核酸污染清除试剂活性测定试纸

货号 ：A9411.0025

品名 ：ExitusPlus Activity Test（核酸污染清除试剂活性测定试纸）

规格 ：25Tests（25条试纸）

背景介绍：

随着分子生物学的发展，PCR技术以其操作方便，灵敏度高，所以被广泛使用到分子遗传各种研究中，但是也正由于其高灵敏度，使得微量的核酸污染便可造成PCR假阳性结果。裸露的核酸片段、气溶胶中的核酸污染如果得不到有效抑制和清除，就会导致材料，时间，人力和财力的大量浪费和损失。为克服核酸污染这一急需解决的问题，德国AppliChem研发了具有特色的核酸污染清除试剂–DNA-ExitusPlus™ ，这是一种无腐蚀、无致癌性的高效核酸污染清除溶液，该产品可将裸露的核酸降解至无法作为扩增模板的小片段，并无法恢复，从而消除了PCR过程中由于非目的核酸模板而导致的假阳性扩增，收到了广大客户的一致好评，作为实验方法发表于《Nature》（产品货号A7089和A7409）。

在大量订购和使用核酸污染清除试剂–DNA-ExitusPlus过程中，客户经常会遇到以下问题：

1， 由于大量订购产品，部分情况下手中的核酸污染清除试剂（A7089和A7409）未在标定效期内用完， 是否还可以继续使用？（产品是否还具有核酸污染清除能力？）

2， 核酸污染清除试剂（A7089和A7409）用于浸泡耗材时是否可以重复利用？

为了保证客户购买的核酸污染清除试剂更好的利用，AppliChem出品了核酸污染清除试剂活性测定试纸（货号A9411） 以帮助客户解决上述问题。

使用方法：

取待测溶液少许，试纸浸入30秒，取出试纸比色：

1. 比对结果显示在“sufficient efficacy”区间的即为有活性，可以继续使用。
2. 对比结果显示在Frequently re-test区间为临近活性丧失，可以使用，但是要每2天测一次。
3. 对比结果显示在insufficient efficacy区间为活性已丧失无法继续使用

生物活性多肽在内源性物质中占有非常重要的地位，除酶、受体、金属蛋白等生物大分子外，许多合成或分离的多肽对生理过程或病理过程，对疾病的发生、发展或治疗过程有重要意义。多肽中的氨基酸残基彼此以酰胺键（也称肽键）相连接。一般来说，含有的氨基酸少于10个的肽段就称作寡肽，超过的就称为多肽。多肽与蛋白质只有肽链长短之别，二者间并没有严格的区分。

伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展，多肽研究取得了惊人的的飞跃。人们发现存在于生物体的多肽有数万种，并且发现所有的细胞均能合成多肽。同时，几乎所有的细胞也都受多肽调节，它涉及激素、神经、细胞生长与生殖等各个领域。事实上，肽类药物开发与应用已走出科学家们的实验室，变成了现实，并发挥着其独特的功效。例如，神经紧张肽（NT）能降低血压，对肠和子宫具有收缩作用；促甲状腺素释放激素（TRH）是一种能促进产妇乳汁分泌的多肽；能治疗糖尿病、胃溃疡、胰腺炎的多肽是一种环状的14肽；临床上常用的催产素是一种多肽；近日来在中国及日本已开始使用的糖肽辅助治疗肿瘤，其作用机理是使淋巴系统活化等等。应用多肽技术开发的医用蛋白质芯片（肽芯片）只有指甲盖大小，放置了与肾炎、胃溃疡和胃癌等相关的抗原分子，只要通过芯片阅读仪便可检测到有关疾病的功能状态与变异情况。肽芯片的广泛应用，已在医学临床检测业引发一场技术革命。

自从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成（SPPS）方法以来，经过不断的改进和完善，到今天这个方法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术，许多普通的单位都可以通过现成的多肽合成方案进行合成。对于新手来说，了解一定的多肽合成的原理，对于认识多肽合成的过程，排除合成中碰到的问题都是有好处的。简单来说，最基本的程序化的多肽合成工艺无非就是树脂溶胀、脱保护、偶联、再脱保护、再偶联……其他特殊的合成都是在这个基础上建立的。对于多肽合成的新手来说，有几个误区需要注意：

多肽合成误区一：合成时间越长越好。多肽合成的效率经过多年的摸索和优化，每一步的合成效率在短时间内都能达到99%以上，过长的反应时间对正面的反应产率提高非常有限，却大大增加了副反应发生的机率，所以过长的反应时间并不好。

多肽合成误区二：万能的切肽试剂。大部分的多肽都可以用一套切肽试剂的组合从树脂上切下来，而对于有特殊侧链保护的氨基酸，往往需要调整这种组合，而对于没有侧链保护的多肽序列，是需要加入98%TFA和2%水的溶液就可以完成，要灵活运用切肽试剂的组合。

多肽合成误区三：氨基酸的侧链保护都一样。带有活泼侧链的氨基酸在合成中需要保护，根据侧链的不同，保护基也有不同的选择。选择适当的保护基可以有效地减少合成的难度。

美国Cali-Bio拥有多肽合成过程中最先进的技术和工艺，已经为美国众多的科研机构、大专院校及生物公司成功合成了数以万计的高纯度的多肽，应用于抗体制备、药物研发及多肽疫苗的研制等各个领域。上海金畔生物科技有限公司将Cali-Bio的多肽合成服务引进中国，结合中国国情，旨在为中国客户提供国外多肽合成的品质、享有国内合成价格的特殊服务。为回馈客户对上海金畔生物科技有限公司产品和服务的支持，现提供美国Cali-Bio多肽合成服务85折特价回馈！详情请点击：多肽合成-美国Cali-Bio多肽合成服务85折特价回馈

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近年来，随着经济发展，兰花培育逐渐向工业化生成发展。但由于兰花植物种子发育不全，在自然条件下萌发率极低，繁殖困难。传统的栽培分株繁殖，周期长、育种进程缓慢且繁殖困难。利用植物组织培养技术能够大大提供繁殖速度，植物组培技术已成为兰花生产的主要技术手段。

上海金畔生物科技有限公司代理的美国知名植物培养基供应商PhytoTechLabs（以下简称PhytoTech）为广大客户提供多种兰科类组织培养技术所需的培养基，种类丰富，包括陆生兰科培养基、改良兰科培养基、兰科播种培养基、兰科维持培养基、兰科繁殖培养基、兰科种子休眠培养基等等。那我们如何选择合适的兰花培养基呢？下面我们将PhytoTech的兰花培养基按照属和培养类型分类，帮助客户筛选自己所需的合适的兰花培养基。

陆生兰花培养基选择指南（Terrestrial Orchid Media Selection Guideby Genus）

附生兰科培养基选择指南（Epiphytic Orchid Media Selection Guide by Genus）

PhytoTech产品特色：

• 通过ISO9001：2000质量体系认证
• 所有产品均按照cGMP标准生产和包装
• 所有产品的生产过程均受到严格的质量控制
• 每个产品都经过物理化学以及两个植物品种以上的生物学检测
• 预混培养基，批件稳定、节省人力时间

PhytoTech公司从1997年成立不断发展壮大，至今已成专业的植物研究领域的试剂与原料供应商，PhytoTech主要产品有各类优质植物组培培养基、植物凝胶、植物生长调节剂、抗生素以及植物学研究所需的各种工具与耗材。

上海金畔生物科技有限公司作为PhytoTech公司的中国一级代理，为广大植物学客户提供高品质植物学产品以及优质的售前售后服务。此外，上海金畔生物科技有限公司代理的Agrisera植物一抗；PCT广谱性高效植物组培抗菌剂PPM；SereCare KPL优质二抗、底物和Cali-Bio琼脂糖、标签内参抗体全方位助力植物学研究，为您带来一站式便捷体验。

若对产品感兴趣欢迎致电上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登陆网站www.jinpanbio.cn了解更多信息。

病毒载体技术的进步提高了基因和细胞治疗的安全性和有效性，全球已有多种基因和细胞治疗药物被监管机构批准上市。目前大多数基因/细胞治疗方法都是利用病毒载体来实现的，其中最常用的两种病毒载体——腺相关病毒（AAV）载体常被用于基因治疗，而慢病毒（LV）载体则常被用于基因修饰的细胞治疗。病毒载体通常是将2-4个质粒共转入HEK293细胞生产出的，而转染试剂是病毒载体生产的关键要素之一，对转染效率和功能效价有显著影响。第一代非病毒转染方法依靠简单的线性聚合物，如聚乙烯亚胺(PEI)或脂质体将DNA转入到细胞内，但其性能并不能完全满足病毒载体的大规模生产需求。虽然人工合成转染试剂在过去30年里取得了巨大的进步，但仍然难以逾越大自然在数十亿年进化出的依靠病毒传递基因的效率。因此，优化非病毒转染性能的最佳方法是尽可能模仿出病毒转运DNA的自然机制的试剂。

上海金畔生物科技有限公司代理的Mirus转染试剂就是利用自然基因传递机制作为其化合物库的设计灵感，从中筛选出适合病毒生产的混合配方，将转染试剂与核酸的静电相互作用、细胞吸附与内吞、胞内释放、基因表达效率和降低细胞毒性等几乎所有影响转染成功率的因素全部考虑在内。通过不懈的努力，Mirus开发出了一种全新的仿生转染技术——TransIT-VirusGEN系列转染试剂，它不仅仅是基于PEI或脂质体，而是采用多组分脂质聚合物纳米复合物（LPNC），能够高效地结合和包裹DNA，将其带入悬浮或贴壁的HEK293细胞中，然后将其从细胞核内释放，以便同时满足2-4个不同的质粒的表达，这种全新的转染试剂比单独使用PEI及其衍生聚合物或脂质体的转染效率和完整病毒生产效率都有显著提高。同时，Mirus还研发出了一种完全合成的（无动物源）转染增强剂（Enhancer），与TransIT-VirusGEN转染试剂搭配使用时，可以进一步提高病毒滴度。另外，为了满足病毒载体从研发到大规模生产不同阶段的需求，Mirus分别推出了R&D、SELECT和GMP三种级别的TransIT-VirusGEN转染系列产品，以适应不同阶段病毒载体的生产规模、效率以及法规要求。

实验表明，Mirus基于LPNC的转染试剂可以在不同的细胞培养平台（贴壁和悬浮）、生物反应器和培养基类型中提高病毒产量和功能性病毒滴度。与业内其他金标准相比，在不使用增强剂的情况下，病毒滴度至少可提高2-4倍。而在加入增强剂之后，在合适的培养条件下，病毒产量甚至能够提高10倍以上！（结果见下图1-5）

图1. 基于脂质聚合物纳米复合物（LPNC）和聚乙烯亚胺（PEI）配方的转染试剂用于腺相关病毒(AAV)和慢病毒(LV)载体生产的性能对比。分别用基于LNPC的TransIT-VirusGEN试剂（不含增强剂与含增强剂）、25kda PEI和基于PEI技术的竞争品牌A3转染试剂产生AAV（左）和LV（右）。以LPNC为基础的TransIT-VirusGEN转染试剂比以PEI为基础的转染试剂的病毒颗粒表达量高3-5倍。当TransIT-VirusGEN和增强剂同时使用时，比单独使用TransIT-VirusGEN大约提升了一倍。转染试剂 : DNA的比值为体积 : 质量。

图2. TransIT-VirusGEN转染试剂在不同细胞培养基中的表现。使用Thermo Fisher Scientific公司的病毒生产细胞进行转染，该细胞适应四种不同的培养基配方，分别来自Thermo Fisher公司的LV-MAX培养基、Expi293表达培养基、FreeStyle F17表达培养基和来自Irvine Scientific公司的BalanCD HEK293培养基。后一种培养基的AAV总效价较高，但在所有使用的培养基中，无论是否添加增强剂，TransIT-VirusGEN转染试剂均表现优异。DNA与转染试剂配比为2μg DNA ：3μl转染试剂，转染细胞密度为2.0×106个/ml。生产LV也获得了类似的结果(数据未显示)。

图3. 分别在四种不同的转染条件和两个不同的收获时间，测定TransIT-VirusGEN转染试剂和PEI为基础的转染试剂A3的物理滴度和功能滴度。利用Expi293F细胞生产AAV2-GFP。转染48小时和72小时后收获的病毒分别测定功能滴度TU/mL（左）和物理滴度GC/mL（右）。结果显示用TransIT-VirusGEN转染试剂和增强剂转染收获的病毒效价最高。此外，TransIT-VirusGEN转染试剂比PEI为基础的转染试剂的表达更快。这些结果表明，对于病毒滴度的评估，功能滴度可能是一个更可靠的指标。因此，建议测试几个不同的收获时间点来确定最佳方案。

图4. 每种培养体系都应优化转染时的细胞融合度和接种密度。用DMSO+10%胎牛血清培养贴壁的HEK293t/17细胞生产慢病毒（1μg DNA/mL）。试剂盒包括TransIT-VirusGEN转染试剂、VirusGEN LV复合物形成溶液和VirusGEN LV增强剂。

图5. 在Expi293表达培养基中培养Expi293F细胞，使用VirusGEN AAV转染试剂盒，内含TransIT-VirusGEN转染试剂、VirusGEN AAV复合物形成溶液和VirusGEN AAV增强剂，在悬浮细胞培养中生产AAV。分别用2:1（左）和3:1（右）两种比例来确定理想的转染试剂和DNA配比（体积：质量）。每种转染体系都应对转染试剂: DNA配比及每毫升细胞所需的总DNA量进行优化。

TransIT-VirusGEN转染系列产品信息

美国Mirus公司成立于1995年，是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的公司之一，同时也是目前该类试剂主要的供应商之一。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者，其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。

上海金畔生物科技有限公司是Mirus中国区代理，始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣，欢迎致电上海金畔客服热线021-50837765或登录网站www.jinpanbio.cn了解更多产品信息或申请试用。

引用文献：

Addressing Critical Issues in Cell & Gene Therapy, Snow, J.

（https://www.mirusbio.com/assets/technical-documents/addressing-critical-issues-in-cell-gene-therapy.pdf）

蛋白水解物因可以提高各种生物制药生产系统的整体性能而常被用于生产工艺中，比如改善细胞活力、提高细胞增殖和目的蛋白产量、提高病毒培养滴度等等。然而，在一个限定系统中，可能难以同时观察到这些作用，因为每种细胞培养平台都是独一无二的，作为培养基添加物的蛋白水解物也是如此。每种水解物对细胞的生长和生产力都具有不同的作用并会受到多种因素的影响，如细胞系、生产水解物的原材料、生产工艺、水解物用量以及基础培养基的成分等等。

为了满足市场需求，上海金畔生物科技有限公司代理的KERRY品牌从上世纪以来，充分利用在细胞培养基添加物领域中先进的技术与专业积累，开发出了一系列非动物源复合添加物系统，大大提升了各类细胞系的性能，能有效降低生产成本、简化筛选工艺，满足了生物制品领域客户的生产和监管要求。

KERRY非动物源复合添加物系统优势特点：

• 功能更加强大——集合了KERRY传统产品中植物蛋白水解物和成分明确添加物二者在培养效果上的优点；
• 产品线更加合理——根据客户对下游纯化要求的不同，分别开发出了含有生长因子的增强版和对下游纯化无影响的无蛋白版本；
• 针对性更强——对于CHO细胞、杂交瘤细胞、禽类细胞、昆虫细胞以及常用于疫苗生产的各类细胞系都有专门对应的复合添加物产品。

本文中小编将重点为大家介绍常用于疫苗研发和生产的Sheff-Vax系列复合添加物。

1.Sheff-Vax复合添加物介绍

Sheff-Vax复合添加物是一类成分复杂、不含动物源成分（ACF）的培养基添加物系统，根据是否不含蛋白（PF）、添加微量元素（Plus）等各类主要成分的差异，分为以下五个产品（见下表）。Sheff-Vax作为细胞培养基的添加成分，能部分或完全替代血清，为多种类型细胞（如BHK、Vero、SF-9、MDCK、MRC5等）提供生长和生产所需的各类营养，包括氨基酸、多肽、碳水化合物、维生素、微量元素等，不仅能显著提升细胞生长状态，还能提高病毒产量，因而常常被用于病毒疫苗的研发和生产。Sheff-Vax系列添加物已经在多个上市疫苗生产工艺中被添加和使用，如口蹄疫疫苗、戊肝疫苗、流感疫苗等，也是全球多家细胞培养基生产商的常用原料之一。

*注：ACF – Animal Component Free不含动物源成分；PF – Protein Free不含蛋白质；Plus – 含有微量元素。

2. 如何选择和使用Sheff-Vax添加物

在实际应用中发现，上述五种Sheff-Vax添加物对不同类型细胞系的适用性表现也有一定差异，我们可以根据下表来选择和测试合适的Sheff-Vax添加物。对于使用商品化无血清培养基和其他培养基的客户，Sheff-Vax添加物系统也可以用来优化培养基，提高细胞生产效率和促进细胞增长。这种情况下无需驯化细胞，Sheff-Vax可直接添加到无血清培养基中。Sheff-Vax添加物的高活性和稳定性，使其可以应用于大多数商业培养基。

*注：● 有效；★ 更加有效。

Sheff-Vax添加物的配置方法

使用Sheff-Vax添加物替代血清的培养过程中，需要先进行细胞驯化，逐代降低血清浓度，同时增加Sheff-Vax添加物浓度，进而实现降低或完全去除血清和其他动物源成分的培养方案，如下表所示。

*注：对照培养基：基础培养基+10% FBS； 驯化培养基：基础培养基+Sheff-Vax添加物。

3.Sheff-Vax添加物应用案例

1）使用Sheff-Vax Plus PF ACF对BHK细胞的降血清驯化案例

BHK细胞降血清培养生长曲线对比

该驯化培养过程添加了Sheff-Vax Plus PF ACF来降低BHK 培养基中FBS的使用量，把FBS浓度从10%降低到0.5%依然可以保持很好的细胞生长状态。（注：在整个驯化传代过程中，培养基需要添加0.5%的PluronicF-68来防止细胞凝聚成团。）

2）使用Sheff-Vax ACF对Vero细胞的无血清驯化案例

使用Sheff-Vax添加物可以实现Vero细胞的无血清培养，在逐步减少血清用量直至完全去除血清后，Vero细胞生长形态无显著变化（见下图）。

Vero细胞生长形态对比

（A）对照组：DMEM+10%胎牛血清；

（B）实验组：DMEM+0%胎牛血清+2g/L Sheff-Vax ACF+10mg/L rInsulin。

每次传代逐步减少FBS，同时添加Sheff-Vax ACF，在相同培养时间内，无血清组细胞生长密度可达到10% FBS组细胞密度峰值的一半，延长培养时间还可以获得更高的细胞密度（见下图）。

Vero细胞生长曲线对比

(i) 10% FBS, (ii) 7.5% FBS, (iii) 5% FBS,(iv) 2.5% FBS, (v) 1.5% FBS, (vi) 1% FBS, (vii) 0.5% FBS, (viii) 0.25% FBS, (ix) 0.1% FBS, (x) 0% FBS

3）添加Sheff-Vax可以获得更高的病毒滴度

分别在培养狂犬病毒和麻疹病毒的细胞培养基中添加不同的Sheff-Vax产品，与对照组相比均能有效提升病毒生产滴度。在病毒增殖阶段添加Sheff-Vax Plus PF ACF VP对病毒滴度也有显著的提升（见下图）。

添加Sheff-Vax培养的病毒滴度对比

综上所述，Sheff-Vax复合添加物在疫苗研发生产过程中具有非常多的优势，主要表现为：

• Sheff-Vax是一系列非常适用于细胞疫苗生产的非动物源添加物；
• Sheff-Vax具有可靠的批间一致性；
• Sheff-Vax能发挥出与血清相同的生物学功能；
• Sheff-Vax能有效提升病毒疫苗的生产效率；
• Sheff-Vax的高性价比能显著降低生产成本。

上海金畔生物科技有限公司是KERRY品牌的中国区一级代理，如果您对上述产品感兴趣，欢迎拨打上海金畔生物科技有限公司客服热线021-50837765或登录www.jinpanbio.cn获取更多产品资料和申请测试样品。