PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *PPi选择性高*-AAT Bioquest荧光染料

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PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *PPi选择性高*价格 4957
产品规格

200 Tests

产品货号

PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *PPi选择性高*

产品参数
Ex (nm) Em (nm)
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测焦磷酸的试剂盒,焦磷酸盐(PPi)通过许多生化反应产生,例如ATP水解,DNA和RNA聚合,腺苷酸环化酶形成的环AMP和脂肪酸的酶促活化以形成它们的辅酶A酯。我们的PhosphoWroks 焦磷酸盐检测试剂盒提供了强大的分光光度法测量焦磷酸盐。该试剂盒使用我们专有的荧光焦磷酸盐,其荧光强度成比例地取决于焦磷酸盐的浓度。与磷酸盐和ATP相比,该试剂盒中使用的PPi探针对PPi具有相当高的选择性。我们的测定法比酶偶联焦磷酸盐方法更容易和更稳定,这些方法需要至少两种酶用于焦磷酸盐检测。该试剂盒提供了测定焦磷酸盐的所有必需成分。该试剂盒已成功用于高通量筛选(HTS)。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 370 nm
Em: 470 nm
Cutoff: 455 nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

操作步骤

简要概述

准备PPi探针工作溶液(50μL)
添加焦磷酸盐标准品和/或测试样品(50μL)
在室温下孵育10至30分钟
检测Ex / Em = 370/470 nm处的荧光强度(cutoff= 455 nm)

 

溶液制备

1.制备储备溶液

除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1 PPi探针储备溶液(200X):
将50μLDMSO(组分D)加入到PPi探针(组分B)的小瓶中以制备200X PPi探针储备溶液。 注意:对于一个96孔板,25μLPPiSensor储备溶液就足够了。

 

2.制备标准溶液

焦磷酸盐标准
通过将10μL50mM焦磷酸盐标准品(组分C)加入490μL测定缓冲液(组分A)或您选择的缓冲液(优选50 mM Hepes缓冲液,pH 7)中制备1 mM焦磷酸盐标准品,制成1 mM焦磷酸盐标准品。 取1 mM焦磷酸盐标准品(PS7)进行1:3连续稀释,得到连续稀释的焦磷酸盐标准品(PS6-PS1)和测定缓冲液(组分A)。

 

3.制备工作溶液

将25μL200XPPi Sensor储备溶液加入5 mL分析缓冲液(组分A)中,并充分混合。 注意:由于该检测方法对PPi具有高灵敏度,因此使用不含PPi的实验室器具和试剂非常重要。 注意:DTT(1 uM)会增加背景,MgCl2≥2mM会降低反应。

 

样品实验方案

表1.实心黑色96孔微孔板中焦磷酸盐标准品和测试样品的布局。

PS =焦磷酸盐标准,BL =空白对照,TS =测试样品。

BL BL TS TS
PS1 PS1
PS2 PS2
PS3 PS3    
PS4 PS4    
PS5 PS5    
PS6 PS6    
PS7 PS7    

 

表2.每个孔的试剂组成

规格 试剂
PS1-PS7 50ul 连续稀释(1至1000μM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分A)
TS 50ul 样品

根据表1和2中提供的布局制备焦磷酸盐标准品(PS),空白对照品(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

向焦磷酸盐标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLPPiSensor工作溶液,使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μLPPiSensor工作溶液,总体积为50μL/孔。

在室温下孵育反应10-30分钟,避光。

使用荧光酶标仪在Ex / Em = 370/470 nm(截止= 455 nm)下检测荧光

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算PPi样本。 我们建议使用在线线性回归计算器,该计算器可在以下位置找到:

PhosphoWorks 荧光法焦磷酸检测试剂盒 *PPi选择性高*

图1.使用PhosphoWorks Fluoremetric焦磷酸盐测定试剂盒在固体黑色96孔板中使用荧光酶标仪测量焦磷酸盐,ATP和磷酸盐剂量响应。

 

参考文献

Biological studies and target-engagement of the 2-C-methyl-D-erythritol 4-phosphate cytidylyltransferase (IspD)-targeting antimalarial agent (1R, 3S)-MMV008138 and analogs
Authors: Maryam Ghavami, Emilio Fernando Merino, ZhongKe Yao, Rubayet Elahi, Morgan Simpson, Maria Fernandez-Murga, Joshua Hayden Butler, Michael Casasanta, Priscilla Krai, Maxim Totrov
Journal: ACS Infectious Diseases (2017)

Structural Insights into Inhibition of Escherichia coli Penicillin-binding Protein 1B
Authors: Dustin T King, Gregory A Wasney, Michael Nosella, Anita Fong, Natalie CJ Strynadka
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): 979–993

Biomarkers identified by urinary metabonomics for noninvasive diagnosis of nutritional rickets
Authors: Maoqing Wang, Xue Yang, Lihong Ren, Songtao Li, Xuan He, Xiaoyan Wu, Tingting Liu, Liqun Lin, Ying Li, Changhao Sun
Journal: Journal of proteome research (2014): 4131–4142

Host-Pathogen Interaction and Signaling Molecule Secretion Are Modified in the dpp3 Knockout Mutant of Candida lusitaniae
Authors: Ayman Sabra, Jean-Jacques Bessoule, Vessela Atanasova-Penichon, Thierry Noel, Karine Dementhon
Journal: Infection and immunity (2014): 413–422

 

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