170-8891-Bio-Rad伯乐iScript cDNA合成试剂盒1708891

【简单介绍】

Bio-Rad伯乐iScript cDNA合成试剂盒1708891,iScript cDNA 合成试剂盒是一种灵敏、易于使用的*链 cDNA 合成试剂盒,它使用实时 qPCR 进行基因表达分析。这个由两支试管构成的试剂盒已经过优化,可以在进行Z少设置的条件下,在Z短的反应时间内在宽的动态范围内产生灵敏的、无偏差的表达。

【详细说明】

Bio-Rad伯乐iScript cDNA合成试剂盒1708891

iScript cDNA 合成试剂盒是一种灵敏、易于使用的*链 cDNA 合成试剂盒,它使用实时 qPCR 进行基因表达分析。这个由两支试管构成的试剂盒已经过优化,可以在进行zui少设置的条件下,在zui短的反应时间内在宽的动态范围内产生灵敏的、无偏差的表达。

Bio-Rad伯乐iScript cDNA合成试剂盒1708891主要功能和优点

  • 具有易用性和*性 — 2 管(iScript 反应混合物和 iScript 逆转录酶)格式以实现更快速的设置
  • 检测低水平靶基因并在基因表达分析过程中保存 RNA — 广泛的线性动态范围内的总输入 RNA (1 µg–1 pg),带有高效的 RNase H+ MMLV 逆转录酶
  • 使用稀释 RNA 样本 — 反应混合物和 iScript 酶混合格式允许在 20 µl cDNA 合成反应中zui多使用 15 µl 的 RNA 样本
  • 防止目标基因出现 5' 和 3' 偏差并在任何区域中设计引物 — 很好地混合了 5 倍超混合液中的低聚糖 (dT) 和随机引物
  • 避免从 RNA 降解获得有偏颇的数据 — RNaseA 抑制剂的强效混合物可在设置和逆转录过程中保护 RNA
  • 在同一天完成 cDNA 合成和 qPCR — 40 分钟 cDNA 快速合成实验方案

恒温冷冻室中在 –20°C 下可以保存 12 个月(不建议多次解冻)

订购信息:

1708890 KIT,iSCRIPT cDNA SYNTHESIS,25R
1708891 KIT,iSCRIPT cDNA SYNTHES,100R
1708892 KIT,iSCRP 1-ST RT-PCR, SYBR 50
1708893 KIT,iSCRP 1-ST RT-PCR SYBR 200
1708894 KIT,iSCRP 1-ST RT-PCR,PROBE 50
1708895 KIT,iSCRP 1-ST RT-PCR,PROBE200
1708896 KIT,ISCRP SLCT CDNA SYNTH 25R
1708897 KIT,ISCRP SLCT CDNA SYNTH 100R
1708898 KIT, ISCRP SAMPLE PREP BUF,100
1708899 ISCRIPT SMPL PREP BUFFER,5X100

多肽固相合成—Fmoc法与Boc法

多肽合成不仅具有很重要的理论意义,而且具有重要的应用价值。通过多肽合成可以验证新的多肽结构;设计新的多肽,用于研究结构与功能的关系;为多肽生物合成反应机制提供重要信息;建立模型酶以及合成新的多肽药物等。1963年,R.B.Merrifield创立了将多肽羧基端的氨基酸固定在不溶性树脂上,然后在此树脂上依次偶联氨基酸,延长肽链、合成多肽的固相合成法,在固相法中,每步反应后只需简单地洗涤树脂,便可达到纯化目的。克服了经典液相合成法中的每一步产物都需纯化的困难,为多肽的自动化合成奠定了基础。为此,Merrifield获得1984年诺贝尔化学奖。

Merrifield所建立的Boc合成法是采用TFA(三氟乙酸)可脱除的Boc(叔丁氧羰基)为α-氨基保护基,侧链保护采用苄醇类。合成时将一个 Boc-氨基酸衍生物共价交联到树脂上,用TFA脱除Boc,用三乙胺中和游离的氨基末端,然后通过DCC活化、偶联下一个氨基酸,最终脱保护多采用HF 法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。用Boc法已成功地合成了许多生物大分子,如活性酶、生长因子、人工蛋白等。(点击下图查看大图:Merrifield所建立的Boc合成法示例)

多肽固相合成—Fmoc法与Boc法

 在Boc合成法中,反复地用酸来脱保护,这种处理带来了一些问题:如在肽与树脂的接头处,当每次用50%TFA脱Boc基时,有约1.4%的肽从树脂上脱落,合成的肽链越长,这样的损失越严重;此外,酸处理会引起侧链的一些副反应,Boc合成法尤其不适于合成含有色氨酸等对酸不稳定的肽类。1978 年,Chang、Meienlofer和Atherton等人采用Carpino报道的Fmoc(9-芴甲氧羰基)基团作为α-氨基保护基,成功地进行了多肽的Fmoc固相合成。Fmoc法与Boc法的根本区别在于采用了碱可脱除的Fmoc为α-氨基的保护基,侧链的保护采用TFA可脱除的叔丁氧基等,树脂采用90%TFA可切除的对烷氧苄醇型树脂,最终的脱保护避免了强酸处理。

自Merrifield发展成功了固相多肽合成方法以来,经过不断的改进和完善,到今天固相法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,表现出了液相合成法无法比拟的优点。近几十年来,固相法合成多肽更以其省时、省力、省料、便于计算机控制、便于普及推广的突出优势而成为多肽合成的常规方法。以Boc和 Fmoc两种方法为基础的各种多肽自动合成仪也相继出现,并仍在不断得到发展和完善。多肽固相合成—Fmoc法与Boc法

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多肽合成技术进展及误区

生物活性多肽在内源性物质中占有非常重要的地位,除酶、受体、金属蛋白等生物大分子外,许多合成或分离的多肽对生理过程或病理过程,对疾病的发生、发展或治疗过程有重要意义。多肽中的氨基酸残基彼此以酰胺键(也称肽键)相连接。一般来说,含有的氨基酸少于10个的肽段就称作寡肽,超过的就称为多肽。多肽与蛋白质只有肽链长短之别,二者间并没有严格的区分。

多肽合成技术进展及误区伴随着分子生物学、生物化学技术的飞速发展,多肽研究取得了惊人的的飞跃。人们发现存在于生物体的多肽有数万种,并且发现所有的细胞均能合成多肽。同时,几乎所有的细胞也都受多肽调节,它涉及激素、神经、细胞生长与生殖等各个领域。事实上,肽类药物开发与应用已走出科学家们的实验室,变成了现实,并发挥着其独特的功效。例如,神经紧张肽(NT)能降低血压,对肠和子宫具有收缩作用;促甲状腺素释放激素(TRH)是一种能促进产妇乳汁分泌的多肽;能治疗糖尿病、胃溃疡、胰腺炎的多肽是一种环状的14肽;临床上常用的催产素是一种多肽;近日来在中国及日本已开始使用的糖肽辅助治疗肿瘤,其作用机理是使淋巴系统活化等等。应用多肽技术开发的医用蛋白质芯片(肽芯片)只有指甲盖大小,放置了与肾炎、胃溃疡和胃癌等相关的抗原分子,只要通过芯片阅读仪便可检测到有关疾病的功能状态与变异情况。肽芯片的广泛应用,已在医学临床检测业引发一场技术革命。

自从1963年Merrifield发展成功了固相多肽合成(SPPS)方法以来,经过不断的改进和完善,到今天这个方法已成为多肽和蛋白质合成中的一个常用技术,许多普通的单位都可以通过现成的多肽合成方案进行合成。对于新手来说,了解一定的多肽合成的原理,对于认识多肽合成的过程,排除合成中碰到的问题都是有好处的。简单来说,最基本的程序化的多肽合成工艺无非就是树脂溶胀、脱保护、偶联、再脱保护、再偶联……其他特殊的合成都是在这个基础上建立的。对于多肽合成的新手来说,有几个误区需要注意:

多肽合成误区一:合成时间越长越好。多肽合成的效率经过多年的摸索和优化,每一步的合成效率在短时间内都能达到99%以上,过长的反应时间对正面的反应产率提高非常有限,却大大增加了副反应发生的机率,所以过长的反应时间并不好。

多肽合成误区二:万能的切肽试剂。大部分的多肽都可以用一套切肽试剂的组合从树脂上切下来,而对于有特殊侧链保护的氨基酸,往往需要调整这种组合,而对于没有侧链保护的多肽序列,是需要加入98%TFA和2%水的溶液就可以完成,要灵活运用切肽试剂的组合。

多肽合成误区三:氨基酸的侧链保护都一样。带有活泼侧链的氨基酸在合成中需要保护,根据侧链的不同,保护基也有不同的选择。选择适当的保护基可以有效地减少合成的难度。多肽合成技术进展及误区

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