Lumiproe蛋白质、多肽、核酸等生物分子标记染料

Lumiproe蛋白质、多肽、核酸等生物分子标记染料

        Lumiprobe Corporation是美国一家高品质生物技术公司,专业提供分子生物学研究用的活性荧光染料。从2006年开始,公司生产并销售生命科学研究和诊断学应用的优质化学药品。产品主要有:活性染料(Reactive Dye)和SYBR Green I 染料,用于寡核苷酸合成的亚磷酰胺,点击化学和其它试剂。

       产品主要应用:点击化学(Click Chemistry)、蛋白质组学研究中的双向荧光差异凝胶电泳(2D DIGE)和实时荧光定量PCR(Realtime PCR)。

N-羟基琥珀酰亚胺酯类活性染料

       罗丹明类化合物是以氧杂蕙为母体的碱性咕吨染料,由于特殊的结构及相应的荧光特性,使罗丹明类荧光染料成为化学和生物分析领域中研究较为广泛的课题。与其他常用的荧光染料相比,罗丹明类荧光染料具有光稳定性好、对PH不敏感、较宽的波长范围和较高的荧光量子产率等优点,因此被广泛应用在医学、生物学、环境化学等方面,是分析化学和生物技术领域中最常用的荧光染料。

       菁染料是性能优良的荧光标记染料,摩尔吸光系数在荧光染料中是最高的。N-羟基琥珀酰亚胺酯是最常用的脂肪氨基标记试剂,广泛用于蛋白质、氨基酸多肽、抗体、核酸及其他生物分子的标记和检测。通过改变次甲基链的长度, 可改变其荧光发射波长,每增加一个双键,按照Huoffman 规则正好红移约100nm。

      菁染料Cy3 和Cy5 已成为基因芯片的首选荧光标记物;另外,Cy5, Cy5.5 和Cy7 ,Cy7.5的吸收在近红外区背景非常低,是荧光强度最高、最稳定的长波长染料,特别适合于活体小动物体内成像。但由于菁染料, 尤其是不对称菁染料的合成副反应多, 副产物极性相近, 产物的分离提纯相当困难。菁染料特别是水溶性菁染料分子极性大, 分离提纯越加困难。Lumiprobe供应脂溶性和水溶性菁染料。

多肽合成中的常见问题及解答

问:多肽的两端应如何处理?是保持自由状态还是屏蔽起来?

答:多肽是用来模拟蛋白的,为了模仿蛋白的表现,我们需要合成与蛋白有相似的结构和电荷的多肽。当一条肽段从一个蛋白中“切出”之后,两端的电荷数将与基因体蛋白有差异。我们需要改变合成策略来使他们一致。总体而言:如果是出自蛋白C端的序列,通过乙酰化将N端屏蔽;如果是出自蛋白N端的序列,通过酰胺化将C端屏蔽;如果是出自蛋白中间部分,用乙酰化和酰胺化将两端都屏蔽。

多肽合成中的常见问题及解答问:什么是多肽的净含量,它的意义是什么?

答:干品多肽的重量中不仅仅包含多肽,还包含有一些非肽的组份,如水,被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比,这个百分比的数值范围很大,可能从50%到90%,取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法,不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈,它们是完全不同的两个概念。纯度通常是由HPLC决定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比,而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比,肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中,对计算肽的浓度是很重要的。

问:对不同的实验,如何选择肽的纯度?

答:肽的纯度是很重要的指标,纯度的选择取决于实验的目的。对不太灵敏的筛选实验,建议使用粗品或>75%,对免疫级别,建议选用>85%。对于受体与配体相互作用的研究,生物分析研究,或细胞水平的研究,建议>95%,对于结构研究,建议>98%。上海金畔生物科技有限公司能为您提供从70%到超过98%纯度的合成多肽。

问:如果我的肽纯度是95%,那么,其余的5%都是些什么物质?

答:多肽的纯度通常是通过HPLC,用每分钟1%的标准乙晴梯度来检测决定的。合成过程中,氨基酸之间的交联效率不是总能达到100%,因而产生一系列的氨基酸缺失的杂质。大多数这样的氨基酸缺失的杂质在纯化过程中都被去掉了,但有少数的杂质其色谱表现与目标多肽很相近。这些氨基酸缺失的杂质肽留在了多肽样品中就构成了余下的几个百分点。

问:如何重新溶解多肽?

答:上海金畔生物科技有限公司为您提供的合成多肽以以冻干状态发送。一般多肽的溶解与多肽的序列相关,首先试蒸馏水和超声(1-10MG/ML),如果不溶,计算肽中的碱性残基(Lys,Arg,His和自由氨基端)和酸性残基(Gly,Asp和自由羧基端)的数目。如果碱性基团偏多,可以滴加1N的醋酸,直到溶解为止,如果酸性基团居多,滴加1N的氨水,直到溶解为止。如果在实验中需要用缓冲液,建议在多肽完全溶解之前不要加入盐,因为盐会使肽的溶解度降低。如果上述溶液中肽都不溶,可以试试用少量有机溶剂如DMSO,乙晴或 DMF。

问:如何保存多肽?

答:在可能的情况下,应该尽量将多肽以冻干粉的形式在-20℃下保存,这样会在几年内避免细菌的降解,二级结构的形成、氧化或其他修饰的发生。多肽在溶液中的稳定性要差一些,所以强烈建议使用灭菌水或灭菌过滤的方式进行溶解,如果序列中有Cys,Met或Trp等残基,用无氧的溶剂进行溶解以避免氧化。使用冷冻的溶液时,建议将溶液进行分装,以避免多次的溶解和冷冻对多肽造成的损害。pH的推荐范围是3-6之间。使用前应保证包装容器和所装物品回温到室温,以避免吸水。多肽溶液最好即配即用,使用过程中将肽溶液保持在低温但不结冻的状态下。长期保存(3个月到5年):冻干粉,在-20℃下冷冻干燥保存;中期保存(0-3个月):-20℃冷冻液体或冻干粉冷藏;短期保存(<1周):冷藏的液体或冻干粉。

问:目前常见的是用什么方法生产多肽?

答:线性多肽肽链的延伸采用Fmoc固相合成法,由C端到N端逐步依次将氨基酸连接上。开始,将第一个氨基酸通过一段对酸敏感的连接物连接在不溶性的支撑物树脂上。用六氢吡啶将Fmoc保护基去掉后,第二个Fmoc保护的氨基酸被连接了上去,连接方法有预活化或“一锅煮”等。目标序列连接完毕后,用TFA将肽链从树脂上洗脱得到粗品。上海金畔生物科技有限公司能为您提供固相/液相合成的线性化或环化多肽。

多肽合成中的常见问题及解答

美国Cali-Bio拥有多肽合成过程中最先进的技术和工艺,已经为美国众多的科研机构、大专院校及生物公司成功合成了数以万计的高纯度的多肽,应用于抗体制备、药物研发及多肽疫苗的研制等各个领域。上海金畔生物科技有限公司将Cali-Bio的多肽合成服务引进中国,结合中国国情,旨在为中国客户提供国外多肽合成的品质、享有国内合成价格的特殊服务。详情请点击:多肽合成-美国Cali-Bio多肽合成服务。如果您对多肽合成服务感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司(上海请致电021-63599871/63599872到上海金畔生物科技有限公司上海分公司)垂询相关的定制合成服务,我们会为您完成订单,上海金畔生物科技有限公司会为您做的更多!

多肽固相合成—Fmoc法与Boc法

多肽合成不仅具有很重要的理论意义,而且具有重要的应用价值。通过多肽合成可以验证新的多肽结构;设计新的多肽,用于研究结构与功能的关系;为多肽生物合成反应机制提供重要信息;建立模型酶以及合成新的多肽药物等。1963年,R.B.Merrifield创立了将多肽羧基端的氨基酸固定在不溶性树脂上,然后在此树脂上依次偶联氨基酸,延长肽链、合成多肽的固相合成法,在固相法中,每步反应后只需简单地洗涤树脂,便可达到纯化目的。克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难,为多肽的自动化合成奠定了基础。为此,Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖。

Merrifield所建立的Boc合成法是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的Boc(叔丁氧羰基)为α-氨基保护基,侧链保护采用苄醇类。合成时将一个 Boc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上,用TFA脱除Boc,用三乙胺中和游离的氨基末端,然后通过DCC活化、偶联下一个氨基酸,最终脱保护多采用HF 法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。用Boc法已成功地合成了许多生物大分子,如活性酶、生长因子、人工蛋白等。(点击下图查看大图:Merrifield所建立的Boc合成法示例)

多肽固相合成—Fmoc法与Boc法

 在Boc合成法中,反复地用酸来脱保护,这种处理带来了一些问题:如在肽与树脂的接头处,当每次用50%TFA脱Boc基时,有约1.4%的肽从树脂上脱落,合成的肽链越长,这样的损失越严重;此外,酸处理会引起侧链的一些副反应,Boc合成法尤其不适于合成含有色氨酸等对酸不稳定的肽类。1978 年,Chang、Meienlofer和Atherton等人采用Carpino报道的Fmoc(9-芴甲氧羰基)基团作为α-氨基保护基,成功地进行了多肽的Fmoc固相合成。Fmoc法与Boc法的根本区别在于采用了碱可脱除的Fmoc为α-氨基的保护基,侧链的保护采用TFA可脱除的叔丁氧基等,树脂采用90%TFA可切除的对烷氧苄醇型树脂,最终的脱保护避免了强酸处理。

自Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了液相合成法无法比拟的优点。近几十年来,固相法合成多肽更以其省时、省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广的突出优势而成为多肽合成的常规方法。以Boc和 Fmoc两种方法为基础的各种多肽自动合成仪也相继出现,并仍在不断得到发展和完善。多肽固相合成—Fmoc法与Boc法

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多肽合成技术进展及误区

生物活性多肽在内源性物质中占有非常重要的地位,除酶、受体、金属蛋白等生物大分子外,许多合成或分离的多肽对生理过程或病理过程,对疾病的发生、发展或治疗过程有重要意义。多肽中的氨基酸残基彼此以酰胺键(也称肽键)相连接。一般来说,含有的氨基酸少于10个的肽段就称作寡肽,超过的就称为多肽。多肽与蛋白质只有肽链长短之别,二者间并没有严格的区分。

多肽合成技术进展及误区伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展,多肽研究取得了惊人的的飞跃。人们发现存在于生物体的多肽有数万种,并且发现所有的细胞均能合成多肽。同时,几乎所有的细胞也都受多肽调节,它涉及激素、神经、细胞生长与生殖等各个领域。事实上,肽类药物开发与应用已走出科学家们的实验室,变成了现实,并发挥着其独特的功效。例如,神经紧张肽(NT)能降低血压,对肠和子宫具有收缩作用;促甲状腺素释放激素(TRH)是一种能促进产妇乳汁分泌的多肽;能治疗糖尿病、胃溃疡、胰腺炎的多肽是一种环状的14肽;临床上常用的催产素是一种多肽;近日来在中国及日本已开始使用的糖肽辅助治疗肿瘤,其作用机理是使淋巴系统活化等等。应用多肽技术开发的医用蛋白质芯片(肽芯片)只有指甲盖大小,放置了与肾炎、胃溃疡和胃癌等相关的抗原分子,只要通过芯片阅读仪便可检测到有关疾病的功能状态与变异情况。肽芯片的广泛应用,已在医学临床检测业引发一场技术革命。

自从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成(SPPS)方法以来,经过不断的改进和完善,到今天这个方法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,许多普通的单位都可以通过现成的多肽合成方案进行合成。对于新手来说,了解一定的多肽合成的原理,对于认识多肽合成的过程,排除合成中碰到的问题都是有好处的。简单来说,最基本的程序化的多肽合成工艺无非就是树脂溶胀、脱保护、偶联、再脱保护、再偶联……其他特殊的合成都是在这个基础上建立的。对于多肽合成的新手来说,有几个误区需要注意:

多肽合成误区一:合成时间越长越好。多肽合成的效率经过多年的摸索和优化,每一步的合成效率在短时间内都能达到99%以上,过长的反应时间对正面的反应产率提高非常有限,却大大增加了副反应发生的机率,所以过长的反应时间并不好。

多肽合成误区二:万能的切肽试剂。大部分的多肽都可以用一套切肽试剂的组合从树脂上切下来,而对于有特殊侧链保护的氨基酸,往往需要调整这种组合,而对于没有侧链保护的多肽序列,是需要加入98%TFA和2%水的溶液就可以完成,要灵活运用切肽试剂的组合。

多肽合成误区三:氨基酸的侧链保护都一样。带有活泼侧链的氨基酸在合成中需要保护,根据侧链的不同,保护基也有不同的选择。选择适当的保护基可以有效地减少合成的难度。多肽合成技术进展及误区

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