALDHbr Assay Kit

产品描述：

经过优化，可鉴定和定量人脐带血样本中表达高水平醛脱氢酶（ALDH）的 CD34+ 细胞。该试剂盒包含CD34+细胞检测试剂盒和ALDEFLUOR™试剂盒。CD34+ 细胞检测试剂盒包含预先选择的荧光染料偶联单克隆抗体，这些抗体已经过优化，可与 ALDEFLUOR™ 试剂盒配合使用，通过流式细胞术检测表达 CD34 且具有高 ALDH 活性的细胞。CD34+ 细胞检测试剂盒包含抗人抗体 APC CD34、PE CD45 和 PE-花青素 5 糖蛋白 A/B 以及 7-AAD 活性染料。

使用流式细胞仪需要配备 488 nm 激光器和 635 nm 激光进行激发，以及用于检测 APC、PE、PE-花青 5 和 7-AAD 荧光的适当滤光片。

细胞类型

造血干细胞和祖细胞

物种

人

应用

流式细胞术

感兴趣的领域

脐带血储存，干细胞生物学

产品优势：

在 1 天内量化<原始 HSC
经过优化，可检测 CB 中的 ALDHbrCD34+ 细胞
枚举CD34+细胞群中活的，代谢活跃的原始细胞

上海金畔生物科技有限公司

国内试剂耗材经销代理。
国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
提供加急物流处理，进口货物，最快交期1-2周。
进出口货物代理服务。
公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌
质量保证，所有产品都提供售后服务。付款方式灵活。公司坚持“一站式”服务模式。

COD水质测定仪比较普遍的几种检测方法

发表于2024年4月4日由上海金畔生物科技有限公司

COD水质测定仪比较普遍的几种检测方法

COD水质测定仪我国对COD水质检测仪方法的研究比较早,近几年,对COD水质检测仪的研究更为活跃,测试手段正不断发展更新,方法间相互渗透,有些方法如HACH 比色法虽然仍未得以广泛应用,但方法已得到美国*的认可。目前,比较成熟的COD水质检测仪方法主要有以下三种:即回流滴定法、微波法、HACH 比色法。

　　COD水质测定仪回流滴定法：

　　此方法是目前实验室普遍采用的一种方法,

　　同时也是国家标准方法。本方法适用于各类型的含COD 值大于30m g /L 水样,对未经稀释的水样检测上限为700m g /L 。具体方法为:在水样中加入已知量的重铬酸钾溶液,并在强酸介质下以硫酸银为催化剂,经沸腾回流后,以试亚铁灵为指示剂,用硫酸亚铁铵滴定水样中未被还原的重铬酸钾,由消耗的硫酸亚铁铵的量换算成消耗氧的质量浓度。该方法的缺点是:操作过程相对繁琐,引起误差的原因较多,如回流收集可能引起较大误差,经计算每滴硫酸亚铁铵可带来COD 值约8m g /L 的变化,可能引起较大误差;对高氯低COD的水不适用。该方法的优点是:方法相对成熟,并且对仪器的要求相对较低。

　　COD水质检测仪微波法：

　　微波法是近几年发展起来的一种COD 测试

　　方法,该方法与回流法一样采用硫酸-重铬酸钾消解体系,水样经微波加热消解后,过量的重铬酸钾以试亚铁灵为指示剂,用硫酸亚铁铵滴定,计算出COD 值。该方法的一个大特点就是反应液的加热是采用频率为2450M Hz 的电磁波能量来进行的,在高频微波的作用下,反应液分子会产生摩擦运动,另外还采用密封消解方式,使消解罐压力迅速提高到203k Pa ,因此该方法的优点是反应时间短,可实现对高氯水的测定。该方法的缺点同样是滴定分析的缺陷,这里不在赘述。

　　COD水质检测仪HACH比色法：

　　HACH 比色法是目前少数先进实验室所采

　　用的一种测试方法,该方法采用美国HACH 公司特制的瓶装消解液为消解试剂。测试时,加入水样,在HACH 公司制造的COD 反应器上加热2h ,待冷却至室温后用HACH 公司生产的分光光度计进行比色分析,直读出水样中的COD 值。由于在还原剂作用下Cr 2O 72-部分转化为Cr 3+,在波长620nm 下,测其吸光度,然后由吸光度换算出COD 值。该方法的优点是克服了滴定分析可能带来的误差,操作简单、方便。虽然该方法优势明显,但同时存在一定的缺陷:由于消解液采用HACH公司特制的瓶装消解液,该瓶装消解液每瓶费用较高。

chondrex 过敏抗原检测试剂盒

发表于2024年4月2日由上海金畔生物科技有限公司

chondrex 过敏抗原检测试剂盒

简要描述：chondrex 过敏抗原检测试剂盒Allergic Antigen Detection Kits

详细介绍

产品咨询

品牌	其他品牌	供货周期	一个月
应用领域	医疗卫生,环保,化工,生物产业,制药

chondrex 过敏抗原检测试剂盒Allergic Antigen Detection Kits

过敏性疾病和症状是由对通常无害的抗原（例如花粉、宠物皮屑或食物）的主动免疫反应引起的。具体来说，食物过敏和哮喘是两种常见的儿童炎症性疾病，近年来已开始影响更多的人。

为了分析卵清蛋白 (OVA)、麦醇溶蛋白、屋尘螨 (HDM) 过敏原 (Der p 10) 和花生 Ara h6 在人类过敏或过敏动物模型中的致病作用，Chondrex, Inc. 提供了 OVA（目录号 6032）、麦醇溶蛋白（货号#6035）、HDM（Der p 10）（货号#6031）和peant Ara h6（货号#6042）检测 ELISA 试剂盒。此外，还提供抗OVA、抗麦醇溶蛋白、抗HDM和抗Ara h6单克隆抗体和抗体ELISA试剂盒。

产品	目录＃
麦醇溶蛋白检测试剂盒	6035
屋尘螨 (HDM) Der p 10 检测套件	6031
屋尘螨 (HDM) Der p1 检测套件	6044
卵清蛋白 (OVA) 检测试剂盒	6032
花生 Ara h2 检测试剂盒	6043
花生 Ara h6 检测试剂盒	6042

麦醇溶蛋白（Gliadin）

食物过敏是对大多数其他人可以毫无问题地耐受的食物或食物成分的免疫反应。小麦是世界上消费广泛的粮食。麦醇溶蛋白是小麦蛋白之一，根据其不同的一级结构分为 α-、β-、γ- 和 ω- 麦醇溶蛋白，分子量范围为 28 – 55 kDa，在激活先天性和适应性免疫方面发挥着关键作用反应，导致免疫介导的肠道损伤，例如肠道通透性高和固有层炎症细胞浸润。因此，麦醇溶蛋白可以引发乳糜泻（CD），这是一种遗传易感个体的自身免疫性疾病。小鼠 CD 模型已广泛用于研究麦醇溶蛋白的发病机制及其免疫反应 (1-4)。

HDM

哮喘是一种慢性炎症性疾病，影响全球 3 亿各个年龄段的人（5）。它是由接触尘螨、宠物皮屑、花粉或霉菌等过敏原引起的，其特点是可逆性气道阻塞和支气管痉挛。屋尘螨(HDM) 过敏原是人类最重要的室内过敏原 (6)。大约 10% 对 HDM 过敏的哮喘患者表现出针对 Der p10 的 IgE 抗体，Der p10 是来自尘螨、屋尘螨的第 10 组过敏原（原肌球蛋白）的 32 kDa 蛋白质。类似结构的原肌球蛋白存在于无脊椎动物中，如甲壳类动物（虾、龙虾、小龙虾和螃蟹）、蛛形纲动物（屋尘螨）、昆虫（蟑螂）和软体动物。原肌球蛋白是一种热稳定蛋白，致敏可能会导致对过敏源的严重反应。因此，Der p10 抗原可能在多种过敏原交叉诱导过敏反应中发挥作用 (7)。

OVA

鸡蛋过敏是第二常见的食物过敏（第一是牛奶过敏），有 0.5% 至 2.5% 的幼儿患有这种过敏。鸡蛋过敏是由鸡蛋蛋白引起的免疫反应，被定义为过敏原特异性IgE抗体介导的过敏反应，也称为I型食物过敏。在鸡蛋蛋白中，卵清蛋白 (OVA) 是已确定的过敏蛋白之一 (8)。 OVA 是一种 42.7 kDa 的糖蛋白，由三个不同的亚类 A1、A2 和 A3 组成，每个分子分别包含两个、一个和不含磷酸基团。 OVA 是一种广泛用于诱导实验动物过敏反应的抗原 (5,9,10)。

Peanut Ara h6

对花生的立即过敏反应是一种 IgE 介导的食物过敏，多年来一直是一个主要的公共卫生问题，特别是在花生过敏可能持续到成年的西方国家。对于过敏患者，目前避免仍然是可行的选择 (11)。已鉴定出十一种潜在重要的花生过敏原。 Ara h1、Ara h2、Ara h3 和 Ara h6 已被一定为主要的花生过敏原。 Ara h2 和 Ara h6 是两种高度相关的 2S 白蛋白，属于种子储存蛋白，特别有助于过敏反应的发生 (12)。 Ara h2 含有十个独立的 IgE 结合线性表位。两种亚型，Ara h 2.01 和 Ara h 2.02，在 SDS-PAGE 上分别被鉴定为 17 和 19 kDa 双联体。较大的亚型包含 12 个额外氨基酸，包括强 IgE 结合序列 DPYSPS 的重复，可以结合更多的 IgE 抗体 (13, 14)。 Ara h6 可以成为验证无花生食品的有用分析目标。该应用也不仅限于食品检测，有趣的是，血清 Ara h6 水平与患者的花生过敏耐受性相关，并且可以作为治疗研究中耐受水平的有用标志 (15)。有关小鼠花生提取物诱导过敏模型的更多详细信息，请参阅 Chondrex, Inc. 的血清 Ara h6 水平与患者的花生过敏耐受性相关，并且可以作为治疗研究中耐受水平的有用标志 (15)。有关小鼠花生提取物诱导过敏模型的更多详细信息，请参阅 Chondrex, Inc. 的血清 Ara h6 水平与患者的花生过敏耐受性相关，并且可以作为治疗研究中耐受水平的有用标志 (15)。

chondrex 过敏抗原检测试剂盒Allergic Antigen Detection Kits

通用支原体检测试剂盒30-1012K

发表于2024年4月2日由上海金畔生物科技有限公司

通用支原体检测试剂盒

简要描述：通用支原体检测试剂盒，产品编码：30-1012K。
储存条件：-20°C 或更低。

详细介绍

产品咨询

品牌	其他品牌	供货周期	一个月
应用领域	医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合

通用支原体检测试剂盒，产品编码：30-1012K。

通用支原体检测试剂盒，描述：

通用支原体检测试剂盒提供了一种快速灵敏的基于 PCR 的检测方法，可检测细胞培养中的支原体污染物。提供PCR反应所需的所有组分，并已针对扩增进行了优化。通过利用缓冲液、dNTP 和热稳定聚合酶的专有混合物，结合对支原体基因组中 16S rRNA 编码区具有特异性的通用引物，可以获得高特异性。来自其他来源的DNA，如组织样本或其他细菌，不会被扩增。触地PCR方案可提高检测的灵敏度，同时增强特异性。

该试剂盒可检测 60 多种支原体、无胆甾原体、螺旋体和解脲支原体，包括最可能影响细胞培养物的 8 种：精支原体、发酵支原体、人形支原体、猪支原体、口支原体、皮鲁姆支原体、唾液支原体和莱氏支原体。支原体阳性的样品很容易通过琼脂糖凝胶上大小从 434 到 468 bp 的不同 PCR 产物识别。

产品类别：试剂

应用：支原体检测，质量管理，细胞生长和活力

产品格式：冷冻

发货信息：40 种检测

储存条件：-20°C 或更低。

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MTT 细胞增殖检测30-1010K

发表于2024年4月2日由上海金畔生物科技有限公司

MTT 细胞增殖检测

简要描述：MTT 细胞增殖检测，产品编码：30-1010K。
储存条件：2°C至8°C。
发货信息：2500次反应。

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品牌	其他品牌	供货周期	一个月
应用领域	医疗卫生,环保,化工,生物产业,综合

MTT 细胞增殖检测，产品编码：30-1010K。

MTT 细胞增殖检测，描述：

细胞活力和增殖的测量构成了细胞群对外部因素反应的众多体外测定的基础。四唑盐的还原现在被广泛接受为检查细胞增殖的可靠方法。黄色四唑MTT（3-（4，5-二甲基噻唑基-2）-2，5-二苯基四唑溴化物）被代谢活性细胞还原，部分通过脱氢酶的作用，产生还原等价物，如NADH和NADPH。所得的细胞内紫色甲臜可以通过分光光度法溶解和定量。

MTT细胞增殖测定测量细胞增殖速率，相反，当代谢事件导致细胞凋亡或坏死时，细胞活力降低。检测步骤的数量已尽可能减少，以加快样品处理。在没有细胞的情况下，MTT试剂产生的背景吸光度值较低。对于每种细胞类型，建立细胞数量和产生的信号之间的线性关系，从而可以准确量化细胞增殖速率的变化。

产品类别：试剂

应用：质量管理，细胞生长和活力

发货信息：2500 次反应

储存条件：2°C 至 8°C

上海金畔生物科技有限公司

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国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。
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胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

发表于2024年4月1日由上海金畔生物科技有限公司

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

高浓度胰岛素试剂盒专门用于定量高浓度细胞上清液样品中的胰岛素，无需执行稀释步骤。

概述

在测定中对胰岛素进行定量之前，通常需要稀释高度浓缩的样品。该 HTRF 高范围试剂盒无需清洗步骤，动态范围为 4 对数，可实现更低的样品稀释度和更高的准确度，从而实现简单可靠的胰岛素定量。

测定原理:使用两种单克隆抗体的夹心免疫测定法测量胰岛素，一种用 Cryptate（供体）标记，另一种用 XL665（受体）标记。获得的 FRET 信号强度与样品中胰岛素的浓度成正比。

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

检测方案:5 µL 细胞上清液补充有 50 µL 受体标记抗体和 25 µL 供体标记抗体（或单个分液步骤中补充 75 µL 预混合试剂）。然后将混合物在室温下孵育 4 小时至过夜，并在 HTRF 兼容读取器上读取结果。

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

HTRF 高范围胰岛素测定显示与人胰岛上清液中的 RIA 具有好的相关性。回归线的斜率为 0.9，接近理想线，证明了测定的可靠性。胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

对小鼠和大鼠 B 细胞的验证:将 MIN6 小鼠 ß-细胞和 INS-1E 大鼠 ß-细胞接种到 24 孔板中（500 µL 培养基中，每孔 400,000 个细胞），然后在 37°C – 5% CO2 的全培养基中培养 6 天。刺激前，用 KRB 缓冲液洗涤细胞，并在 KRB 缓冲液（不含葡萄糖）中于 37°C 进行细胞静止步骤 2 小时。用 250 µL 含有浓度不断增加的葡萄糖的 KRB 缓冲溶液刺激细胞。MIN6 细胞分泌 10 分钟和 30 分钟后，或 INS-1E 细胞分泌 2 小时后，收集细胞上清液*并使用 HTRF 检测试剂对胰岛素进行定量。每个处理条件一式三份进行测量（误差线代表SEM）。

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

大鼠胰岛验证:将雄性 Wistar 大鼠新鲜分离的胰岛在含有 2.8 mM 葡萄糖（非刺激性基础条件）或 8.3 mM 葡萄糖（刺激性条件）的 KRB 缓冲液中于 37°C 孵育 30 分钟（5 个胰岛/管；4 管/健康）状况）。孵育期结束时，收集上清液并使用胰岛素高范围试剂盒测定胰岛素浓度。
样品由法国蒙彼利埃大学糖尿病药理学实验室、Max Mousseron 生物分子研究所 (IBMM)、CNRS UMR-5247 药学院慷慨提供

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

对离体灌注大鼠胰腺的验证:用含有 1.5 g/L 葡萄糖 +/- 10 µM 槲皮素的 KRB 缓冲液灌注从雄性 Wistar 大鼠中分离的胰腺。向培养基中连续通入 95% O2 ± 5% CO2 并保持在 37.5°C。选择恒定压力以提供 2.5 至 3.3 mL/min 之间的流速。随着时间的推移收集流出液（13 个部分），并使用试剂盒试剂测量胰岛素浓度。
样品由法国蒙彼利埃大学糖尿病药理学实验室、Max Mousseron 生物分子研究所 (IBMM)、CNRS UMR-5247 药学院慷慨提供

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

对人类胰岛的验证:将来自 3 个人胰腺（A、B 和 C）的胰岛置于 24 孔板中（50 个胰岛/孔，3 孔/条件），并在含有 2.8 mM 葡萄糖的 KRBH 缓冲液中于 37°C 预孵育 1 小时。孵育延长一小时并收集上清液以测量基础胰岛素分泌。接下来用 16.7 mM 葡萄糖在 37°C 下刺激胰岛 1 小时，然后收集上清液以测量葡萄糖刺激的胰岛素分泌。然后用酸-乙醇溶液裂解胰岛24小时，收集裂解物并离心。使用胰岛素高范围试剂盒试剂对上清液和裂解物中的胰岛素进行定量。
* 样本是在法国蒙彼利埃大学医院再生医学和生物治疗研究所 (IRMB) 糖尿病细胞治疗实验室生成的。

胰岛素高量程检测试剂盒详细介绍

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于酶标仪橙色检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月1日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于酶标仪橙色检测价格 4957
产品规格

200 Tests

产品货号

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于酶标仪橙色检测

产品参数

Ex (nm)	552	Em (nm)	575
分子量	–	溶剂	–
存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照

产品概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于酶标仪橙色检测是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。

点击查看光谱

荧光酶标仪
Ex:	540 nm
Em：	590 nm
Cutoff：	570 nm
推荐孔板:	黑色透明底板
读取模式:	底读模式

实验方案

样本实验方案

概述

在生长培养基中制备细胞

用测试化合物孵育细胞和Nitrixyte™橙色工作溶液

添加测定缓冲液II

在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

操作步骤

1.准备细胞：

1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中以30,000至80,000个细胞/孔/90μL对96孔板进行平板培养过夜，或对于384孔板以8,00至20,000个细胞/孔/20μL进行平板培养。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，将细胞沉淀悬浮于125,000-250,000细胞/孔/90μL的培养基中，96孔poly-D赖氨酸平板或30,000-60,000细胞/孔 /20μL，用于384孔聚-D赖氨酸板。在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定佳细胞密度。

2.准备工作解决方案：

2.1使用前将所有试剂盒组分置于室温下。

2.2为一个细胞板制备Nitrixyte™橙色工作溶液：将20μLNitrixyte™橙色储备溶液（组分A）加入10 mL分析缓冲液I（组分B）中，并充分混合。工作溶液在室温下稳定至少2小时。

注意：20μL的Nitrixyte™Orange原液足以用于一个平板。在<-20℃下等分并储存未使用的Nitrixyte™Orange原液。保护它免受光照，避免反复冻融循环。

3.运行NO测定：

3.1为刺激内源性NO，在细胞培养基或所需缓冲液（如PBS或HHBS）中用10μL10X试验化合物（96孔板）或5μL5X试验化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的培养基或化合物缓冲液。

注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后加入90μL/孔（96孔板）和20μL/孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

3.2在细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Nitrixyte™Orange工作溶液（来自步骤2.2）。将细胞与测试化合物和Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下共孵育一段所需的时间，避光。

注意1：不要去除测试化合物。

注意2：对于NONOate阳性对照处理：将细胞与Nitrixyte™Orange工作溶液在37℃下孵育30分钟。除去工作溶液，将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。详细信息请参见说明书的图1。

注意3：我们使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte™Orange，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）在37℃的细胞培养基中孵育16小时。

3.3在每口井中取出溶液。添加测定缓冲液II（组分C）100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板。

注意：在添加Assay Buffer II之前，请勿清洗细胞。

3.4使用具有底部读取模式的Ex / Em = 540 / 590nm（截止= 570nm）的酶标仪观察荧光增加，或者使用具有TRITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

相关产品

产品名称	货号
Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于酶标仪近红外检测	Cat#16359
Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于流式细胞仪橙色检测	Cat#16351
Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于流式细胞仪红色检测	Cat#16356

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于流式细胞仪橙色检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月1日由上海金畔生物科技有限公司

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Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于流式细胞仪橙色检测价格 4957
产品规格

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产品货号

Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒适合于流式细胞仪橙色检测

产品参数

Ex (nm)	552	Em (nm)	575
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

点击查看光谱

适用仪器

流式细胞仪
Ex:	488 nm
Em：	575/26 nm
通道:	PE 通道

实验方案

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将1 µL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育
4.用流式细胞仪分析

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：
将200 µL ddH2O加入小瓶NONOate阳性对照液（组分B）中，制成50 mM储备液。

2.工作溶液

2.1 NONOate阳性对照
用测定缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与1X Nitrixyte Orange，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

3.降低已经用Nitrixyte Orange预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37°C孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。

参考文献

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产品参数

Ex (nm)	586	Em (nm)	607
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

点击查看光谱

适用仪器

流式细胞仪
Ex:	640 nm
Em：	660/20 nm
通道:	APC 通道

实验方案

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.添加1 µL 500X Nitrixyte 红色
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间
4.使用FL4通道的流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的佳细胞密度。

2.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte Red（组分A）。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Red孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37℃的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与Nitrixyte Red工作溶液，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.降低已经用Nitrixyte Red预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测FL4通道（Ex / Em = 630/660 nm）处的荧光强度。

参考文献

MAGI1 Mediates eNOS Activation and NO Production in Endothelial Cells in Response to Fluid Shear Stress
Authors: Kedar Ghimire, Jelena Zaric, Begona Alday-Parejo, Jochen Seebach, Mélanie Bousquenaud, Jimmy Stalin, Grégory Bieler, Hans-Joachim Schnittler, Curzio Rüegg
Journal: Cells (2019): 388

Functions of transcription factors NF-$kappa$B and Nrf2 in the inhibition of LPS-stimulated cytokine release by the resin monomer HEMA
Authors: Helmut Schweikl, Marialucia Gallorini, Gerd Pöschl, Vera Urmann, Christine Petzel, Carola Bolay, Karl-Anton Hiller, Amelia Cataldi, Wolfgang Buchalla
Journal: Dental Materials (2018)

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产品参数

Ex (nm)	–	Em (nm)	–
分子量	–	溶剂	–
存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照

产品概述

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。

点击查看光谱

适用仪器

荧光酶标仪
激发：	650nm
发射:	680nm
cutoff：	665nm
推荐孔板：	黑色透明

实验方案

样本实验方案

概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物和Nitrite NOT工作溶液孵育细胞
3.添加分析缓冲液II
4.监测Ex / Em = 650/680 nm的荧光强度

溶液配制

1.工作溶液

将20 µL Nitrixyte NIR储备溶液（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液I（组分B）中，并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。注意：20 µL Nitrixyte NIR储备溶液足以装满一块板,远离光线。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.要刺激内源性NO，请在细胞培养基或所需的缓冲液（例如PBS或HHBS）中，用10 µL 10X测试化合物（96孔板）或5 µL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的培养基或化合物缓冲液。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和20 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。

2.在细胞板中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Nitrixyte NIR工作溶液。将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下共同孵育一段时间，并避光。注意：请勿去除测试化合物。注意：对于NONOate阳性对照治疗：将细胞与Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下孵育30分钟。除去工作溶液，并将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。有关详细信息，请参见图1。我们在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte NIR，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。有关详细信息，请参见图2。

3.除去每个孔中的溶液。加入测定缓冲液II（组分C），对于96孔板是100 µL /孔，对于384孔板是25 µL /孔。注意：在添加测定缓冲液II之前，请勿洗涤细胞。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 650/680 nm（截止= 665 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

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产品参数

Ex (nm)	–	Em (nm)	–
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

适用仪器

流式细胞仪
Ex:	640 nm
Em：	660/20 nm
通道:	APC 通道

实验方案

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.加入1 µL 500X Nitrixyte NIR
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间
4.使用APC通道通过流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的佳细胞密度。

2.将1 µL 500X Nitrixyte NIR（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用Nitrixyte NIR孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中将Raw 264.7细胞与Nitrixyte NIR工作溶液，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.旋转已用Nitrixyte NIR预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测APC通道（Ex / Em = 640/675 nm）的荧光强度。

参考文献

The Selective Acetamidine-Based iNOS Inhibitor CM544 Reduces Glioma Cell Proliferation by Enhancing PARP-1 Cleavage In Vitro
Authors: Marialucia Gallorini, Cristina Maccallini, Alessandra Ammazzalorso, Pasquale Amoia, Barbara De Filippis, Marialuigia Fantacuzzi, Letizia Giampietro, Amelia Cataldi, Rosa Amoroso
Journal: International Journal of Molecular Sciences (2019): 495

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抗体阵列的多重蛋白质检测

发表于2024年3月29日由上海金畔生物科技有限公司

抗体阵列的多重蛋白质检测

微阵列是一种能够同时检测多个分子（例如核酸、肽、蛋白质或抗体）的测定方法。它们被称为“微”阵列，因为分析物是在很小的表面积内测量的；例如，可以在标准载玻片（75 毫米 x 25 毫米）上分析数千个分子。这些工具在研究和临床中具有无价的价值，因为这些数据代表了某一时间点发生的生物过程的大快照。用于测量蛋白质的一种微阵列是抗体阵列。与一次仅分析一种蛋白质的“单重”测定（例如酶联免疫吸附测定）相比，抗体阵列提供了一种更实惠且更具成本效益的替代方案，且样品量要求低（ELISA）。

抗体阵列的工作原理

第 1 步：将捕获抗体固定到不同的基质上

抗体阵列将捕获抗体固定到固体基质上，例如载玻片、膜或微珠。对于平面阵列，具有已知结合特异性的不同捕获抗体以可寻址格式点样到标准显微镜载玻片或硝酸纤维素膜上（图 1A）。对于基于珠子的阵列，捕获抗体被固定到具有不同尺寸和荧光特性的不同珠子上。由于每种特异性抗体都固定在具有特征的珠子上，因此每个珠子的蛋白质靶标是已知的。

第 2 步：阻止阵列

步骤3：添加样品和检测抗体

第 4 步：通过化学发光或荧光检测蛋白质

抗体阵列的多重蛋白质检测 — **图 1. 阵列基底和信号检测。 (A)**为了生产抗体阵列，捕获抗体以可寻址的形式固定在玻璃、膜或微珠上。不同的颜色表示不同的目标蛋白。**(B)**使用荧光或化学发光进行多重蛋白质检测。

图 2.基于标记的免疫测定法和基于夹心的免疫测定法的比较。 (A)捕获抗体与生物素化蛋白质结合。(B)目标蛋白夹在捕获抗体和生物素化检测抗体之间。(C)蛋白质上的目标聚糖部分夹在捕获抗体和生物素化凝集素之间。

定性、半定量和定量数据

抗体阵列可以生成用于多重蛋白质检测的定性、半定量或定量数据（图 3）。定性数据的一个例子是仅通过肉眼评估的蛋白质印迹条带的强度。然而，通过定性评估很难准确估计光斑强度；因此，半定量和定量数据是优选的。

半定量和定量数据具有一定值的荧光或化学发光输出；例如，像素强度。半定量和定量数据之间的主要区别在于，定量数据具有可以与样本数据进行比较的标准曲线。可以通过半定量数据获得样品之间的相对表达差异（即倍数变化）。通过定量数据获得精确的蛋白质浓度。

数量要求

分析所需的样品量取决于样品稀释度、基质（即膜、玻璃、珠子）和设计原理（即基于标签、基于夹心）。

样品稀释

样品应至少稀释 2 倍，以避免出现称为“样品基质效应”(SME) 的现象，这是非线性稀释响应和不准确数据的常见原因。当样品中的蛋白质或其他成分影响抗体与其靶分子结合的能力时，就会发生这种情况。例如，蛋白质可能与目标分子结合，从而阻断抗体的结合位点（图 4A）。中小企业是已知和未知原因的结果。然而，通过适当的样品稀释，基质效应可以忽略不计（图 4B）。最佳稀释度会根据样品类型、实验和目标分子而有所不同；因此，在运行整个实验之前，用一些样品优化实验条件非常重要。一种可能不需要稀释的样品类型是尿液，因为它的蛋白质含量非常低。

对于血清和血浆以外的样品，样品稀释前的原始总蛋白浓度应至少为 1 mg/ml。然而，建议总蛋白浓度高于 2 mg/ml 以改善信号。这些浓度不包括可与条件培养基样品一起使用的任何血清（例如胎牛血清）。重要的是，使用浓度低于 1 mg/ml 的条件培养基样品仍可实现阵列上的高信噪比，因为上清液的蛋白质含量低于细胞和组织。个体之间血清和血浆中的蛋白质浓度范围很窄，平均总蛋白质浓度约为 70 mg/ml。

不同的细胞和组织含有不同量的蛋白质。因此，加载到阵列上的细胞、组织和样品的量必须凭经验确定。尽管如此，良好的起点是：每 100 万个细胞或 10 mg 组织使用 500 µL 裂解缓冲液，在 100 mm 组织培养板中接种约 100 万个细胞，并培养 5 天作为培养基样品。

请参阅我们的其他博客，了解有关制备用于免疫测定的细胞和组织裂解物、条件培养基样品、血清/血浆样品和尿液的更多信息。

基板及设计原理

由于膜阵列的表面积较大，因此比玻璃阵列和珠阵列需要更多的样品。然而，基于膜的阵列仍然是多重蛋白质检测的流行选择，因为它们易于操作，可以使用常见且廉价的仪器检测其化学发光，并且它们的背景噪声通常低于细胞和组织的玻璃基阵列裂解物。

利用基于标记的阵列，每种样品蛋白质都可以与大量生物素分子结合，从而放大信号并提高灵敏度。因此，基于标签的阵列需要非常低的样本量。表 1 提供了基于阵列基质和设计原理的血清样品体积要求的比较。列出的体积未考虑移液误差或管侧面的样品损失。

表 1. 基于固体支持物的血清体积要求和抗体阵列的设计原理

基于标签的抗体阵列与Sandwich-based的抗体阵列

基于标签的数组

基于标记的抗体阵列每种蛋白质仅使用一种抗体：捕获抗体（图 2A）。因此，由于有大量可用抗体，非常高密度的阵列是可能的。由于抗体可以与非靶蛋白发生交叉反应，因此使用基于标记的阵列获得的任何结果都应使用正交平台（例如蛋白质印迹）进行验证。 RayBiotech 提供用于多重蛋白质检测的高密度标记阵列（L 系列），可测量多达 6,000 种人类蛋白质；第1308章鼠类蛋白； 1500 种大鼠蛋白；或同时 500 个兔蛋白。

基于标签的数组摘要

最高密度
特异性低于夹心阵列
所需样品量非常低
半定量数据
固体支撑：玻璃和膜
生物标志物发现的选择

Sandwich-based的阵列

基于三明治的阵列具有非常高的特异性，因为每种蛋白质需要两种不同的抗体才能检测到固定化蛋白质（图 2B）。然而，找到可以在夹心免疫测定中配对的两种抗体可能需要进行广泛的抗体筛选。抗体不仅必须与同一蛋白质上的不同区域（或表位）结合，而且表位必须易于在平台上结合。在某些情况下，两种抗体可能不会作为捕获-检测对工作，而是以检测-捕获配置工作。

RayBiotech 提供基于膜（C 系列）、珠子（RayPlex）和玻璃（G 系列、磷酸化阵列、Quantibody）基质的夹心阵列。这些阵列可以测量多达1,200 种人类蛋白质； 640 种小鼠蛋白质；或同时 67 种大鼠蛋白。使用这些阵列检测到的其他物种包括牛、犬、猫、马、猪、兔、恒河猴、鸡、海豚和绵羊。 RayPlex 和 Quantibody 阵列都提供定量数据。

Sandwich-based的阵列总结

低密度到高密度
最高特异性：每个靶标有两种抗体（即抗体对）
半定量和定量数据
固体支持物：玻璃、膜和珠子
临床试验和生物标志物验证的选择

表 2 提供了 RayBiotech 提供的基于标记的抗体阵列和基于夹心的阵列的比较。图 5 描绘了帮助在多重蛋白质检测的定性、半定量或定量数据之间做出决定的决策树。

表 2. 基于标签和 Sandwich-based的抗体阵列的比较

结论

抗体阵列是一种用于蛋白质分析和多重蛋白质检测的强大技术。抗体芯片具有不同类型的格式和数据输出，可以满足不同的研究需求和能力。可同时分析数百至数千种蛋白质的高密度阵列是大规模蛋白质分析和生物标志物发现研究的理想选择。还有一些较小的小组专注于特定的生物过程或途径，例如炎症、生长因子、血管生成和肥胖。值得注意的是，抗体阵列的面板可以定制，并且可以为人员、时间或仪器有限的实验室提供完整的测试服务。

阿尔茨海默病新型生物标志物的检测试剂介绍

发表于2024年3月27日由上海金畔生物科技有限公司

阿尔茨海默病新型生物标志物的检测试剂介绍

新型 p-tau 生物标志物：苏氨酸 181 (pT-181)、苏氨酸 217 (pT-217) 和苏氨酸 231 (pT-231) 磷酸化的总 tau，在临床前阿尔茨海默病中增加更为显着，可以准确诊断阿尔茨海默病。

生物标志物新的p-tau生物标志物:总tau蛋白，在苏氨酸-181(PT-181)、苏氨酸-217(PT-217)和苏氨酸-231(PT-231) 处磷酸化，在临床前阿尔茨海默病中增加更为显著，并且可以准确地诊断阿尔茨海默病。

与目前市场上的其他产品相比，我们的ELISA试剂盒基于ouFAST技术范式表现出色。

灵活性:80uL样品足以进行检测

精确:检测低至0.1ng/mL

很简单:将样品和检测合并为一个步骤

节省时间:总共只需2小时，而不是传统的5-6小时

如何定量检测cAMP和cGMP

发表于2024年3月24日由上海金畔生物科技有限公司

如何定量检测cAMP和cGMP

1958年Sutherland发现了cAMP(环磷酸腺苷)，并因此获得了1971年诺贝尔生理与医学奖[1].1963年Ashman发现了cGMP（环磷酸鸟苷）[2]。50年过去了，人们已明白cAMP、cGMP是在很多生理过程中发挥重要调节作用的第二信使分子。鸟苷酸环化酶可将GTP催化生成cGMP，cGMP可以被磷酸二酯酶水解成GDP。激活鸟苷酸环化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加细胞内cGMP的含量。cGMP特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾病，比如cGMP特异性磷酸二酯酶类型5的抑制剂被用来治疗ED（勃起功能障碍）；腺苷酸环化酶将ATP催化生成cAMP，cAMP可以被磷酸二酯酶水解成ADP。激活腺苷酸环化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加细胞内cAMP的含量。腺苷酸环化酶激活受体的阻断剂和cAMP特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾病，比如针对升高cAMP水平的b-肾上腺素受体的阻断剂被用于治疗心律失常、高血压、心肌梗塞和心力衰竭等疾病。

在五十年的研究历程中，从开始研究cAMP，cGMP在各种生理过程中的调节作用，到近几年与之相关的药物研发，药物筛选领域，人们一直在努力寻找一种快速、灵敏、特异性和可重复地定量检测cAMP和cGMP含量的方法。

检测方法演变

cAMP，cGMP分子量分别只有329.21和345.21，在机体内的含量极低，为p mol/L级别，用一般的分析方法无法测定。70年代一系列测定cAMP和cGMP的方法被发明出来，最基本的原理有三种：分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进，由于这种方法采用放射性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量检测中做出了巨大贡献，但同时它也有着明显的缺陷：

1，兔多抗对cAMP，cGMP的特异性不高，会与其他核苷类似分子发生交叉反应，尽管可以通过特异亲和提纯降低交叉，但仍然无法消除交叉；

2，兔多抗对cAMP和cGMP的亲和力受高浓度的二价阳离子（比如Mg²⁺和Ca²⁺）的影响；

3，兔多抗在制备的过程中存在个体差异和批间差异，难以保证检测数据的重复性；

4，兔多抗试剂盒在cAMP，cGMP样品的处理上也需要进行乙酰化处理，这与兔多克隆抗体制备方法有必然关系，如果不乙酰化将无法达到检测所需的灵敏度。

所以无论标记方法如何革新，不改进抗体，仍然不能从根本上迎来cAMP，cGMP定量检测的变革。

cAMP和cGMP单克隆抗体成功开发

NewEast Biosciences（纽斯特）公司的科学家经过两年的研发，筛选了4万多个克隆，终于从中发现了高特异性，高亲和力的cAMP和cGMP单克隆抗体。并成功构建了基于单抗的cAMP和cGMP ELISA检测试剂盒。这个cAMP（cGMP）单抗对非乙酰化的cAMP（cGMP）的特异性识别能力是其对cGMP（cAMP）、ATP（GTP）以及其他核苷类似物识别能力的10⁸倍以上，这相比于以往的多抗试剂盒大大提高了cAMP (cGMP) 检测的灵敏性和特异性，并且极大的降低了试剂盒的批间差异，提供了长久有效地可重复性检测，也摆脱了繁琐的乙酰化过程和对科研人员健康不利的乙酰化挥发试剂。

2024年 5月
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