人肌钙蛋白 T 重组- 冻干

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人肌钙蛋白 T 重组- 冻干

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该重组肌钙蛋白 T  制剂在大肠杆菌中生产，以粉末形式提供，用 10 mM HCl 冻干。重悬于 25 mM Tris、7 M 尿素、15 mM b-巯基乙醇、5 mM EDTA、pH 7.5 中。 SDS-PAGE 纯度≥95%。冻干前通过 A280 测定蛋白质含量。 （肌电图/毫升=0.48）

scrippslabs是全球诊断行业和生物医学研究界优质和值得信赖的生物材料供应商之一。斯克里普斯在产品质量、准时交货、客户服务和技术支持方面享有声誉。Scripps是全球诊断和生物技术公司的关键原材料的顶级供应商。凭借在产品批准、准时交货和批次间一致性方面的记录，Scripps 赢得了其诊断和生物技术客户的最高荣誉和评级。

上海金畔生物科技有限公司

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抗体和重组蛋白使用、保存方法

无论是保存还是运输，请避免反复冻融。反复冻融，冰晶会破坏抗体和重组蛋白的空间结构，导致蛋白变性形成多聚体和重组蛋白构象改变，从而降低抗体的结合能力，也加快了抗体球蛋白和重组蛋白的降解速度。抗体和重组蛋白保存得当与否，直接决定了抗体和重组蛋白的活性使用效果，如果保存得当，抗体和重组蛋白活性大部分都可以维持数年。

1. 收到抗体和重组蛋白后的操作

收到抗体和重组蛋白后（大部分抗体和重组蛋白是溶液态），请务必在 4℃，12000rpm，离心 3 分钟，再打开管盖进行分装、溶解和保存（如果抗体和重组蛋白体积小于 50µl，请延长离心时间至 5 分钟，以保证全部抗体和重组蛋白均离心下来，干粉状态的同样适用）。抗体和重组蛋白使用特制的储存管，只有在 12000rpm 离心 3 分钟，才能将附着在管壁或盖内的抗体和重组蛋白全部离心下来（即使是在 10000rpm 离心也会离心不全，导致出现抗体和重组蛋白的量不足的现象）。请详细阅读说明书，并按照推荐的保存条件正确保存和使用抗体和重组蛋白。

2. 抗体和重组蛋白的长期保存

对于大部分抗体和重组蛋白，比较合适的保存方式是：抗体分装后保存在 -20℃，重组蛋白分装后保存在 -80℃。

（1）分装可以大程度的降低反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害，同时也降低了由于多次从同一管中吸取抗体和重组蛋白造成的污染可能性。

（2）分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于 10 µl 每份。因为分装体积越小，抗体和重组蛋白的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。

（3）复融后的分装抗体和重组蛋白如果一次用不完，将剩余母液保存在 4℃，避免再冻起来。

（4）抗体和重组蛋白工作液应该当天配制当天用完，4℃ 保存尽量不要超过 1 天。

（5）绝对避免将抗体和重组蛋白保存在自动除霜冰箱中，将抗体和重组蛋白保存在冰箱里层，避免温度变化造成反复冻融。

3. 抗体和重组蛋白的短期保存

大部分的抗体和重组蛋白收到后 4℃ 短暂保存 1~2 周，对抗体和重组蛋白活性没有影响。如果抗体和重组蛋白很快会使用（1~2 周内），推荐在 4℃ 保存，这是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害。最关键的一点是要根据说明书推荐的方式来正确的保存抗体和重组蛋白。

4. 抗体和重组蛋白的运输条件

一般的运输过程需要 1~2 周的时间，所以是在低温 4℃ 的条件下来完成的。4℃ 运输最主要的目的是为了避免反复冻融对抗体和重组蛋白活性的损害（如果使用干冰运输，那么收到时抗体和重组蛋白是冻起来的，为了分装就需要解冻，这就多了一次冻融的过程），所以运输过程中一般避免干冰运输。

5. 抗体和重组蛋白的稳定性

（1）抗体的稳定性是自然界长期进化的结果，抗体是免疫系统中最重要的分子之一，其稳定性是自然进化筛选的结果，在众多物种中，抗体分子形成了保守而稳定的结构。

（2）抗体的高Tm值，在室温下，甚至短时间温度达到 50~60℃，抗体分子都能维持正确折叠，保持其应有的活性。

（3）抗体和重组蛋白的纯度。 采用先进的抗体和重组蛋白纯化技术，确保抗体和重组蛋白产品的高纯度，保障其抗体和重组蛋白产品的稳定性。

（4）抗体和重组蛋白的浓度。高浓度的抗体和重组蛋白产品可减少容器表面吸附造成的物质损失，高浓度的抗体和重组蛋白稳定性更好。大部分抗体和重组蛋白浓度为 1mg/ml，抗体和重组蛋白纯度高，特异性好，效价更高。

6. 重组蛋白的特性

重组蛋白分为冻干粉和溶液态两种保存形式，原核细胞表达的重组蛋白为冻干粉状态，真核细胞表达的重组蛋白为溶液态保存，这样使得重组蛋白非常稳定，在 -80℃ 条件下可保存数年。冻干粉在使用前需进行溶解，其中溶解的方法非常关键，因为溶解不好会降低蛋白的效用。溶液态保存的重组蛋白在冻融稀释使用过程中也需要仔细注意，这些都是用户在实际应用中经常遇到的问题。

（1）原核细胞表达的重组蛋白。 大肠杆菌表达的冻干重组蛋白，已经从包涵体中提纯，添加了蛋白保护剂，使用过滤后的无菌水作为复溶剂即可，复溶冻干蛋白 100µg，用 86µl 的超纯水，轻轻摇晃使蛋白溶解，再用移液枪的枪头轻吹几下即可全溶解，一定不能使用涡旋仪进行快速振荡或剧烈摇晃。

（2）真核细胞表达的重组蛋白。有活性的蛋白质不仅要转录和翻译，还要进行翻译后的加工，使得蛋白质的空间折叠方式维持正常，所以重组蛋白必须在真核细胞中进行，如哺乳动物细胞能够识别和去除基因中的内含子，对翻译后的蛋白质进行加工，这样表达的蛋白质具有生物活性。我们用溶液态来保存，保持了其良好的活性和稳定性。

（3）重组蛋白的保护剂。在冻干和储存过程中常用的保护剂或稳定剂有糖类，多元醇，聚合物，表面活性剂，某些蛋白和氨基酸等。我们通常加 8%（质量比体积）的海藻糖和甘露醇作为冻干保护剂。海藻糖可明显阻止蛋白质二级结构改变以及冻干过程中蛋白质的伸展和聚集，甘露醇也是一种普遍应用的冻干保护剂和填充剂。

重组链霉亲和素| 高纯度介绍

链霉亲和素是由亲和素链霉菌 分泌的同源四聚体蛋白。链霉亲和素因其对生物素高的亲和力而广泛应用于分子生物学。生物素与链霉亲和素的结合是自然界中已知的强的非共价相互作用之一，生物素-链霉亲和素复合物的解离常数(K d )约为10 -14 mol/L。链霉亲和素/生物素复合物在很宽的温度和 pH 范围内都极其稳定。由于链霉亲和素缺乏任何碳水化合物 修饰并且具有接近中性的 pI，因此它具有比亲和素低得多的非特异性结合的优点 。
重组链霉亲和素在大肠杆菌中作为 N 端和 C 端缩短变体（核心链霉亲和素，氨基酸 13-139）产生，并通过专有的色谱技术进行纯化。一条非糖基化的多肽链总共含有 128 个氨基酸，分子量为 13.4 kDa。每个四聚体的分子量约为 53.6 kDa。

链霉亲和素序列：   M AEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAAS

链霉亲和素溶液 (5 mg/ml) 含有 0.5XPBS 缓冲液、pH 7.4 和 50% 甘油。

SKU：ST-302-5（5 毫克）、ST-302-25（25 毫克）

活性：大于 16 U/mg，1 单位结合 1 µg d-生物素。
建议在-20°C 下保存较长时间。

国际运输： 产品需要用冰袋运输。

本产品仅供实验室研究使用。

用于研究和诊断应用的重组体有哪些？

用于现在和未来研究和检测开发的可持续重组

重组激素|重组心脏标记物|重组代谢标记物|重组的好处

斯克里普斯实验室正在改变临床诊断行业看待重组蛋白的方式。几十年来，重组体已可用于制药、诊断和研究。尽管如此，它们在临床诊断应用中的使用受到限制，因为许多重组蛋白未能满足其天然对应物设定的性能标准。

我们于 2021 年推出了重组垂体激素系列，当时的反馈表明我们的客户对其他制造商的重组蛋白的体验不太好。 “重组蛋白不像天然蛋白质那样反应”和“我们已经尝试过它们，但它们对我们不起作用”是对我们新重组系列引入的常见反应。然而，我们当时就知道这些观点会改变。虽然他们以前尝试过重组体，但没有尝试过我们的。

经过短短一年的时间和多次试验评估后，来自斯克里普斯的重组蛋白正在取代整个行业的天然蛋白。我们的重组体正在接受验证，可用于临床诊断公司的检测组。

这一成功的关键原因是斯克里普斯实验室的科学人员在开发重组蛋白时所采用的方法。诊断分析是复杂、精密的系统，需要许多组件之间的精确相互作用。开发和生产在这些系统中工作的重组蛋白是复杂的、具有挑战性的和要求很高的。斯克里普斯的每个项目都经过研究和规划，其主要目标是创造一种在临床诊断分析系统中表现出可靠和可重复性能的产品，而不是以装配线的方式大量生产蛋白质。

重组蛋白应用于诊断应用时的持久优势之一是其起始材料的可持续性。重组体源自按需生长和收获的细胞系，这使得您可以在需要时获得纯化的蛋白质。对于天然蛋白质来说，这并不总是可能的。天然组织的获取是不可预测的，近年来腺体和器官的可用性急剧下降。这

生产性能最佳的重组体需要的努力超出了项目规划和生产的范围。一旦斯克里普斯重组体被纯化，它就会经过测试，并经过测试，然后才被批准发布。每种蛋白质都在各种基于抗体的检测系统（包括临床分析仪）中进行评估。此外，在达到我们的纯度、稳定性和性能高标准之前，不会发布任何重组体。

Scripps 的重组蛋白超出了预期，挑战了临床诊断制造商对重组蛋白的期望。我们的重组体经过开发、生产和诊断应用功效测试，正在取代生殖内分泌学、贫血和代谢、心脏病学以及疾病诊断的其他几个领域中的天然生物标志物。

重组人层粘连蛋白及其在细胞培养中的应该

层粘连蛋白是所有动物中发现的一系列细胞外基质 (ECM) 蛋白。这些糖蛋白是基底膜基底层的主要成分，基底膜是一种蛋白质网络，构成了体内大多数细胞和器官生长的基础。在体内，层粘连蛋白对于调节许多生物过程很重要，包括粘附、迁移和分化。1,2

层粘连蛋白是异三聚体蛋白质，由 α 链、β 链和 γ 链以 1:1:1 的比例组成。3总共有 5 种 α 链异构体、3 种 β 链异构体和 3 种 γ 链异构体是已知的，并且特定的组合调节特定层粘连蛋白分子的功能。不同的层粘连蛋白由存在的异构体的组合来确认（图1）。例如，层粘连蛋白-511表示由α5、β1和γ1亚基组成的层粘连蛋白。

层粘连蛋白直接与动物细胞细胞膜中的整合素蛋白相互作用。这种相互作用是细胞与基底膜结合的主要组成部分之一。层粘连蛋白的蛋白水解研究已经鉴定出层粘连蛋白三聚体的蛋白酶抗性核心，称为 E8 片段，其中包含核心整合素结合结构域（图 1）。4 E8片段非常适合体外实验，因为它们适合高产重组蛋白生产，不像全长层粘连蛋白，全长层粘连蛋白在体外表达具有挑战性，并且由于其尺寸大且结构复杂，难以形成活性异三聚体-翻译修饰。

重组人 E8 片段已被多家公司商业化，其中包括 Matrixome（日本大阪），因为它们是培养多种细胞类型的理想底物。 Matrixome 的成立基于以下研究：重组人层粘连蛋白 511 E8 片段（以 iMatrix-511 名称销售并可从 REPROCELL 获得）可形成人类干细胞培养的理想基质。5自 Matrixome 成立以来，Matrixome 已引入了许多其他具有多种细胞特异性的层粘连蛋白 E8 片段亚型（表 1）。

iMatrix-511重组人 Laminin-511 E8 片段已被证明与整合素 α6β1 紧密结合，使其成为培养人类干细胞的理想底物（图 2a 和 b）。5原始 iMatrix-511在 CHO-S 细胞中表达，而新版本（称为iMatrix-511 SILK）在蚕茧中表达。 iMatrix-511 SILK 以更低的价格提供与原始 iMatrix-511 相同的性能，并且没有动物蛋白的风险。

其他 iMatrix 层粘连蛋白产品

• iMatrix 411：层粘连蛋白-411在血管基底膜中丰富，iMatrix-411已用于将诱导多能干细胞（iPSC）分化为血管内皮细胞和胆管细胞。 6

• iMatrix-221：Laminin-211 存在于肌肉组织的基底膜中。 iMatrix-211 已被证明是心肌细胞和骨骼肌细胞的底物。

• Matrix-332：Laminin-332 存在于角质形成细胞和角膜细胞中。 iMatrix-332最近被用作角膜细胞分化和纯化的关键成分。7

• iMatrix-111：Laminin-111 存在于肝脏中。iPSC体外分化为肝细胞的重要成分。 8