Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪近红外检测-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪近红外检测 价格 4957
产品规格

200 Tests

产品货号

Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪近红外检测

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒 适合于酶标仪橙色检测 是美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞内一氧化氮活性的试剂盒,一氧化氮(NO)是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。 改变的NO产生涉及各种免疫,心血管,神经变性和炎性疾病。 作为自由基,NO被快速氧化,并且体内存在相对低浓度的NO。 检测和了解NO在生物系统中的作用一直具有挑战性。 Cell Meter 荧光细胞内一氧化氮检测试剂盒提供了一种监测活细胞内细胞内NO水平的敏感工具。

Nitrixyte 探针在我们的试剂盒中开发和使用,作为DAF-2的优异替代品,用于检测和成像细胞中的游离NO。 与常用的DAF-2探针相比,Nitrixyte 探针具有更好的光稳定性和增强的细胞渗透性。 该特殊试剂盒使用Nitrixyte Orange,可与NO反应生成亮橙色荧光产品,其光谱特性与Cy3®和TRITC相似。Nitrixyte Orange可以很容易地加载到活细胞中,使用Cy3®或TRITC过滤器可以方便地监测其荧光信号。该试剂盒针对荧光成像和酶标仪应用进行了优化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Cell Meter 细胞内一氧化氮(NO)活性检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
激发: 650nm
发射: 680nm
cutoff: 665nm
推荐孔板: 黑色透明
实验方案

样本实验方案

概述

1.在生长培养基中准备细胞
2.用测试化合物和Nitrite NOT工作溶液孵育细胞
3.添加分析缓冲液II
4.监测Ex / Em = 650/680 nm的荧光强度

 

溶液配制

1.工作溶液

将20 µL Nitrixyte NIR储备溶液(组分A)添加到10 mL的测定缓冲液I(组分B)中,并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。 注意:20 µL Nitrixyte NIR储备溶液足以装满一块板,远离光线。

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样品操作及实验分析

1.要刺激内源性NO,请在细胞培养基或所需的缓冲液(例如PBS或HHBS)中,用10 µL 10X测试化合物(96孔板)或5 µL 5X测试化合物(384孔板)处理细胞。对于对照孔(未处理的细胞),添加相应量的培养基或化合物缓冲液。注意:添加化合物之前不必洗涤细胞。但是,如果测试的化合物对血清敏感,则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。加入90 µL /孔(96孔板)和20 µL /孔(384孔板)的1X Hank盐溶液和20 mM Hepes缓冲液(HHBS)或抽吸后选择的缓冲液。或者,细胞可以在无血清培养基中生长。

2.在细胞板中加入100 µL /孔(96孔板)或25 µL /孔(384孔板)的Nitrixyte NIR工作溶液。将细胞与测试化合物和Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下共同孵育一段时间,并避光。注意:请勿去除测试化合物。注意:对于NONOate阳性对照治疗:将细胞与Nitrixyte NIR工作溶液在37°C下孵育30分钟。除去工作溶液,并将细胞与1mM DEA / NONOate在37℃下进一步孵育30分钟以产生一氧化氮。有关详细信息,请参见图1。我们在37°C的细胞培养基中使用Raw 264.7细胞与0.5X Nitrixyte NIR,20 µg / mL脂多糖(LPS)和1 mM L-精氨酸(L-Arg)孵育16小时。有关详细信息,请参见图2。

3.除去每个孔中的溶液。加入测定缓冲液II(组分C),对于96孔板是100 µL /孔,对于384孔板是25 µL /孔。注意:在添加测定缓冲液II之前,请勿洗涤细胞。

4.使用酶标仪在Ex / Em = 650/680 nm(截止= 665 nm)下以底部读取模式监控荧光的增加,或使用带有Cy5®滤光片的荧光显微镜拍摄图像。

 

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12

 

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