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Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光 价格 2823
产品规格

1 plate

产品货号

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

膜电位是细胞内外的电压差。膜电位使细胞发挥电池的作用，为各种嵌入膜内的“分子器件”提供动力。在神经元等电兴奋性细胞中，膜电位被用来在细胞的不同部位传递信号。在膜的某一点上打开或关闭离子通道会使膜电位发生局部变化，从而使电流迅速流向膜的其他点。离子通道已被确定为重要的药物发现靶点。我们的Screen Quest 膜电位检测试剂盒是一种具有快速读取的均相检测方法。它使用我们专有的长波长膜电位指示剂检测由离子通道的打开和关闭引起的膜电位变化。试剂盒中使用的膜电位指示剂的红色荧光增强了进入细胞的荧光，并将筛选化合物和细胞自身荧光造成的干扰降至低。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 膜电位检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 530 nm
Em： 570 nm
Cutoff： 550 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
FDSS、FLIPR、FlexStation、NOVOStar  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加MP染料工作液
  3. 在室温下孵育30至60分钟
  4. 检测添加膜电位后化合物的荧光变化

 

溶液配制

储备溶液配制

1.分析缓冲液原液（1X）：将1 mL的10X分析缓冲液（组分B）添加到9 mL的HHBS中（组分C，不包括#36001），并充分混合。 注意：10 mL的1X分析缓冲液足以用于1个板。

 

工作溶液配制

将15 uL的MP Sensor（组分A）添加到10 mL的1X 分析缓冲液储备溶液中并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少两个小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）MP染料工作溶液添加到细胞板中。注意：如果您的筛选化合物干扰了生长培养基和血清因子，那么在添加MP染料工作溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。注意：上色后请勿清洗细胞。

2.在细胞培养箱中孵育工作溶液板30分钟。注意：在某些情况下，在室温下孵育30至60分钟可能会更好。

3.通过使用HHBS或所需的缓冲液来准备复合板。

4.在加入化合物的前后，使用荧光酶标仪中的内置液体处理器，通过检测Ex / Em = 530/570 nm处的荧光来运行膜电势测定。注意：在实验之前进行信号测试非常重要，不同的仪器具有各自的强度范围。将信号测试强度调整为大仪器强度计数的10％到15％。例如，FLIPR-384的大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置，使其信号测试强度约为7,000至10,000。

 

图示

 

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光

图1.用P2X受体瞬时转染的HEK细胞中的ATP剂量反应。 用P2X受体瞬时转染的HEK细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔的速度在Costar黑墙/透明底部96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL MP染料上载溶液在5％CO2、37°C的培养箱中孵育60分钟。 FlexStation添加了ATP（50 µL /孔）以达到指示的浓度。 用底部读取模式在Ex / Em = 530/570 nm（在550 nm处截止）下测量荧光信号。

 

 

参考文献

A novel high-throughput screening assay for HCN channel blocker using membrane potential-sensitive dye and FLIPR
Authors: Vasilyev DV, Shan QJ, Lee YT, Soloveva V, Nawoschik SP, Kaftan EJ, Dunlop J, Mayer SC, Bowlby MR.
Journal: J Biomol Screen (2009): 1119

A high-capacity membrane potential FRET-based assay for the sodium-coupled glucose co-transporter SGLT1
Authors: Weinglass AB, Swensen AM, Liu J, Schmalhofer W, Thomas A, Williams B, Ross L, Hashizume K, Kohler M, Kaczorowski GJ, Garcia ML.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 255

Miniaturization and HTS of a FRET-based membrane potential assay for K(ir) channel inhibitors
Authors: Solly K, Cassaday J, Felix JP, Garcia ML, Ferrer M, Strulovici B, Kiss L.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 225

A quantitative evaluation of peroxidase inhibitors for tyramide signal amplification mediated cytochemistry and histochemistry
Authors: Liu G, Amin S, Okuhama NN, Liao G, Mingle LA.
Journal: Histochem Cell Biol (2006): 283

Validation of a fluorescent imaging plate reader membrane potential assay for high-throughput screening of glycine transporter modulators
Authors: Benjamin ER, Skelton J, Hanway D, Olanrewaju S, Pruthi F, Ilyin VI, Lavery D, Victory SF, Valenzano KJ.
Journal: J Biomol Screen (2005): 365

Functional assay of voltage-gated sodium channels using membrane potential-sensitive dyes
Authors: Felix JP, Williams BS, Priest BT, Brochu RM, Dick IE, Warren VA, Yan L, Slaughter RS, Kaczorowski GJ, Smith MM, Garcia ML.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2004): 260

Functional characterisation of the human alpha1 glycine receptor in a fluorescence-based membrane potential assay
Authors: Jensen AA, Kristiansen U.
Journal: Biochem Pharmacol (2004): 1789

Pharmacological characterization of human excitatory amino acid transporters EAAT1, EAAT2 and EAAT3 in a fluorescence-based membrane potential assay
Authors: Jensen AA, Brauner-Osborne H.
Journal: Biochem Pharmacol (2004): 2115

A rapid assay for the brevetoxin group of sodium channel activators based on fluorescence monitoring of synaptoneurosomal membrane potential
Authors: David LS, Plakas SM, El Said KR, Jester EL, Dickey RW, Nicholson RA.
Journal: Toxicon (2003): 191

Membrane potential fluorescence: a rapid and highly sensitive assay for nicotinic receptor channel function
Authors: Fitch RW, Xiao Y, Kellar KJ, Daly JW.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2003): 4909

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光 价格 2823
产品规格

1 plate

产品货号

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Screen Quest 膜电位检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测膜电位的试剂盒，膜电位是电池内部和外部之间的电压差。膜电位允许电池充当电池，提供电力以操作嵌入膜中的各种“分子装置”。在诸如神经元的可电激发细胞中，膜电位用于在细胞的不同部分之间传递信号。在膜中的一个点处打开或关闭离子通道产生膜电位的局部变化，这导致电流快速流到膜中的其他点。离子通道已被确定为重要的药物发现目标。我们的Screen Quest 膜电位检测试剂盒是一种均质检测，具有快速读取时间。它使用我们专有的长波膜电位指示剂来检测由离子通道的打开和关闭引起的膜电位变化。试剂盒中使用的膜电位指示剂的红色荧光在进入细胞时具有增强的荧光，并小化由筛选化合物和/或细胞自发荧光引起的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 膜电位检测试剂盒。 

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 620nm
发射： 650nm
cutoff: 630nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式
其他仪器
FDSS, NOVOStar, FlexStation
实验方案

样品实验方案

简要概述

在生长培养基或HHBS中制备细胞
添加MP染料加载溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）
在室温或37℃孵育1小时
检测Ex / Em = 620 / 650nm处的荧光强度

 

工作溶液配制

MP染料加载方案：将1mL 10X MP（组分A）加入9mL HHBS（组分B）中，并充分混合。 注意：MP染料加载溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：1 mL 10X MP指示剂足以容纳一块板。 如果储存得当，未使用的10X MP（A组分）可以等分并在<-20℃下储存几个月。 避免反复冻融循环。 注意：为方便起见，HHBS（组分B）可以存储在4℃。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.向细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MP染料加载溶液。注意：如果筛选化合物干扰生长培养基和血清因子，在添加MP染料加载溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。注意：加载染料后请勿清洗细胞。

2.将染料加载板在5％CO2,37℃培养箱中孵育30至60分钟。注意：在某些情况下，室温孵育30至60分钟可能会更好。

3.使用HHBS（组分B）或所需的缓冲液制备复合板。用HHBS或所需缓冲液制备化合物板。

4.监测Ex / Em = 620 / 650nm处的荧光强度。注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到大仪器强度计数的10％至15％的水平。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（对照（Max）的％）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光

图1.用P2X受体瞬时转染的HEK细胞中的ATP剂量反应。 将用P2X受体瞬时转染的HEK细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种在Costar黑色/透明底96孔板中过夜。 将细胞与100μLMP染料加载溶液在5％CO2,37℃培养箱中孵育60分钟。 通过FlexStation添加ATP（50μL/孔）以达到指示的浓度。 在底部读取模式下在Ex / Em = 620 / 650nm（630nm处的截止值）下测量荧光信号。

 

参考文献

The short-chain fatty acid propionate increases glucagon and FABP4 production, impairing insulin action in mice and humans
Authors: Amir Tirosh, Ediz S Calay, Gurol Tuncman, Kathryn C Claiborn, Karen E Inouye, Kosei Eguchi, Michael Alcala, Moran Rathaus, Kenneth S Hollander, Idit Ron
Journal: Science translational medicine (2019): eaav0120

 

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产品名称 货号
Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光 Cat#35999

Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 价格 4245
产品规格

1 Plate

产品货号

Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) 581 Em (nm) 593
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Calbryte-590不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供强大的均相荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Calbryte -590NW，其可以穿过细胞膜。 Calbryte -590 NW是适合HTS筛查的钙指示剂。一旦进入细胞内，Calbryte -590NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带电荷的荧光染料停留在细胞内，并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Calbryte -590NW的荧光。其优异的细胞保留特性，高灵敏度和100-250倍的荧光增加（当它与钙形成复合物时）使Calbryte -590NW成为测量细胞钙的理想指标.Calbryte -590NW是钙染料不需要丙磺舒以获得更好的细胞保留。这款Screen Quest Calbryte-590不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供了优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道与脆弱或困难的细胞系。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan, FDSS, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Calbryte 590 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在室温或37°C下孵育45-60分钟
  4. 在Ex / Em = 540/590 nm处检测荧光

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Calbryte 590 AM储备溶液：向Calbryte 590 AM（组分A）的小瓶中加入20 µL（#36200）或200 µL（#36201和＃36202）DMSO。 注意：20 µL Calbryte 590 AM储备溶液足以装一板。 未用完的Calbryte 590 AM储备溶液可以等分分装，并在<-20℃下保存。 注意：避光，并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：将9 mL的HHBS（组分C，试剂盒#36202中未包括）与1 mL的10XPluronic®F127 Plus（10X）（组分B）充分混合。

 

工作溶液配制

Calbryte 590 AM工作溶液：将20 µL Calbryte 590 AM储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（1X）中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。 注意：10 mL染料加载溶液足以用于一块96孔板。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Calbryte 590 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育60分钟，然后在室温下将板再孵育15-30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。 如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1小时（建议孵育时间不超过2小时）。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度。

 

图示

Screen Quest Calbryte 590 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

图1.图表说明了信噪比（SNR）x 100％。 使用Screen Quest Calbryte 590无丙磺舒和无洗涤钙测定试剂盒测量CHO-K1细胞中的ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/ 100 µL /孔在96孔黑色板上接种过夜。 加入100 µL的染料加载溶液，在37°C下孵育45分钟，在室温下孵育15分钟。 FlexStation 3添加了ATP（50 µL /孔）以达到指示的浓度。

 

 

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Screen Quest 10X细胞染色缓冲液 *含酚红*-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 10X细胞染色缓冲液 *含酚红*价格 1386
产品规格

10 mL

产品货号

Screen Quest 10X细胞染色缓冲液 *含酚红*

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 N/A 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：Screen Quest 10X细胞染色缓冲液

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品介绍

即用型缓冲液，针对荧光细胞成像进行了优化。 在某些情况下，此缓冲液可明显增强成像信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 10X细胞染色缓冲液。 

 

图示

Screen Quest 10X细胞染色缓冲液 *含酚红*

图1.带有Phenol Red Plus 的Screen Quest 10X细胞染色缓冲液的图
Screen Quest 10X细胞染色缓冲液 *含酚红*

图2.使用Cal-520 AM在CHO-M1细胞中测量了ATP剂量反应。 将CHO-M1细胞以50,000个细胞/ 100 µL /孔在黑色96孔板中过夜接种。 加入含1X Phenol Red Plus 细胞染色缓冲液的HH缓冲液中的100 µL 10ug / ml Cal-520 AM，并在37oC下孵育60分钟。 加入ATP（50µL /孔）以达到指示的浓度。

 

参考文献

Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
Authors: Bednar B, Cunningham ME, Kiss L, Cheng G, McCauley JA, Liverton NJ, Koblan KS.
Journal: J Neurosci Methods (2004): 247

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Authors: Smith GD, Keizer JE, Stern MD, Lederer WJ, Cheng H.
Journal: Biophys J (1998): 15

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Nucleoplasmic and cytoplasmic differences in the fluorescence properties of the calcium indicator Fluo-3
Authors: Perez-Terzic C, Stehno-Bittel L, Clapham DE.
Journal: Cell Calcium (1997): 275

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Authors: Greimers R, Trebak M, Moutschen M, Jacobs N, Boniver J.
Journal: Cytometry (1996): 205

Screen Quest 10X钙离子检测缓冲液 *含酚红*-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 10X钙离子检测缓冲液 *含酚红*价格 1386
产品规格

10 mL

产品货号

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：Screen Quest 10X钙离子检测缓冲液

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：24个月

 

产品介绍

即用型缓冲液，针对荧光细胞成像进行了优化。 在某些情况下，此缓冲液可明显增强成像信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 10X细胞染色缓冲液。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
推荐孔板:

纯黑色孔板
 
 
 
参考文献
 
Patient-Derived Phenotypic High-Throughput Assay to Identify Small Molecules Restoring Lysosomal Function in Tay–Sachs Disease
Authors: Colussi, Dennis J and Jacobson, Marlene A
Journal: SLAS DISCOVERY: Advancing Life Sciences R&D (2019): 295–303
 
Electrical pulse stimulation induces differential responses in insulin action in myotubes from severely obese individuals
Authors: Park, Sanghee and Turner, Kristen D and Zheng, Donghai and Brault, Jeffrey J and Zou, Kai and Chaves, Alec B and Nielsen, Thomas S and Tanner, Charles J and Treebak, Jonas T and Houmard, Joseph A
Journal: The Journal of physiology (2019): 449–466
 
Cholecystokinin responsiveness varies across the population dependent on metabolic phenotype
Authors: Desai, Aditya J and Dong, Maoqing and Langlais, Blake T and Dueck, Amylou C and Miller, Laurence J
Journal: The American journal of clinical nutrition (2017): 447–456
 
 

Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒价格 4957
产品规格

10 Plates

产品货号

Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。该试剂盒使用高度钙敏感和膜通透的腔肠素类似物作为用载脂蛋白基因转染细胞的钙指示剂。水母发光蛋白是来自维多利亚水母的钙敏感生物发光蛋白，已广泛用作细胞中的钙指示剂。当与钙离子结合时，水母发光蛋白复合物发出蓝光。发光强度与Ca 2+浓度成正比。我们的腔肠素试剂盒比荧光钙测定试剂盒（如Fluo-4，Fluo-3，Calcium-3和Calcium-4）灵敏得多。该试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒。

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器

发光酶标仪  
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 通过去除生长培养基制备细胞
  2. 加入腔肠素装载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在室温下孵育3-4小时
  4. 检测水母发光蛋白的发光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1.腔肠素类似物：将250 µL 100％ETOH（组分B）加到腔肠素类似物（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：25 µL重组腔肠素类似物对于一块板就足够了。 如果将试管密封，则未使用的腔肠素类似物原液可在<-20℃下保存一个月以上。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36305（10板试剂盒），准备使用1X分析缓冲液（组分C）。b）对于 ＃36306（100板试剂盒），通过将10 mL的10X分析缓冲液（组分C）稀释到90 mL的HHBS缓冲液（试剂盒中未提供）中，制成1X分析缓冲液，并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 将未使用的1X分析缓冲液存储在4℃下。

 

工作溶液配制

腔肠素装载溶液：将25 µL ETOH重构的腔肠素类似物（储备溶液制备）添加到10 mL 1X分析缓冲液（储备溶液制备）中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时，并避免光照。

 

实验步骤

1.从细胞板中去除生长培养基。 注意：重要的是去除生长培养基，以大程度地减少化合物对血清或培养基的干扰。 注意：将细胞在含0.5-1％FBS的生长培养基中培养，以避免去除培养基的步骤。 在这种情况下，需要在1X缓冲液中装载2X腔肠素。

2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的腔肠素加载溶液添加到细胞板中。

3.在避光的条件下，于室温下孵育腔肠素装载板3-4小时。

4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

5.通过使用具有光电倍增管的封闭腔室的光子检测系统，检测水母发光蛋白的发光强度。 仪器必须完全排除外部光线。

 

图示

Screen Quest 发光法钙离子检测试剂盒

图1. CHO-aeq细胞上的ATP剂量反应。 用载脂蛋白精稳定转染的CHO细胞以50,000个细胞/ 100 µL /孔接种在Costar白色96孔板中过夜。 除去生长培养基，并使用Screen Quest 腔肠素钙测定试剂盒将细胞与100 µL染料上载溶液一起在室温下孵育3小时，并避光。 由NOVOstar（BMG Labtech）添加ATP（25 µL /孔），以达到指示的浓度。 ATP的EC50约为0.8 µM。

 

 

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Screen Quest Fluo-8 去除培养基钙检测试剂盒*适合于难检测细胞系*-AAT Bioquest荧光染料

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产品规格

1 Plate

产品货号

Screen Quest Fluo-8 去除培养基钙检测试剂盒*适合于难检测细胞系*

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 516
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Screen Quest Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的钙检测试剂盒，钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Fluo-8 NW，其可以穿过细胞膜。 Fluo-8 NW是可用于HTS筛选的亮钙指示剂。一旦进入细胞内，Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，产生带负电荷的荧光染料，其停留在细胞内，并且在与钙结合时其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Fluo-8 NW的荧光。其长波长，高灵敏度和100-250倍荧光增加的特性（当它与钙形成复合物时）使Fluo-8 NW成为测量细胞钙的理想指标。这个Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest Fluo-8 去除培养基钙检测试剂盒*适合于难检测细胞系*。 

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适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em： 525 nm
Cutoff： 515 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备细胞
2.去除生长培养基
3.添加Fluo-8 NW染料工作溶液
4.在室温下孵育1小时
5.监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 Fluo-8 NW配制：
对于Cat No.36307，将10μLDMSO加入Fluo-8 NW（组分A）中，并充分混合。
对于Cat No.36308和36309，将100μLDMSO加入Fluo-8 NW（组分A）中，并充分混合。 注意：10μLFluo-8 NW原液足以容纳1个平板。

1.2分析缓冲液储备液（1X）：
对于Cat No.36307和36308，将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中并充分混合。
对于Cat No.36309，将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中并充分混合。 注意：对于一个平板，10 mL的1X分析缓冲液就足够了。

 

2.工作溶液配制

将10μLFluo-8 NW DMSO储备溶液加入10mL 1X测定缓冲液中并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

操作步骤

1.有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

2.从细胞板上除去生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以大限度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。注意：或者，在含有0.5％至1％FBS的生长培养基中培养细胞，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中加入2X染料。 [我们为那些在生长培养基中使用0.5％至1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个独立的无洗涤钙测定试剂盒（目录号36315和目录号36316）。

3.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8NW染料工作溶液加入到细胞板中。

4.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。注意：如果测定需要37°C，立即进行实验，无需进一步室温孵育。注意：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞培养板1-2小时（建议培养时间不超过2小时。）

5.用HHBS或所需缓冲液制备复合板。

6.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。注意：在实验之前运行信号测试很重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到大强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使其信号测试强度在7,000到10,000左右。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU（Max-Min））用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算卡巴胆碱剂量样品。 

Screen Quest Fluo-8 去除培养基钙检测试剂盒*适合于难检测细胞系*

图1.使用Screen Quest Fluo-8 NW Assay Kit和Fluo-4 NW Assay Kit在HEK-293细胞中测量Carbachol剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种在Costar黑壁/透明底96孔板中过夜。 除去生长培养基，使用Screen Quest Fluo 8-NW钙测定试剂盒或Fluo-4 NW试剂盒（根据制造商的说明书）将细胞与100μL染料上样溶液一起在室温下孵育1小时 温度。 通过NOVOstar（BMG Labtech）添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到指示的浓度。 Fluo8 NW的EC50约为1.2μM。

 

参考文献

2-OMe-lysophosphatidylcholine analogues are GPR119 ligands and activate insulin secretion from βTC-3 pancreatic cells: Evaluation of structure-dependent biological activity
Authors: Anna Drzazga, Agata Sowińska, Agnieszka Krzemińska, Andrzej Okruszek, Piotr Paneth, Maria Koziolkiewicz, Edyta Gendaszewska-Darmach
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Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒 Cat#36317
Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒 Cat#36314

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒

产品参数
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产品概述

Screen Quest 免洗Fluo-8钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒，Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒提供均匀的荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的感兴趣的GPCR的细胞预加载有可以穿过细胞膜的Fluo-8 NW。一旦进入细胞内，Fluo-8 NW的亲脂性阻断基团被酯酶裂解，导致带电荷的荧光染料留在细胞内。与钙结合后，其荧光大大增强。当用激动剂刺激细胞时，该受体发出细胞内钙的释放信号，这显着增加了Fluo-8 NW的荧光。 Fluo-8 NW具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，是测量细胞钙的理想指标。 Screen Quest Fluo-8 NW钙测定试剂盒为监测G蛋白偶联受体和钙通道提供了一种优化的检测方法。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em： 525 nm
Cutoff： 515 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan, FDSS, FLIPR, FlexStation, IN Cell Analyzer, NOVOStar, ViewLux  
实验方案

样品分析方案

概述

用含有0.5-1％FBS的Fluo-8 NW染料加载溶液

在生长培养基中制备细胞（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在室温下孵育1小时

监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞过夜，对于96孔板，具有0.5-1％FBS，40,000至80,000个细胞/孔/100μL，或者对于384孔板，为10,000至20,000个细胞/孔/25μL。

1.2对于非贴壁细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于等量的HHBS和Fluo-8 NW染料加载溶液中（参见下面的步骤2.4），125,000至250,000细胞/孔/100μL 用于96孔poly-D赖氨酸平板或30,000至60,000细胞/孔/25μL用于384孔聚-D赖氨酸平板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定细胞内钙动员的细胞密度。

 

2.准备Fluo-8 NW染料加载溶液：
2.1在使用前，在室温下1小瓶Fluo-8 NW（组分A），1瓶10XPluronic®F127Plus（组分B）和HHBS（组分C）。

2.2Make Fluo-8 NW储备溶液::加入20μL（Cat＃36314）或200μL（Cat＃36315和＃36316）DMSO到Fluo-8 NW（A组分）小瓶中，混匀。
注意：20μLFluo-8 NW原液足以用于一个平板。如果管子密封，未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并在<-20摄氏度下储存超过一个月。避光，避免反复冻融循环。

2.3制备1X测定缓冲液：
A）。对于Cat＃36314（1个试剂盒）和＃36315（10个试剂盒试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）加入10X Pluronic F127 Plus（1mL，组分B）中制备1X测定缓冲液，并充分混合。

B）。对于Cat＃36316（100个试剂盒试剂盒），将整瓶10XPluronic®F127Plus（10 mL，组分B）加入90 mL HHBS缓冲液（不包括在试剂盒中）中，制成1X试剂缓冲液，并充分混合。
注意：对于一个平板，10 mL的1X测定缓冲液就足够了。在<-20℃下等分并储存未使用的1X测定缓冲液。避光，避免反复冻融循环。

2.4为一个细胞板制备Fluo-8 NW染料加载溶液：将20μLFluo-8 NW储备溶液（来自步骤2.2）加入10 mL 1X分析缓冲液（来自步骤2.3），并充分混合。该工作溶液在室温下稳定至少2小时。

 

3.运行钙测定：
3.1将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Fluo-8 NW染料加载溶液（来自步骤2.4）加入到细胞板中。
注意：或者，在含有5-10％FBS的生长培养基中培养细胞以细胞生长。在这种情况下，重要的是用HHBS缓冲液替换生长培养基以小化背景荧光和化合物干扰血清。 [我们为那些喜欢保持培养基去除步骤的人提供2个独立的中等去除钙测定试剂盒（Cat＃36308和36309）]。

3.2将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育30分钟。
注1：如果测定需要37℃，立即进行实验，无需进一步室温孵育。
注2：如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1-2小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.3用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。

3.4通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。
注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到大仪器强度计数的10％至15％的水平。例如，FLIPR-384的大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置以使信号测试强度在7,000到10,000左右。

 

参考文献

A Long-Acting PYY3–36 Analog Mediates Robust Anorectic Efficacy with Minimal Emesis in Nonhuman Primates
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A new electro-optical approach for conductance measurement: an assay for the study of drugs acting on ligand-gated ion channels
Authors: A Menegon, S Pitassi, N Mazzocchi, L Redaelli, R Rizzetto, JF Rolland, C Poli, M Imberti, A Lanati, F Grohovaz
Journal: Scientific Reports (2017)

Altered spontaneous calcium signaling of in situ chondrocytes in human osteoarthritic cartilage
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Aryl-and alkyl-phosphorus-containing flame retardants induced mitochondrial impairment and cell death in Chinese hamster ovary (CHO-k1) cells
Authors: Chao Huang, Na Li, Shengwu Yuan, Xiaoya Ji, Mei Ma, Kaifeng Rao, Zijian Wang
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Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒价格 2823
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Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) 493 Em (nm) 515
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒是美国AAT Bioquest研发的用于检测钙离子的试剂盒钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的药物发现中的优选方法。 Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供强大的均相荧光测定，用于检测细胞内钙动员。表达感兴趣的GPCR的细胞通过钙预先加载我们专有的Calbryte -520NW，其可以穿过细胞膜。 Calbryte -520 NW是适合HTS筛查的钙指示剂。一旦进入细胞内，Calbryte -520NW的亲脂性阻断基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带电荷的荧光染料停留在细胞内，并且在与钙结合后其荧光大大增强。当用筛选化合物刺激细胞时，该受体表明细胞内钙的释放，这极大地增加了Calbryte -520NW的荧光。其优异的细胞保留特性，高灵敏度和100-250倍的荧光增加（当它与钙形成复合物时）使Calbryte -520NW成为测量细胞钙的理想指标.Calbryte -520NW是钙染料不需要丙磺舒以获得更好的细胞保留。这款Screen Quest Calbryte-520不含Probenecid和Wash-Free的钙测定试剂盒提供了优化的检测方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道与脆弱或困难的细胞系。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em： 525 nm
Cutoff： 515 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

分析方案

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.添加Calbryte 520 NW染料加载溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

3.在室温或37°C孵育15-30分钟

4.在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光

注意：使用前在室温下解冻所有试剂盒组分

 

操作方法 

1.将20μL（Cat＃36317）或200μL（Cat＃36318和＃36319）DMSO加入到Calbryte 520 NW（组分A）的小瓶中并充分混合。

注意：20μLCalbryte 520 NW储备溶液足以用于一个平板。 如果管子密封，可以将未使用的Calbryte 520 NW储备溶液等分并在<-20℃下储存超过一个月。

注意：避光，避免反复冻融循环。

2.将9 mL HHBS（组分C，不包括在试剂盒Cat＃36319中）与1 mL 10X Pluronic F127 Plus（10X）（组分B）混合并充分混合。 

 

实验方案

1.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Calbryte 520NW染料加载溶液加入到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后将板在室温下再孵育15-30分钟。

注意：如果测定需要37°C，立即进行实验，无需进一步室温孵育。 如果细胞在室温下运行时间较长，可在室温下孵育细胞板1小时（建议孵育时间不超过2小时。）

3.用HHBS或所需缓冲液制备复合板

4.通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来进行钙通量测定。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（RFU）用作阴性对照。从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。该等式可用于计算ATP样品。我们建议使用在线四参数物流计算器。

Screen Quest Calbryte 520 免丙磺舒和免洗钙检测试剂盒

图1. CHO-K1细胞中内源性P2Y受体与ATP的荧光信号反应的比较。 将CHO-K1细胞以50,000个细胞/100μL/孔接种过夜，置于96孔黑色壁/透明底板中。 使用Screen Quest Calbryte 520不含Probenecid和WashFree钙测定试剂盒，FLIPR Calcium 4 Assay Kit和Fluo-4 Direct Calcium Assay试剂盒测量钙通量响应。 通过FlexStation 3添加ATP（50μL/孔）以达到指示的浓度。

 

关于细胞样品制备的方案（点击查看）

相关产品（点击查看） 

 

参考文献

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

Propofol and remifentanil at moderate and high concentrations affect proliferation and differentiation of neural stem/progenitor cells
Authors: Qing Li, Jiang Lu, Xianyu Wang
Journal: Neural regeneration research (2014): 2002

Role of mitochondrial calcium uniporter in regulating mitochondrial fission in the cerebral cortexes of living rats
Authors: Nan Liang, Peng Wang, Shilei Wang, Shuhong Li, Yu Li, Jinying Wang, Min Wang
Journal: Journal of Neural Transmission (2014): 593–600

Increased expression of cell adhesion molecule 1 by mast cells as a cause of enhanced nerve–mast cell interaction in a hapten-induced mouse model of atopic dermatitis
Authors: M Hagiyama, T Inoue, T Furuno, T Iino, S Itami, M Nakanishi, H Asada, Y Hosokawa, A Ito
Journal: British Journal of Dermatology (2013): 771–778

Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒价格 5670
产品规格

10 Plates

产品货号

Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) 336 Em (nm) 505
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体（GPCR）药物发现的方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fura-2AM预加载，Fura-2AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内，亲脂封闭基团Fura-2AM被酯酶裂解，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内，其荧光波长在与钙结合时蓝移。当细胞受到激动剂刺激时，受体发出细胞内钙离子释放的信号，从而大大提高Fura-2在短波处的荧光强度。Fura-2的比色特性使该试剂盒成为比单波长Fluo-4测定细胞钙浓度的理想工具。通过单次添加，该分析很容易在高透性环境中进行。该方法可用于96孔或384孔微孔板，且易于自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 340/380 nm
Em： 510 nm
Cutoff： 470 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
FDSS、FLIPR、FlexStation  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Fura-2 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在室温下孵育1-2小时
  4. 检测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Fura-2 AM储备溶液：将200 µL DMSO加入小瓶Fura-2 AM（组分A）中，并充分混合。 注意：20 µL Fura-2 AM储备溶液足以装满一块板。 如果试管密封严密，可将未使用的Fura-2 AM储备溶液分装并在<-20℃下保存超过一个月。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36320（10板试剂盒），通过将9mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。
b）对于＃36321（100个板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X分析缓冲液。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Fura-2 AM染料加载溶液：将20 µL Fura-2 AM储备溶液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Fura-2 AM染料加载溶液添加到细胞板中。 注意：如果您的化合物干扰血清，则需要用HHBS缓冲液代替生长培养基。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育20分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过监测Ex / Em = 340/510 nm和380/510 nm处的荧光增加来进行钙通量测定。 注意：在实验前进行信号测试非常重要。 不同的仪器具有各自的强度范围。 注意：对于在FDSS上进行的测定，请在仪器上对Fura-2钙测定使用标准滤波器。
 

图示

Screen Quest 免洗Fura-2钙检测试剂盒

图1.用Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒测量的CHO-K1细胞中的ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL Screen Quest Fura-2 免洗钙含量测定试剂盒在室温下孵育1小时。 通过FlexStation（分子设备）添加ATP（50 µL /孔）以达到指示的浓度。

 

 

参考文献

Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM
Authors: Barreto-Chang OL, Dolmetsch RE.
Journal: J Vis Exp. (2009)

Measurement of [Ca2+]i in whole cell suspensions using fura-2
Authors: Hirst RA, Harrison C, Hirota K, Lambert DG.
Journal: Methods Mol Biol (2006): 37

Load of calcium probe Fura -2/AM in Escherichia coli cells
Authors: Shao M, Wang HM, Liu ZH, Shen P, Cai RX.
Journal: Wei Sheng Wu Xue Bao (2005): 805

Abnormal spectra alteration observed in Triton calibration method for measuring [Ca2+]i with fluorescence indicator, fura-2
Authors: Xu T, Yang W, Huo XL, Song T.
Journal: J Biochem Biophys Methods (2004): 219

Fluorescence measurements of free [Mg2+] by use of mag-fura 2 in Salmonella enterica
Authors: Froschauer EM, Kolisek M, Dieterich F, Schweigel M, Schweyen RJ.
Journal: FEMS Microbiol Lett (2004): 49

Photonic crystal fibre enables short-wavelength two-photon laser scanning fluorescence microscopy with fura-2
Authors: McConnell G, Riis E.
Journal: Phys Med Biol (2004): 4757

Cytoplasmic calcium measurement in rotavirus enterotoxin-enhanced green fluorescent protein (NSP4-EGFP) expressing cells loaded with Fura-2
Authors: Berkova Z, Morris AP, Estes MK.
Journal: Cell Calcium (2003): 55

AMPA-induced Ca(2+) influx in cultured rat cortical nonpyramidal neurones: pharmacological characterization using fura-2 microfluorimetry
Authors: Fischer W, Franke H, Scheibler P, Allgaier C, Illes P.
Journal: Eur J Pharmacol (2002): 53

Purinergic receptors have different effects in rat exocrine pancreas. Calcium signals monitored by fura-2 using confocal microscopy
Authors: Novak I, Nitschke R, Amstrup J.
Journal: Cell Physiol Biochem (2002): 83

Measurement of [Ca2+]i in whole cell suspensions using fura-2
Authors: Hirst RA, Harrison C, Hirota K, Lambert DG.
Journal: Methods Mol Biol (1999): 31

Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

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Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 价格 5670
产品规格

10 Plates

产品货号

Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) 495 Em (nm) 528
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙通量分析是筛选G蛋白偶联受体（GPCR）药物发现的方法。该比值钙测定试剂盒允许均匀测量由G蛋白偶联受体或钙通道引起的细胞内钙变化。表达通过钙传递信号的GPCR的细胞被Fluo-4 AM预加载，Fluo-4 AM可以穿过细胞膜。一旦进入细胞内，Fluo-4 AM的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，从而导致带负电荷的Fluo-4染料留在细胞内，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Fluo-4的荧光。此Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于监测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒 。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em： 520 nm
Cutoff： 510 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加Fluo-4 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  3. 在37°C孵育1小时
  4. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Fluo-4 AM储备溶液：将200 µL DMSO加到Fluo-4 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：20 µL Fluo-4 NW储备液足以装满一块板。 如果将试管紧密密封，可以将未使用的Fluo-4 AM储备溶液等分，并在<-20℃下保存1个月以上。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：将1 mL的10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）加入9 mL的HHBS缓冲液（组分C）中，制成1X的测定缓冲液，并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Fluo-4 AM上染溶液：将20 µL Fluo-4 NW储备溶液添加到10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。 该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Fluo-4 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

4.通过检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度运行钙通量测定法。

 

图示

Screen Quest 免洗Fluo-4钙检测试剂盒

图1.使用Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒在CHO-K1细胞中测量了ATP剂量反应。 将CHO-K1细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest Fluo-4 免洗钙含量测定试剂盒，将细胞与100 µL染料加载溶液一起在室温下孵育1小时。 通过Flexstation 3（MDC）添加ATP（50µL /孔），以达到指示的浓度。

 

 

参考文献

Lysophosphatidylcholine and its phosphorothioate analogues potentiate insulin secretion via GPR40 (FFAR1), GPR55 and GPR119 receptors in a different manner
Authors: Drzazga, Anna and Kristinsson, Hjalti and Salaga, Maciej and Zatorski, Hubert and Koziolkiewicz, Maria and Gendaszewska-Darmach, Edyta and Bergsten, Peter
Journal: Molecular and Cellular Endocrinology (2017)

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基价格 1386
产品规格

1 Plate

产品货号

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Rhod-4 NW上色溶液：将10 µL Rhod-4 NW储备液添加到10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.从细胞板中去除生长培养基。注意：重要的是去除生长培养基，以大程度地减少背景荧光和化合物对血清或培养基的干扰。或者，使细胞在含1-5％FBS的生长培养基中生长，以避免培养基去除步骤。在这种情况下，需要在HHBS缓冲液中添加2X染料。 [我们为在生长培养基中使用0.5-1％FBS以避免培养基去除步骤的人提供2个单独的免洗钙测定试剂盒（Cat.＃36334和Cat.＃36335）。

2.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

3.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间正常工作，则在室温下孵育细胞板1-2小时。

4.用HHBS或所需的缓冲液准备复合板。

5.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度进行钙通量检测。

 

图示

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒 去除培养基

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 去除生长培养基，并使用Screen Quest Rhod-4 NW钙分析试剂盒将细胞与100 µL染料上样溶液或室温下100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25 µL /孔）以达到指示的浓度。 使用Rhod-4 NW时卡巴胆的EC50约为0.8 µM。

 

 

参考文献

Fluorescence absorbance inner-filter decomposition: the role of emission shape on estimates of free Ca(2+) using Rhod-2
Authors: Territo PR, Heil J, Bose S, Evans FJ, Balaban RS.
Journal: Appl Spectrosc (2007): 138

Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
Authors: Bednar B, Cunningham ME, Kiss L, Cheng G, McCauley JA, Liverton NJ, Koblan KS.
Journal: J Neurosci Methods (2004): 247

Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements
Authors: Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR.
Journal: Cell Calcium (2004): 509

Protein kinase C and myocardial calcium handling during ischemia and reperfusion: lessons learned using Rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, del Nido PJ.
Journal: Thorac Cardiovasc Surg (2004): 127

Cytosolic calcium in the ischemic rabbit heart: assessment by pH- and temperature-adjusted rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, Friehs I, Choi YH, Zurakowski D, McGowan FX, del Nido PJ.
Journal: Cardiovasc Res (2003): 695

Calcium measurements in perfused mouse heart: quantitating fluorescence and absorbance of Rhod-2 by application of photon migration theory
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Biophys J (2001): 549

Calibration of the calcium dissociation constant of Rhod(2)in the perfused mouse heart using manganese quenching
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Cell Calcium (2001): 217

Changes in mitochondrial Ca2+ detected with Rhod-2 in single frog and mouse skeletal muscle fibres during and after repeated tetanic contractions
Authors: Lannergren J, Westerblad H, Bruton JD.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2001): 265

Rhod-2 based measurements of intracellular calcium in the perfused mouse heart: cellular and subcellular localization and response to positive inotropy
Authors: MacGowan GA, Du C, Glonty V, Suhan JP, Koretsky AP, Farkas DL.
Journal: J Biomed Opt (2001): 23

Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death
Authors: Muriel MP, Lambeng N, Darios F, Michel PP, Hirsch EC, Agid Y, Ruberg M.
Journal: J Comp Neurol (2000): 297

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒价格 2823
产品规格

1 Plate

产品货号

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) 523 Em (nm) 551
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙通量测定法是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的方法。 Screen Quest Rhod-4 NW钙含量测定试剂盒提供了一种基于荧光的均相测定，用于检测细胞内钙的迁移。Rhod-4是可用于HTS筛选的亮的红色钙指示剂。一旦进入细胞内，Rhod-4 的亲脂性封闭基团就会被非特异性细胞酯酶裂解，产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部，并且与钙结合后其荧光会大大增强。当细胞被筛选化合物刺激时，受体信号释放细胞内钙，这大大增加了Rhod-4的荧光。 Rhod-4 具有长波长，高灵敏度和大于250倍的荧光增强特性（当与钙形成复合物时），使其成为测量细胞钙的理想指标。此Screen Quest Rhod-4 NW钙测定试剂盒提供了一种优化的测定方法，用于检测G蛋白偶联受体（GPCR）和钙通道。该测定可以用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
ArrayScan、FDSS、FLIPR、FlexStation、IN Cell Analyzer、NOVOStar、ViewLux  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 添加Rhod-4 NW染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. Rhod-4 NW储备溶液：将100 µL DMSO加入小瓶Rhod-4 NW（组分A）中并充分混合，避光。 注意：10 µL Rhod-4 NW储备液足以装满一块板。

2.分析缓冲液（1X）：a）对于＃36330（1个板试剂盒）和＃363331（10个板试剂盒），通过将9 mL HHBS（组分C）添加到10XPluronic®F127 Plus（1 mL，组分B）中来制成1X分析缓冲液，并充分混合。b）对于＃36332（100板试剂盒），通过向10XPluronic®F127 Plus（10 mL，组分B）中加入90 mL HHBS（未包括）制成1X Assay Buffer。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的1X分析缓冲液。 避光并避免重复的冻融循环。

 

工作溶液配制

Rhod-4 NW工作溶液：将20 µL Rhod-4 NW储备溶液加入10 mL 1X分析缓冲液中，并充分混合。 注意：该工作溶液在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Rhod-4 NW染料加载溶液添加到细胞板中。

2.在细胞培养箱中将染料加载板孵育30分钟，然后在室温下再孵育30分钟。 注意：如果测定需要37℃，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。 注意：如果细胞在室温下能长时间正常工作，请在室温下孵育细胞板1-2小时。
 
3.准备并添加HHBS或所需缓冲液的复合板。

4.通过检测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度运行钙通量检测。

 

图示

Screen Quest 免洗Rhod-4钙检测试剂盒

图1.使用Screen Quest Rhod-4 NW分析试剂盒和Rhod-2 AM在HEK-293细胞中测量了卡巴胆碱剂量反应。 将HEK-293细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中过夜接种。 使用Screen Quest™Rhod-4 NW钙测定试剂盒或100 µL Rhod-2 AM溶液（5 µM）在室温下将细胞与100 µL染料上样溶液孵育1小时。 NOVOstar（BMG Labtech）添加了卡巴胆碱（25µL /孔）以达到指示的浓度。 使用Rhod-4 NW的卡巴胆碱的EC50约为0.6 µM。

 

参考文献

Fluorescence absorbance inner-filter decomposition: the role of emission shape on estimates of free Ca(2+) using Rhod-2
Authors: Territo PR, Heil J, Bose S, Evans FJ, Balaban RS.
Journal: Appl Spectrosc (2007): 138

Kinetic characterization of novel NR2B antagonists using fluorescence detection of calcium flux
Authors: Bednar B, Cunningham ME, Kiss L, Cheng G, McCauley JA, Liverton NJ, Koblan KS.
Journal: J Neurosci Methods (2004): 247

Novel fluo-4 analogs for fluorescent calcium measurements
Authors: Martin VV, Beierlein M, Morgan JL, Rothe A, Gee KR.
Journal: Cell Calcium (2004): 509

Protein kinase C and myocardial calcium handling during ischemia and reperfusion: lessons learned using Rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, del Nido PJ.
Journal: Thorac Cardiovasc Surg (2004): 127

Cytosolic calcium in the ischemic rabbit heart: assessment by pH- and temperature-adjusted rhod-2 spectrofluorometry
Authors: Stamm C, Friehs I, Choi YH, Zurakowski D, McGowan FX, del Nido PJ.
Journal: Cardiovasc Res (2003): 695

Calcium measurements in perfused mouse heart: quantitating fluorescence and absorbance of Rhod-2 by application of photon migration theory
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Biophys J (2001): 549

Calibration of the calcium dissociation constant of Rhod(2)in the perfused mouse heart using manganese quenching
Authors: Du C, MacGowan GA, Farkas DL, Koretsky AP.
Journal: Cell Calcium (2001): 217

Changes in mitochondrial Ca2+ detected with Rhod-2 in single frog and mouse skeletal muscle fibres during and after repeated tetanic contractions
Authors: Lannergren J, Westerblad H, Bruton JD.
Journal: J Muscle Res Cell Motil (2001): 265

Rhod-2 based measurements of intracellular calcium in the perfused mouse heart: cellular and subcellular localization and response to positive inotropy
Authors: MacGowan GA, Du C, Glonty V, Suhan JP, Koretsky AP, Farkas DL.
Journal: J Biomed Opt (2001): 23

Mitochondrial free calcium levels (Rhod-2 fluorescence) and ultrastructural alterations in neuronally differentiated PC12 cells during ceramide-dependent cell death
Authors: Muriel MP, Lambeng N, Darios F, Michel PP, Hirsch EC, Agid Y, Ruberg M.
Journal: J Comp Neurol (2000): 297

Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *10板*-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *10板*价格 2823
产品规格

100 Tests

产品货号

Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *10板*

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

肿瘤细胞对细胞药物的耐药性被认为是化疗成功的主要障碍之一。有些肿瘤是耐药的，对细胞抑制药物治疗没有反应；另一些肿瘤反应良好，但会再生并产生耐药性。这种现象可能是由所给抗肿瘤药物诱导的基因突变引起的，也可能代表恶性肿瘤中已存在的耐药细胞群的选择。多药耐药（MDR）是多种化疗失败的主要因素。在过去的几年中，人们普遍认为化疗耐药性与至少两个ATP依赖的药物外排的过度表达有关。这些细胞膜蛋白，称为P-糖蛋白（Pgp，MDR1）和多药耐药相关蛋白（MRP1）是ABC转运体家族的成员。我们的检测试剂盒使用荧光MDR指示剂来检测这两种MDR活性。这种疏水性荧光染料分子迅速穿透细胞膜并保留在细胞内。短时间培养后，细胞内游离染料浓度明显增加。在表达MDR1和/或MRP1的细胞中，该染料被MDR转运体挤压，从而降低细胞荧光强度。然而，当其挤压被干扰MDR1和MRP1活性的试剂阻断时，其细胞荧光强度明显增加。我们的MDR检测试剂盒提供了一个优化的检测方法的所有必须成分。该方法可在96孔或384孔微孔板中进行，且易于自动化。该试剂盒是高通量筛选MDR抑制剂或鉴定具有高水平MDR活性细胞的理想试剂盒。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em： 520 nm
Cutoff： 510 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 添加MDR抑制剂或化合物
  3. 添加MDR染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
  4. 在室温下孵育1小时
  5. 使用底部读取模式检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

MDR指示剂储备溶液：将20 µL（#36340-1板）或200 µL（#36341-10板）添加到MDR指示剂（组分A）中，并充分混合。 注意：20 µL MDR指示剂原液足以装满一块板。 未密封的MDR指示剂原液可以分装，并在<-20℃下保存1个月。 避光，并避免反复冻融。

 

工作溶液配制

MDR染料加载溶液：将20 µL的MDR指示剂储备溶液添加到10 mL的测定缓冲液（组分C）中，并充分混合。 注意：MDR染料加载溶液足以装满一块板，并且在室温下至少可稳定2小时。

 

实验步骤

  1. 通过将10 µL的10X（96孔板）或5 µL的5X（384孔板）化合物加入化合物缓冲液（如PBS或HHBS）中来处理细胞。对于空白孔（没有细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。注意：添加化合物之前不必洗涤细胞。但是，如果测试的化合物对血清敏感，则可以在添加化合物之前将生长培养基和血清因子吸掉。抽吸后，向孔中添加相同体积的HHBS（例如，对于96孔板为90 µL，对于384孔板为20 µL）。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。
  2. 在室温下或在37℃，5％CO2的培养箱中孵育细胞板至少15分钟。
  3. 加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的MDR染料加载溶液。
  4. 在避光条件下，于室温下孵育染料加载板1小时。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。注意：上样后请勿洗涤细胞。注意：对于非贴壁细胞，建议在孵育后以800 rpm离心细胞板2分钟。
  5. 使用底部读取模式检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度。

 

图示

Screen Quest 荧光法多药物抗性MDR检测试剂盒 *10板*

图1.环孢菌素A对MCF-7 / ADR细胞中P-gp的抑制作用。 环孢菌素A浓度的增加导致荧光信号的增加，这是由于P-gp的抑制所致，从而增强了MDR指示剂染料在细胞内的积累。 EC50 = 2.4μM（用试剂盒测量）。

 

 

参考文献

A phase I clinical and pharmacokinetic study of the multi-drug resistance protein-1 (MRP-1) inhibitor sulindac, in combination with epirubicin in patients with advanced cancer
Authors: O’Connor R, O’Leary M, Ballot J, Collins CD, Kinsella P, Mager DE, Arnold RD, O’Driscoll L, Larkin A, Kennedy S, Fennelly D, Clynes M, Crown J.
Journal: Cancer Chemother Pharmacol (2007): 79

Mutational Patterns Associated with the 69 Insertion Complex in Multi-drug-resistant HIV-1 Reverse Transcriptase that Confer Increased Excision Activity and High-level Resistance to Zidovudine
Authors: Cases-Gonzalez CE, Franco S, Martinez MA, Menendez-Arias L.
Journal: J Mol Biol (2007): 298

A case of multi-drug resistant recurrent breast cancer with multiple bone metastasis responding to TS-1 and trastuzumab
Authors: Nakajima H, Mizuta N, Mizuta M, Nakatsukasa K, Kobayashi A, Hachimine Y, Sakaguchi K, Fujiwara I, Sawai K.
Journal: Gan To Kagaku Ryoho (2006): 1305

A controlled clinical trial of long course chemotherapy regimens containing rifabutin in the treatment of multi-drug resistant pulmonary tuberculosis
Authors: Zhu LZ, Fu Y, Chu NH, Ye ZZ, Xiao HP, Wang W, Yuan SL, Zhang X, Luo YA, Ma LP.
Journal: Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi (2006): 520

Activity-guided isolation of scopoletin and isoscopoletin, the inhibitory active principles towards CCRF-CEM leukaemia cells and multi-drug resistant CEM/ADR5000 cells, from Artemisia argyi
Authors: Adams M, Efferth T, Bauer R.
Journal: Planta Med (2006): 862

Advances in the study of drugs for the treatment of multi-drug resistant tuberculosis
Authors: Tang SJ.
Journal: Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi (2006): 567

Assessment of resistance in multi drug resistant tuberculosis patients
Authors: Irfan S, Hassan Q, Hasan R.
Journal: J Pak Med Assoc (2006): 397

Bacteriologic profile of bacteremia due to multi-drug resistant bacteria at Charles-Nicolle Hospital of Tunis
Authors: Saidani M, Boutiba I, Ghozzi R, Kammoun A, Ben Redjeb S.
Journal: Med Mal Infect (2006): 163

Clinical Prediction Tool to Identify Patients with Pseudomonas aeruginosa Respiratory Tract Infections at Greatest Risk for Multi-Drug Resistance
Authors: Lodise TP, Miller CD, Graves J, Furuno JP, McGregor JC, Lomaestro B, Graffunder E, McNutt LA.
Journal: Antimicrob Agents Chemother. (2006)

Colistin, meropenem and rifampin in a combination therapy for multi-drug-resistant Acinetobacter baumannii multifocal infection
Authors: Biancofiore G, Tascini C, Bisa M, Gemignani G, Bindi ML, Leonildi A, Giannotti G, Menichetti F.
Journal: Minerva Anestesiol. (2006)

Screen Quest 比色法氯离子通道检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 比色法氯离子通道检测试剂盒价格 10753
产品规格

10 Plates

产品货号

Screen Quest 比色法氯离子通道检测试剂盒

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

氯离子通道具有多种重要的生理和细胞功能，包括调节pH值，体内稳态，有机溶质转运，细胞迁移，细胞增殖和分化。氯离子通道代表了有价值的药物靶标。许多慢性疾病状态，例如囊性纤维化和Bartter综合征，是由于氯化物通道功能的缺陷所致。Screen Quest 比色氯通道测定试剂盒为研究氯离子通道提供了灵敏而稳定的比色方法。该测定法基于我们专有的碘化物指示剂（Iodide Blue ），用于测量碘化物浓度，该测定法检测到的碘化物低至30 nM。 Screen Quest 氯离子通道测定试剂盒提供了一种用于检测氯离子通道的优化测定方法。该测定可以使用96孔或384孔微孔板进行，并易于适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 比色法氯离子通道检测试剂盒。

 

适用仪器

光吸收酶标仪  
吸收: 630, 380, or 405nm
推荐孔板： 透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 除去生长培养基
  3. 加入I-Loading Buffer，用筛选化合物处理细胞
  4. 用DPBS缓冲液洗涤细胞3次
  5. 用1X裂解液裂解细胞
  6. 添加等体积的I-sensor（50或25 µL）
  7. 将0.1X加到I- Sensor Enhancer（50或25 µL）
  8. 在室温下孵育10秒至10分钟
  9. 检测380 nm，405 nm或630 nm处的吸光度

 

溶液配制

储备溶液配制

细胞裂解缓冲液（1X）：将整个小瓶的10X细胞裂解缓冲液（组分D）添加到45 mL无菌H2O中，并充分混合。 注意：5 mL 1X细胞裂解缓冲液足以装满一块板。 将未使用的1X细胞裂解缓冲液储存在4℃。

 

工作溶液配制

I- Sensor Enhancer工作溶液（1X）：将50 µL 100X碘化物增强指示剂（组分B）加入5 mL无菌H2O中并充分混合。 注意：1X I- Sensor Enhancer工作溶液不稳定，请稀释后2小时内使用。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定I-Sensor Enhancer溶液的稀释度。 我们观察到0.1X I-Sensor Enhancer工作溶液在某些细胞系中效果更好。

 

实验步骤

1.碘化物流出测定

1.1从细胞板上吸出生长培养基。

1.2加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的预热I-上样缓冲液（组分C）并孵育2-4小时。

1.3完全吸出碘化物上样缓冲液。 用DPBS或HBSS清洗细胞至少3次。

1.4在HBSS缓冲液中用激动剂处理细胞5分钟。 注意：为筛选拮抗剂，将化合物与I上样缓冲液孵育至少30分钟，然后再用DPBS或HBSS缓冲液洗涤细胞。

1.5吸出上清液。

1.6通过添加50 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的1X细胞裂解缓冲液来裂解细胞。

1.7进行碘化物测定。

 

2.用于碘化物流入分析

2.1从细胞板上吸出生长培养基。

2.2加入预热的I-上样缓冲液（组分C）和测试化合物100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）并孵育5分钟。

2.3完全吸出碘化物上样缓冲液。 用HBSS洗涤细胞3次。

2.4通过添加50 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的1X细胞裂解缓冲液来裂解细胞。

2.5进行碘化物测定。

3.运行碘化物测定

3.1从碘化物流入/流出测定选择的孔中添加50 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Iodide Blue 指示剂（组分A）。

3.2向混合物中加入50 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的1X碘化物指示剂增强剂溶液。 注意：对于某些细胞系，您可能需要将增强剂溶液稀释至0.1X。

3.3在室温下孵育10秒-10分钟。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定孵育时间。 注意：由于存在高浓度的碘化物，蓝色可能在数秒至数分钟内变为黄色。

3.4检测630、380或405 nm处的吸光度。

 

图示

Screen Quest 比色法氯离子通道检测试剂盒

图1. NaI剂量反应是在透明的96孔板上用Screen Quest 比色氯通道测定试剂盒测量的。

 

 

参考文献

A tyramine-gated chloride channel coordinates distinct motor programs of a Caenorhabditis elegans escape response
Authors: Pirri JK, McPherson AD, Donnelly JL, Francis MM, Alkema MJ.
Journal: Neuron (2009): 526

ANO2 is the cilial calcium-activated chloride channel that may mediate olfactory amplification
Authors: Stephan AB, Shum EY, Hirsh S, Cygnar KD, Reisert J, Zhao H.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2009): 11776

Activation of a chloride channel by a trophic ligand is required for development of the mouse preimplantation embryo in vitro
Authors: Li Y, O’Neill C, Day ML.
Journal: Biol Reprod (2009): 759

An ivermectin-sensitive glutamate-gated chloride channel from the parasitic nematode Haemonchus contortus
Authors: McCavera S, Rogers AT, Yates DM, Woods DJ, Wolstenholme AJ.
Journal: Mol Pharmacol (2009): 1347

Chloride intracellular channel 1 regulates osteoblast differentiation
Authors: Yang JY, Jung JY, Cho SW, Choi HJ, Kim SW, Kim SY, Kim HJ, Jang CH, Lee MG, Han J, Shin CS.
Journal: Bone (2009): 1175

Chloride intracellular channel protein-4 functions in angiogenesis by supporting acidification of vacuoles along the intracellular tubulogenic pathway
Authors: Ulmasov B, Bruno J, Gordon N, Hartnett ME, Edwards JC.
Journal: Am J Pathol (2009): 1084

Chloride intracellular channel-4 is a determinant of native collateral formation in skeletal muscle and brain
Authors: Chalothorn D, Zhang H, Smith JE, Edwards JC, Faber JE.
Journal: Circ Res (2009): 89

Cloning, expression, and characterization of stable manganese superoxide dismutase from ascus aurantiacus var. levisporus
Authors: Song NN, Zheng Y, E SJ, Li DC.
Journal: J Microbiol (2009): 123

Effects of Chinese herbal medicine combined with He-Ne laser on lipoperoxide and superoxide dismutase in chloasma patients
Authors: Wu YH, Li QL, Yang XW.
Journal: J Tradit Chin Med (2009): 163

Genetically encoded optical sensors for monitoring of intracellular chloride and chloride-selective channel activity
Authors: Bregestovski P, Waseem T, Mukhtarov M.
Journal: Front Mol Neurosci (2009): 15