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钙离子荧光探针Rhod2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000*-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000*价格 5670
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod2 dextran conjugate *Low affinity with MW 10,000*

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 ~11000 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：~11000

溶剂：水

激发波长(nm)：557

发射波长(nm)：579

 

产品介绍

葡聚糖偶联的钙指示剂稳定地保留在神经元内。结果，它们非常适合在生理温度下测量突触前钙。另外，右旋糖酐指示剂可用于在体内标记神经元及其突触前的按钮。这样就可以测量无法稳定加载其他类型指示剂的投射纤维突触前囊中的钙。Stephan D. Brenowitz和Wade G. Regehr报道了一种利用Rhod 2-dextran指示剂在活体内将攀登纤维投射物装载到小脑的技术，用于在脑切片中进行突触前钙成像。该技术适用于研究许多可以制备脑切片的物种的投射纤维。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Tuning the Color Palette of Fluorescent Copper Sensors through Systematic Heteroatom Substitution at Rhodol Cores
Authors: Shang Jia, Karla M Ramos-Torres, Safacan Kolemen, Cheri M Ackerman, Christopher J Chang
Journal: (2017)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-2 dextran conjugate Cat#20450

钙离子荧光探针Rhod2三钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod2三钾盐价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod2三钾盐

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 869.05 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。长波长Rhod-2 Ca2 +指示剂是Fluo-3的有价值的替代品，可用于在具有高水平自发荧光的细胞和组织中进行实验。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Biomaterial Surface Can Modify HUVEC Morphology and Inflammatory Response by Regulating MicroRNA Expression
Authors: Shuangying Gu, Baoxiang Tian, Weicong Chen, Yue Zhou
Journal: Journal of Biosciences and Medicines (2017): 8

Csseverin inhibits apoptosis through mitochondria-mediated pathways triggered by Ca2+ dyshomeostasis in hepatocarcinoma PLC cells
Authors: M Shi, L Zhou, L Zhao, M Shang, T He, Z Tang
Journal: PLoS Negl Trop Dis (2017): e0006074

GluR3B Ab’s induced oligodendrocyte precursor cells excitotoxicity via mitochondrial dysfunction
Authors: Yi Liu, Yan Chen, Wan Tong Du, Xiu Xiang Wu, Fu Xing Dong, Xue Bin Qu, Hong Bin Fan, Rui Qin Yao
Journal: Brain Research Bulletin (2017)

Spatially Organized β-Cell Subpopulations Control Electrical Dynamics across Islets of Langerhans
Authors: Matthew J Westacott, Nurin WF Ludin, Richard KP Benninger
Journal: Biophysical Journal (2017): 1093–1108

ABT737 reverses cisplatin resistance by regulating ER-mitochondria Ca2+ signal transduction in human ovarian cancer cells
Authors: CHUNYAN YU, XIANRUI JIANG, YE XU, LIANKUN SUN
Journal: International Journal of Oncology (2016): 2507–2519

BAX inhibitor-1 is a Ca2+ channel critically important for immune cell function and survival
Authors: D Lisak, T Schacht, A Gawlitza, P Albrecht, O Aktas, B Koop, M Gliem, HH Hofstetter, K Zanger, Geert Bultynck
Journal: Cell Death & Differentiation (2016): 358–368

Calcium efflux from the endoplasmic reticulum regulates cisplatin-induced apoptosis in human cervical cancer HeLa cells
Authors: Luyan Shen, Naiyan Wen, Meihui Xia, Yu Zhang, Weimin Liu, Ye Xu, Liankun Sun
Journal: Oncology letters (2016): 2411–2419

Failure of Elevating Calcium Induces Oxidative Stress Tolerance and Imparts Cisplatin Resistance in Ovarian Cancer Cells
Authors: Liwei Ma, Hongjun Wang, Chunyan Wang, Jing Su, Qi Xie, Lu Xu, Yang Yu, Shibing Liu, Songyan Li, Ye Xu
Journal: Aging and Disease (2016): 254

Cardiac tissue slices: preparation, handling, and successful optical mapping
Authors: Ken Wang, Peter Lee, Gary R Mirams, Padmini Sarathchandra, Thomas K Borg, David J Gavaghan, Peter Kohl, Christian Bollensdorff
Journal: American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology (2015): H1112–H1125

Tolerance to endoplasmic reticulum stress mediates cisplatin resistance in human ovarian cancer cells by maintaining endoplasmic reticulum and mitochondrial homeostasis
Authors: Ye Xu, Chunyan Wang, Jing Su, Qi Xie, Liwei Ma, Linchuan Zeng, Yang Yu, Shibing Liu, Songyan Li, Zhixin Li
Journal: Oncology reports (2015): 3051–3060

 

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钙离子荧光探针Rhod-2,三钠盐 Cat#21068
钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 Cat#21072
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钙离子荧光探针Rhod2三钠盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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钙离子荧光探针Rhod2三钠盐价格 2823
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 820.73 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-2, 三钾盐是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4™系列钙检测试剂是亮的绿色和红色钙指示剂，而我们的Cal-520®和Cal-590™具有高的细胞内钙检测信号/背景比，因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以高质量提供其他钙指标，如Fluo-4，Fluo-3，Fura-2，Indo-1，Rhod-5N和Rhod-2 AM，金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

实验方案

使用钙指示剂AM酯类

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应该用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。

 

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.04％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备2至20μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM 酯的水溶性。 

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可以将丙磺舒（2-5 mM）或磺吡酮（0.2-0.5 mM）添加到染料工作溶液中（终浓度为1）对于丙磺舒而言为-2.5mM，对于磺胺吡喃酮为0.1-0.25mM，以减少脱酯化指示剂的泄漏。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板室在温度或37℃下孵育20分钟（特别是Fluo-8AM）至2小时，然后将板在室温下再孵育30分钟。

注1：降低加载温度可能会减少指示符的划分。

注2：孵育Cal-520 AM超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

图1. 没有丙磺舒的CHO-M1细胞中内源性P2Y受体对ATP的反应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-M1细胞以每100μL/孔40,000个细胞接种过夜。将100μl的4μMFluo -3AM，Fluo- 4AM 或Cal202®AM在HHBS中加入孔中，并将细胞在37℃下孵育2小时。用100μlHHBS替换染料加载培养基，加入50μl300μMATP，然后使用FITC通道用荧光显微镜（Olympus IX71）成像。

 

钙离子荧光探针Rhod2三钠盐

图2. 用Cal-520 或Fluo-4 AM 测量的CHO-K1细胞中ATP刺激的内源性P2Y受体的钙响应。在96孔黑壁/透明底板中，将CHO-K1细胞以每100μL /孔50,000个细胞接种过夜。100μL的5 μ 中号的Fluo-4 AM或校准- 520® AM与（A）或不具有（B）2.5mM丙磺舒加入到细胞中，并将细胞在37下温育ø下进行2小时。 通过FlexStation（Molecular Devices）添加ATP（50μL/孔）以达到终指示的浓度。

 

使用钙指示剂盐

为了确定溶液的游离钙浓度或 单波长钙指示剂的K d，使用以下等式：

[Ca] 自由 = K d [F – F min ] / F max – F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，F min 是不存在钙时的荧光，F max是钙饱和探针的荧光。解离常数（K d）是探针对钙的亲和力的量度。与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca 2+结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的K d值。 通过将加载的细胞暴露于受控的Ca来进行原位校准 在离子载体存在下的2+缓冲液，例如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素。或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露 于细胞外培养基的受控Ca 2+水平。表1列出了一些钙试剂的K d值供您参考。

 

使用钙指示剂结合物

 

        与游离离子指示剂相比，这些相同指示剂的葡聚糖缀合物表现出减少的区室化和低得多的染料渗漏率。由于葡聚糖的分子量，净电荷，标记程度和染料的性质可能影响实验，因此建议研究人员查阅主要文献以获得更多实验信息。

 

参考文献

W-5 and quin 2-AM reverse the inhibitory effect of insulin on lipolysis due to dibutyryl cAMP
Authors: Goko H, Matsuoka A.
Journal: Diabetes Res Clin Pract (1999): 101

Calcium chelator Quin-2 prevents crocidolite-induced DNA strand breakage in human white blood cells
Authors: Faux SP, Michelangeli F, Levy LS.
Journal: Mutat Res (1994): 209

Fluorescence lifetime imaging of intracellular calcium in COS cells using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Lederer WJ, Kirby MS, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1994): 7

Possible mechanisms of epinephrine actions in quin-2-loaded platelets refractory to arachidonic acid
Authors: Rao GH, Gerrard JM, Murthy M, White JG.
Journal: Biochem Med Metab Biol (1993): 322

Fluorescence lifetime imaging of calcium using Quin-2
Authors: Lakowicz JR, Szmacinski H, Nowaczyk K, Johnson ML.
Journal: Cell Calcium (1992): 131

Involvement of calcium and iron in Quin 2 toxicity to isolated hepatocytes
Authors: Carpenter-Deyo L, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 747

Toxicity to isolated hepatocytes caused by the intracellular calcium indicator, Quin 2
Authors: Carpenter-Deyo L, Duimstra JR, Hedstrom O, Reed DJ.
Journal: J Pharmacol Exp Ther (1991): 739

Aspirin, prostaglandin E1 and Quin-2 AM-induced platelet dysfunction: restoration of function by noradrenalin
Authors: Rao GH, White JG.
Journal: Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids (1990): 141

Characterization of indo-1 and quin-2 as spectroscopic probes for Zn2(+)-protein interactions
Authors: Jefferson JR, Hunt JB, Ginsburg A.
Journal: Anal Biochem (1990): 328

Effect of Quin-2 on Ca2+ uptake mediated by Na+i/Ca2+o exchange and 45Ca2+ efflux in rat brain synaptosomes: a requirement for [Ca2+]i
Authors: Blanco P, Martinez-Serrano A, Bogonez E, Satrustegui J.
Journal: Cell Calcium (1990): 25

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

钙离子荧光探针Rhod-FF三钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod-FF三钾盐价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod-FF三钾盐

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 891.00 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐是美国AAT Bioquest生产的钙离子荧光探针，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2 +后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2 +浓度的变化。Rhod-FF对Ca2 +具有较低的结合亲和力，适用于10至200 uM的Ca2 +测量。像母体Rhod-2指示剂一样，Rhod-FF在不存在二价阳离子的情况下基本上是无荧光的，并且在结合Ca2+时显示出强的荧光增强，并且没有光谱偏移。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-FF, 三钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

钙指示剂AM Esters的使用

1.带有钙指示剂AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Takahito Miyake, Hisashi Shirakawa, Takayuki Nakagawa, Shuji Kaneko
Journal: Glia (2015): 1870–1882

ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Nadezda Apostolova, Leysa J Gomez-Sucerquia, Fernando Alegre, Haryes A Funes, Victor M Victor, Maria D Barrachina, Ana Blas-Garcia, Juan V Esplugues
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-5N,三钾盐 Cat#21072
钙离子荧光探针Rhod-2,三钾盐 Cat#21067

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod-FF, AM价格 4245
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod-FF, AM

产品参数
Ex (nm) 553 Em (nm) 577
分子量 1145.90 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙测量对于许多生物学研究至关重要。结合 Ca2+ 后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够通过使用荧光显微镜、流式细胞术、荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离 Ca2+ 浓度的变化。 Rhod-FF AM 具有细胞渗透性，在细胞内经酯酶水解后生成 Rhod-FF。 Rhod-FF 对 Ca2+ 的结合亲和力较低，适用于 10 至 200 uM 的 Ca2+ 测量。与Rhod-2 指示剂一样，Rhod-FF 在没有二价阳离子的情况下基本上不发出荧光，并且在结合 Ca2+ 时表现出荧光，且没有光谱偏移。

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适用仪器

荧光显微镜  
Ex: TRITC 滤波片组
Em： TRITC 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理

 

溶解方案(溶剂以说明书为准)

  0.1 mg 0.5 mg 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 87.268 µL 436.338 µL 872.676 µL 4.363 mL 8.727 mL
5 mM 17.454 µL 87.268 µL 174.535 µL 872.676 µL 1.745 mL
10 mM 8.727 µL 43.634 µL 87.268 µL 436.338 µL 872.676 µL
实验方案

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Rhod-FF AM 储备溶液。

 

工作溶液配制

Rhod-FF AM工作溶液
1.实验当天，将 Rhod-FF AM 溶解在 DMSO 中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Rhod-FF AM 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Rhod-FF AM。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Rhod-FF AM 的水溶性。可以从金畔购买各种 Pluronic® F-127 解决方案。
注：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后探针的泄漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从金畔购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天，将 1X Rhod-FF AM 工作溶液添加到细胞板中。
注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂，并使用配备 Indo-1 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如 FlexStation）的荧光酶标仪同时测量荧光

 

试剂应用文献

Activation of mitochondrial transient receptor potential vanilloid 1 channel contributes to microglial migration
Authors: Miyake, Takahito and Shirakawa, Hisashi and Nakagawa, Takayuki and Kaneko, Shuji
Journal: Glia (2015): 1870–1882
ER stress in human hepatic cells treated with Efavirenz: mitochondria again
Authors: Apostolova, Nadezda and Gomez-Sucerquia, Leysa J and Alegre, Fern and o , undefined and Funes, Haryes A and Victor, Victor M and Barrachina, Maria D and Blas-Garcia, Ana and Esplugues, Juan V
Journal: Journal of hepatology (2013): 780–789

 

参考文献

Ionic calcium determination in skim milk with molecular probes and front-face fluorescence spectroscopy: simple linear regression
Authors: Gangidi RR, Metzger LE.
Journal: J Dairy Sci (2006): 4105
 
Measurement of limestone biodeterioration using the Ca2+ binding fluorochrome Rhod-5N
Authors: McNamara CJ, Perry TDt, Bearce K, Hern and ez-Duque G, Mitchell R.
Journal: J Microbiol Methods (2005): 245

钙离子荧光探针Rhod4钠盐-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Rhod4钠盐价格 7092
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod4钠盐

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 815.64 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐。

点击查看光谱

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

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产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐 Cat#21119

钙离子荧光探针Rhod4钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Rhod4钾盐价格 7092
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1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Rhod4钾盐

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 880.07 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐是美国AAT Bioquest生产的用于钙通量测定的试剂，钙测量对于许多生物学研究至关重要。在结合Ca2+后显示光谱响应的荧光探针使研究人员能够使用荧光显微镜，流式细胞仪，荧光光谱和荧光酶标仪来研究细胞内游离Ca2+浓度的变化。在可见光激发钙指示剂中，Fluo-3和Fluo-4常用。但是，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后在活细胞中仅适度发荧光，并且需要苛刻的细胞加载条件才能大化其细胞钙反应。开发Fluo-8®染料可细胞负载和钙响应，同时保持便捷的Fluo-3和Fluo-4光谱波长（在〜490 nm处具有大激发和在〜520 nm处具有大发射）。Fluo-8®AM仅需要室温，而Fluo-3 AM和Fluo-4 AM需要37℃的细胞负载。此外，Fluo-8®的亮度是Fluo-4 AM的2倍，是Fluo-3 AM的4倍。AAT Bioquest提供了一套出色的Fluo-8®试剂，具有不同的钙结合亲和力（Fluo-8®：Kd = 389 nM； Fluo-8H：Kd = 232 nM； Fluo-8L：Kd = 1.86 µM； Fluo-8FF ：Kd = 10 µM）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Rhod-4, 钾盐。

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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。 它们应在使用前用高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下，AM酯应稳定数月。

        以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b）在实验当天，将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02％Pluronic®F-127在您选择的缓冲液（如Hanks和Hepes缓冲液）中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系，我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。 细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。 为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影，建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

注意：非离子洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加钙指示剂AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可以在细胞培养基中加入丙磺舒（1-2.5 mM）或磺吡酮（0.1-0.25 mM），以减少脱酯化指标的泄漏。 在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d）在HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如2.5mM丙磺舒，如果适用）中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e）在所需的Ex / Em波长下进行实验（见说明书中的表1）。

 

2.测量细胞内钙响应：

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Effect of stem cell niche elasticity/ECM protein on the self-beating cardiomyocyte differentiation of inducedpluripotent stem (iPS) cells at different stages
Authors: Mitsuhi Hirata, Tetsuji Yamaoka
Journal: Acta Biomaterialia (2017)

Emerin plays a crucial role in nuclear invagination and in the nuclear calcium transient
Authors: Masaya Shimojima, Shinsuke Yuasa, Chikaaki Motoda, Gakuto Yozu, Toshihiro Nagai, Shogo Ito, Mark Lachmann, Shin Kashimura, Makoto Takei, Dai Kusumoto
Journal: Scientific Reports (2017)

Preliminary findings on ultrasound modulation of the electromechanical function of human stem-cell-derived cardiomyocytes
Authors: Andrew William Chen, Aleksandra Klimas, Vesna Zderic, Ivan Suares Castellanos, Emilia Entcheva
Journal: (2017): 1–4

The role of spatial organization of Ca (2+) release sites in the generation of arrhythmogenic diastolic Ca (2+) release in myocytes from failing hearts.
Authors: Andriy E Belevych, Hsiang-Ting Ho, Ingrid M Bonilla, Radmila Terentyeva, Karsten E Schober, Dmitry Terentyev, Cynthia A Carnes, Sándor Györke
Journal: Basic research in cardiology (2017): 44

Dynamic polyrotaxane-coated surface for effective differentiation of mouse induced pluripotent stem cells into cardiomyocytes
Authors: Ji-Hun Seo, Mitsuhi Hirata, Sachiro Kakinoki, Tetsuji Yamaoka, Nobuhiko Yui
Journal: RSC Advances (2016): 35668–35676

Individual evaluation of cardiac marker expression and self-beating during cardiac differentiation of P19CL6 cells on different culture substrates
Authors: Tetsuji Yamaoka, Mitsuhi Hirata, Takaaki Dan, Atsushi Yamashita, Akihisa Otaka, Takahiko Nakaoki, Azizi Miskon, Sachiro Kakinoki, Atsushi Mahara
Journal: Journal of Biomedical Materials Research Part A (2016)

Involvement of aberrant calcium signalling in herpetic neuralgia
Authors: Rebekah A Warwick, Menachem Hanani
Journal: Experimental neurology (2016): 10–18

Multiple pathways for elevating extracellular adenosine in the rat hippocampal CA1 region characterized by adenosine sensor cells
Authors: Kunihiko Yamashiro, Yuki Fujii, Shohei Maekawa, Mitsuhiro Morita
Journal: Journal of Neurochemistry (2016)

OptoDyCE as an automated system for high-throughput all-optical dynamic cardiac electrophysiology
Authors: Aleksandra Klimas, Christina M Ambrosi, Jinzhu Yu, John C Williams, Harold Bien, Emilia Entcheva
Journal: Nature communications (2016)

The G protein-coupled receptor GPR157 regulates neuronal differentiation of radial glial progenitors through the Gq-IP3 pathway
Authors: Yutaka Takeo, Nobuhiro Kurabayashi, Minh Dang Nguyen, Kamon Sanada
Journal: Scientific reports (2016)

 

相关产品

产品名称 货号
钙离子荧光探针Rhod-4, 钠盐 Cat#21118

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基价格 1386
产品规格

1 Plate

产品货号

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Rhod-4 NW上色溶液：将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.从细胞板中去除生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以大程度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。或者，使细胞在含1-5％FBS的生长培养基中生长，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中添加2X染料。 [我们为在生长培养基中使用0.5-1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个单独的免洗钙测定试剂盒（Cat.＃36334和Cat.＃36335）。

2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1-2小时。

4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。

 

图示

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 去除生长培养基，并使用Screen Quest Rhod-4 NW钙分析试剂盒将细胞与100 µL染料上样溶液或室温下100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25 µL /孔）以达到指示的浓度。 使用Rhod-4 NW时卡巴胆的EC50约为0.8 µM。

 

 

参考文献

Fluorescence absorbance inner-filter decomposition: the role of emission shape on estimates of free Ca(2+) using Rhod-2
Authors: Territo PR, Heil J, Bose S, Evans FJ, Balaban RS.
Journal: Appl Spectrosc (2007): 138

Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
Authors: Bednar B, Cunningham ME, Kiss L, Cheng G, McCauley JA, Liverton NJ, Koblan KS.
Journal: J Neurosci Methods (2004): 247

Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements
Authors: Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR.
Journal: Cell Calcium (2004): 509

Protein kinase C and myocardial calcium handling during ischemia and reperfusion: lessons learned using Rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, del Nido PJ.
Journal: Thorac Cardiovasc Surg (2004): 127

Cytosolic calcium in the ischemic rabbit heart: assessment by pH- and temperature-adjusted rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, Friehs I, Choi YH, Zurakowski D, McGowan FX, del Nido PJ.
Journal: Cardiovasc Res (2003): 695

Calcium measurements in perfused mouse heart: quantitating fluorescence and absorbance of Rhod-2 by application of photon migration theory
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Biophys J (2001): 549

Calibration of the calcium dissociation constant of Rhod(2)in the perfused mouse heart using manganese quenching
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Cell Calcium (2001): 217

Changes in mitochondrial Ca2+ detected with Rhod-2 in single frog and mouse skeletal muscle fibres during and after repeated tetanic contractions
Authors: Lannergren J, Westerblad H, Bruton JD.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2001): 265

Rhod-2 based measurements of intracellular calcium in the perfused mouse heart: cellular and subcellular localization and response to positive inotropy
Authors: MacGowan GA, Du C, Glonty V, Suhan JP, Koretsky AP, Farkas DL.
Journal: J Biomed Opt (2001): 23

Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death
Authors: Muriel MP, Lambeng N, Darios F, Michel PP, Hirsch EC, Agid Y, Ruberg M.
Journal: J Comp Neurol (2000): 297

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒价格 2823
产品规格

1 Plate

产品货号

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Rhod-4 NW工作溶液：将20 µL Rhod-4 NW储备溶液加入10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。 注意：如果细胞在室温下能长时间正常工作，请在室温下孵育细胞板1-2小时。
 
3.准备并添加HHBS或所需缓冲液的复合板。

4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量检测。

 

图示

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）在室温下将细胞与100 µL染料上样溶液孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25µL /孔）以达到指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 µM。

 

参考文献

Fluorescence absorbance inner-filter decomposition: the role of emission shape on estimates of free Ca(2+) using Rhod-2
Authors: Territo PR, Heil J, Bose S, Evans FJ, Balaban RS.
Journal: Appl Spectrosc (2007): 138

Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
Authors: Bednar B, Cunningham ME, Kiss L, Cheng G, McCauley JA, Liverton NJ, Koblan KS.
Journal: J Neurosci Methods (2004): 247

Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements
Authors: Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR.
Journal: Cell Calcium (2004): 509

Protein kinase C and myocardial calcium handling during ischemia and reperfusion: lessons learned using Rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, del Nido PJ.
Journal: Thorac Cardiovasc Surg (2004): 127

Cytosolic calcium in the ischemic rabbit heart: assessment by pH- and temperature-adjusted rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, Friehs I, Choi YH, Zurakowski D, McGowan FX, del Nido PJ.
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Calcium measurements in perfused mouse heart: quantitating fluorescence and absorbance of Rhod-2 by application of photon migration theory
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Biophys J (2001): 549

Calibration of the calcium dissociation constant of Rhod(2)in the perfused mouse heart using manganese quenching
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Cell Calcium (2001): 217

Changes in mitochondrial Ca2+ detected with Rhod-2 in single frog and mouse skeletal muscle fibres during and after repeated tetanic contractions
Authors: Lannergren J, Westerblad H, Bruton JD.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2001): 265

Rhod-2 based measurements of intracellular calcium in the perfused mouse heart: cellular and subcellular localization and response to positive inotropy
Authors: MacGowan GA, Du C, Glonty V, Suhan JP, Koretsky AP, Farkas DL.
Journal: J Biomed Opt (2001): 23

Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death
Authors: Muriel MP, Lambeng N, Darios F, Michel PP, Hirsch EC, Agid Y, Ruberg M.
Journal: J Comp Neurol (2000): 297