Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒是美国AAT Bioquest研发的检测NADP/NADPH的试剂盒，细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH及其磷酸酯NADPH的检测对于疾病诊断和发现是重要的。通常，氧化还原偶联NAD / NADH和NADP / NADPH在能量代谢，糖酵解，三羧酸循环和线粒体呼吸中起关键作用。细胞中NAD（P）H水平升高与活性氧（ROS）和DNA损伤的异常产生有关。然而，由于缺乏敏感的NAD（P）H探针，检测细胞内NAD具有挑战性。（P）H在生物系统中。Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种监测远光谱活细胞中细胞内NAD（P）H水平的有效方法，可与其他应用如GFP表达细胞或MitoTracker的应用相结合。JJ1902 NAD（P）H探针是一种的荧光探针，用于检测和成像细胞中的NADH / NADPH。该荧光探针结合NADH / NADPH，产生高灵敏度和特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD（P）H探针可以很容易地加载到活细胞中，并且可以使用APC通道中的流式细胞仪方便地监测其荧光信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒。 

实验样品示例

概述

1.准备细胞（0.5  –  1×10⁶细胞/ mL）

2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟

3.将细胞洗净并保持在测定缓冲液中

4.使用APC通道用流式细胞仪分析细胞

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.对于每个样品，将细胞制备在0.5 mL无血清培养基或您选择的缓冲液中，密度为1×105至1×10⁶个细胞/ mL。

注意1：应对每个细胞系进行单独测评，以确定佳细胞密度。 对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用无血清培养基洗涤细胞一次。

注意2：JJ1902 NAD（P）H探针在血清存在的情况下也兼容。

2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。

注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。 优化每个实验的孵育时间。

3.将1μL JJ1902NAD（P）H探针（组分A）加入0.5 mL细胞悬浮液中。在37℃下孵育30-60分钟。

注意对于NADH / NADPH阳性对照处理：将Jurkat细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共温育30分钟。 详细信息请参见说明书中的图1。

4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。

5.使用流式细胞仪监测APC通道的荧光强度。

参考文献

Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133

Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61

Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27

MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)

Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705

Pyrroloquinoline Quinone, a Redox-active o-Quinone, Stimulates Mitochondrial Biogenesis by Activating SIRT1/PGC-1α Signaling Pathway
Authors: Kazuhiro Saihara, Ryosuke Kamikubo, Kazuto Ikemoto, Koji Uchida, Mitsugu Akagawa
Journal: Biochemistry (2017)

Resveratrol attenuates excessive ethanol exposure induced insulin resistance in rats via improving NAD+/NADH ratio
Authors: Gang Luo, Bingqing Huang, Xiang Qiu, Lin Xiao, Ning Wang, Qin Gao, Wei Yang, Liping Hao
Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)

A Snapshot of the Plant Glycated Proteome STRUCTURAL, FUNCTIONAL, AND MECHANISTIC ASPECTS
Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636

AMPK activation protects cells from oxidative stress-induced senescence via autophagic flux restoration and intracellular NAD+ elevation
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Journal: Aging cell (2016): 416–427

Cell-Line Selectivity Improves the Predictive Power of Pharmacogenomic Analyses and Helps Identify NADPH as Biomarker for Ferroptosis Sensitivity
Authors: Kenichi Shimada, Miki Hayano, Nen C Pagano, Brent R Stockwell
Journal: Cell chemical biology (2016): 225–235

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Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒 绿色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测线粒体的试剂盒，线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。低至中等水平的超氧化物的产生对于许多基本细胞过程的适当调节是至关重要的，包括基因表达，信号转导和肌肉适应耐力运动训练。不受控制的线粒体超氧化物产生可引发细胞氧化损伤，其导致多种疾病的发病机理，包括癌症，心血管疾病，神经退行性疾病和衰老。细胞内线粒体超氧化物的检测对于理解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响非常重要。Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂MitoROS 520来量化活细胞中的超氧化物水平.MitoROS 520具有细胞渗透性，能够快速，有选择地检测线粒体中的超氧化物。它在与超氧化物反应时产生绿色荧光，并且在Ex / Em = 490 / 520nm处可以容易地读取所得荧光。Cell Meter 荧光线粒体超氧化物活性测定试剂盒提供灵敏的一步荧光测定法，用于检测活细胞中的线粒体超氧化物，孵育1小时。该试剂盒可用于流式细胞仪和荧光显微镜应用。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体过氧化物活性检测试剂盒。 

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活性氧（ROS）篇：包含总ROS和多种活性氧离子检测试剂大全

样本实验方案

概述

适用于荧光显微镜：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.添加MitoROS™520工作解决方案

4.将细胞在37°C染色60分钟

5.监测Ex / Em = 490 / 530nm处的荧光增加

适用于流式细胞仪：

1.在生长培养基中制备细胞

2.用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物

3.在37°C下染色细胞60分钟

4.用流式细胞仪监测荧光强度

操作步骤

对于荧光显微镜/ 96孔微孔板：

1.用10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384孔板）在培养基或所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意：我们用5μM抗霉素A（AMA）在37°C处理RAW 264.7巨噬细胞2小时以诱导超氧化物。 

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MitoROS™520工作溶液加入到细胞板中。

4.将细胞在37°C孵育1小时，并使用荧光显微镜和FITC过滤器拍摄图像。

对于流式细胞仪：

1.根据需要处理细胞。

2.为了诱导超氧化物，将细胞在37℃下孵育一段所需的时间，避光。

注意我们用50μM抗霉素A（AMA）在37℃处理Jurkat细胞2小时以诱导超氧化物。

3.将1μL/ 0.5 mL MitoROS™520原液（500X）细胞加入细胞中。

4.将细胞在5％CO 2,37℃培养箱中孵育1小时，并使用FITC通道中的流式细胞仪监测荧光强度（Ex / Em = 488 / 530nm）。

参考文献

Comparison of the detrimental features of microglia and infiltrated macrophages in traumatic brain injury: A study using a hypnotic bromovalerylurea
Authors: Naoki Abe, Mohammed E Choudhury, Minori Watanabe, Shun Kawasaki, Tasuku Nishihara, Hajime Yano, Shirabe Matsumoto, Takehiro Kunieda, Yoshiaki Kumon, Toshihiro Yorozuya
Journal: Glia (2018)

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样品实验方案

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与测试化合物和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育
3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON绿色库存解决方案（500X）：
向DAX-J2 PON Green小瓶（组分A）中添加20 µL DMSO（组分C）。 注意：20 µL的复配DAX-J2 PON Green储备溶液足以装满1个板。

2.工作溶液

将10μL的500X DMSO重构的DAX-J2 过氧亚硝酸盐传感器储备溶液添加到500μL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。 注意：工作解决方案不稳定； 使用前根据需要进行准备。

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样品操作及实验分析

1.在90 µL（96孔板）或22.5 µL（384孔板）中添加10 µL /孔（96孔板）或2.5 µL /孔（384孔板）的DAX-J2 PON Green工作溶液。细胞板中每孔的细胞培养。注意：染色前无需清洗细胞。建议用完全培养基染色细胞。

2.将DAX-J2 PON Green与测试化合物在完全培养基中或在所需缓冲液中的37°C下共孵育细胞一段时间，并避光。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。注意：建议用完全培养基染色细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在染色前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔（96孔板）和22.5 µL /孔（384孔板）的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将RAW 264.7巨噬细胞与50-200 µM SIN-1和DAX-J2 PON Green在完全培养基中于37°C共同孵育1小时，以诱导亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图1。

3.或者，用DAX-J2 PON Green在37°C避光的环境下染色细胞1小时。除去工作溶液，然后在完全培养基中或在所需的缓冲液中于37°C用测试化合物处理细胞所需的时间。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 490/530 nm（截止波长= 515 nm）下以底部读取模式监控荧光的增加，或使用带有FITC滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

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Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 适用于流式细胞仪 是美国AAT Bioquest生产的用于检测亚硝酸盐的试剂盒，过氧亚硝酸盐（ONOO-）是强氧化物质和高活性硝化剂。过氧亚硝酸盐由超氧化物自由基与细胞内产生的一氧化氮之间的反应形成。它可以破坏各种生物分子，包括蛋白质，酶，脂质和核酸，终导致细胞死亡。同时，过氧亚硝酸盐还可以通过促进针对入侵病原体的宿主防御反应而在体内具有保护活性。因此，过氧亚硝酸盐是涉及广泛的生理和病理过程的必需生物氧化剂。由于其半衰期极短且稳态浓度低，因此检测和了解过氧亚硝酸盐在生物系统中的作用一直具有挑战性。为了解决这一未满足的需求，AAT Bioquest的Cell Meter 荧光细胞内过氧亚硝酸盐（ONOO-）检测试剂盒提供了一种监测活细胞中ONOO水平的灵敏工具。 AAT Bioquest的DAX-J2 PON Green是一种优秀的荧光探针，可与细胞间ONOO’发生特异反应，生成亮绿色荧光产品。该试剂盒针对流式细胞仪进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 荧光法细胞内过亚硝酸盐检测试剂盒 适用于流式细胞仪 。 

样品实验方案 

简要概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.将细胞与测试化合物（刺激ONOO′）和DAX-J2 PON Green工作溶液共同孵育
3.监测Ex / Em = 490/530 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAX-J2 PON绿色库存解决方案（400X）：
将25 µL DMSO（组分C）添加到DAX-J2 PON Green（组分A）小瓶中，并充分混合。 注意：1 µL的复配DAX-J2 PON Green储备液足以容纳0.4 mL的细胞。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.将DAX-J2 PON Green与测试化合物在完全培养基中或在所需缓冲液中的37°C下共孵育细胞一段时间，并避光。对于对照孔（未处理的细胞），添加相应量的化合物缓冲液。注意：建议用完全培养基染色细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在染色前将生长培养基和血清因子吸掉。将细胞悬浮于1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或抽吸后选择的缓冲液中。或者，可以在无血清培养基中对细胞进行染色。我们将RAW 264.7巨噬细胞与50-200 µM SIN-1和DAX-J2 PON Green在完全培养基中于37°C共同孵育1小时，以诱导亚硝酸盐。有关详细信息，请参见图1（A）。

2.或者，用DAX-J2 PON Green在37°C避光的环境下染色细胞1小时。除去工作溶液，然后在完全培养基中或在所需的缓冲液中于37°C用测试化合物处理细胞所需的时间。有关详细信息，请参见图1（B）。

3.使用流式细胞仪监测FITC通道（Ex / Em = 490/530 nm）的荧光强度。

参考文献

Concept and connotation of oxidative stress in preeclampsia
Authors: Hayder M Al-Kuraishy, Ali I Al-Gareeb, Thabat J Al-Maiahy
Journal: Journal of Laboratory Physicians (2018): 276

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Gene silencing of endothelial von Willebrand Factor attenuates angiotensin II-induced endothelin-1 expression in porcine aortic endothelial cells
Authors: Anar Dushpanova, Silvia Agostini, Enrica Ciofini, Manuela Cabiati, Valentina Casieri, Marco Matteucci, Silvia Del Ry, Aldo Clerico, Sergio Berti, Vincenzo Lionetti
Journal: Scientific Reports (2016)

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Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。 作为自由基，NO被快速氧化，并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

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样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×106细胞/ mL）
2.将1 µL 500X Nitrixyte 橙色加入0.5 mL细胞悬液中
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育
4.用流式细胞仪分析

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备溶液（50 mM）：
将200 µL ddH2O加入小瓶NONOate阳性对照液（组分B）中，制成50 mM储备液。

2.工作溶液

2.1 NONOate阳性对照
用测定缓冲液（组分C）将NONOate阳性对照原液稀释至1-2 mM工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte 橙色（组分A）。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Orange孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

2.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Orange在37°C下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与1X Nitrixyte Orange，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

3.降低已经用Ni​​trixyte Orange预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37°C孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

4.使用流式细胞仪监测FL2通道（Ex / Em = 488/590 nm）处的荧光强度。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

点击查看光谱

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.添加1 µL 500X Nitrixyte 红色
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间
4.使用FL4通道的流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×10⁵至1×10⁶细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的佳细胞密度。

2.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL 500X Nitrixyte Red（组分A）。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与Nitrixyte Red孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte Red在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37℃的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与Nitrixyte Red工作溶液，20μg/ mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.降低已经用Ni​​trixyte Red预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测FL4通道（Ex / Em = 630/660 nm）处的荧光强度。

参考文献

MAGI1 Mediates eNOS Activation and NO Production in Endothelial Cells in Response to Fluid Shear Stress
Authors: Kedar Ghimire, Jelena Zaric, Begona Alday-Parejo, Jochen Seebach, Mélanie Bousquenaud, Jimmy Stalin, Grégory Bieler, Hans-Joachim Schnittler, Curzio Rüegg
Journal: Cells (2019): 388

Functions of transcription factors NF-$kappa$B and Nrf2 in the inhibition of LPS-stimulated cytokine release by the resin monomer HEMA
Authors: Helmut Schweikl, Marialucia Gallorini, Gerd Pöschl, Vera Urmann, Christine Petzel, Carola Bolay, Karl-Anton Hiller, Amelia Cataldi, Wolfgang Buchalla
Journal: Dental Materials (2018)

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

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Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用，作为DAF-2的优异替代品，用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比，Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange，可与NO反应生成亮橙色荧光产品，其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中，使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮（NO）活性检测试剂盒。 

样本实验方案

概述

1.准备细胞（0.5-1×10⁶细胞/ mL）
2.加入1 µL 500X Nitrixyte NIR
3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间
4.使用APC通道通过流式细胞仪分析细胞

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 NONOate阳性对照储备液（50 mM）：
将200 uL ddH₂O加入小瓶NONOate阳性对照（组分B）中，制成50 mM NONOacte阳性对照处理原液。

2.工作溶液

用测定缓冲液（组分C）稀释50 mM NONOate阳性对照原液，制成1-2 mM NONOate阳性对照工作溶液。

点击查看细胞制备方案

样品操作及实验分析

1.对于每个样品，在0.5 mL温热培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导NO的佳细胞密度。

2.将1 µL 500X Nitrixyte NIR（组分A）加入0.5 mL细胞悬液中。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用Nitrixyte NIR孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

3.将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR在37ºC下孵育所需的时间，以生成内源性或外源性NO。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。注意：我们已在37°C的细胞培养基中将Raw 264.7细胞与Nitrixyte NIR工作溶液，20 µg / mL脂多糖（LPS）和1 mM L-精氨酸（L-Arg）孵育16小时。

4.旋转已用Nitrixyte NIR预孵育30分钟的细胞。用1 mM DEA NONOate阳性对照工作溶液重悬细胞，并在37ºC下再孵育30分钟。有关详细信息，请参见图1。

5.使用流式细胞仪监测APC通道（Ex / Em = 640/675 nm）的荧光强度。

参考文献

The Selective Acetamidine-Based iNOS Inhibitor CM544 Reduces Glioma Cell Proliferation by Enhancing PARP-1 Cleavage In Vitro
Authors: Marialucia Gallorini, Cristina Maccallini, Alessandra Ammazzalorso, Pasquale Amoia, Barbara De Filippis, Marialuigia Fantacuzzi, Letizia Giampietro, Amelia Cataldi, Rosa Amoroso
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Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
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