Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月29日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒红色荧光价格 2823
产品规格

1000 Tests

产品货号

Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒红色荧光

产品参数

Ex (nm)	571	Em (nm)	584
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于ELISA检测的试剂盒，辣根过氧化物酶（HRP）是广泛用于多种生物学检测的小分子（MW~40KD）。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。它们按4：1的比例与抗体结合。此外，与其它酶标签相比HRP更便宜。Amplite荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA试剂盒 *红色荧光*含有所有分析必需组分，包括我们的Amplite Red HRP作为底物用于ELISA检测。本试剂盒提供优化分析方案，该方案可应用于高通量液体处理设备，能在微孔板中检出10pg的多抗。它的信号抗原用荧光分析仪读取Ex/Em = 530 to 570 nm/590 to 600 nm或者用酶标仪读取其570nm处的吸光值显示。作为检测试剂，它可以用来分析检测羊抗兔IgG。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒。

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适用仪器

光吸收酶标仪
吸收:	576 ± 5nm
推荐孔板:	透明底板

荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备ELISA板
2.添加山羊抗兔IgG-HRP共轭工作液（100μL/孔）
3.在室温下孵育30分钟
4.清洗孔（PBS-Tween 3X）
5.加入过氧化物酶工作液（100μL/孔）
6.在室温下孵育30-60分钟
7.监测Ex / Em = 540/490 nm处的荧光强度（截止= 570 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液（200X）：
将250μLDMSO（组分D）加入到Amplite 红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中并充分混合以制备200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。注意：50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备液足以用于1个平板。应立即使用原液,避光。

2. H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

3.工作溶液

将50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和100μL的20mM H₂O₂储备溶液加入9.85mL的测定缓冲液（组分C）中并充分混合以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

点击查看细胞样品制备指南

样品分析

1.准备ELLISA板：

1.1通过执行所有必要的ELISA制备步骤制备ELISA微量培养板（包括适当的对照）。

1.2将2μL山羊抗兔IgG-HRP缀合物（组分E）加入10mL含1％BSA的PBS（PBS-BSA，不包括在内）中以制备山羊抗兔IgG-HRP缀合物工作溶液。注意：10 mL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液足以用于1个平板。建议将此山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液的浓度作为初始浓度进行尝试。每个特定应用的佳浓度可能需要凭经验确定。

1.3用含有0.02％至0.05％Tween 20（PBS-Tween）和排液的PBS洗涤ELISA孔三次。

1.4每孔加入100μL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作液。

1.5在室温下孵育30分钟。排出山羊抗兔IgG-HRP结合物。

1.6用PBS-Tween洗涤孔三次并排干。

2.在ELISA板中运行过氧化物酶测定：

2.1在含有样品和对照的每个排出的微孔板中加入100μL过氧化物酶工作溶液。

2.2在室温下孵育反应30分钟或更长时间，避光。

2.3用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光增加。注意：也可以用吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读板。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Assessment of Tofacitinib and Ruxolitinib and their Anti Inflammatory Effects on Myeloperoxidase
Authors: Amber Milton
Journal: (2017)

Patterned Photonic Nitrocellulose for Pseudo-Paper ELISA
Authors: Junjie Chi, Bingbing Gao, Mi Sun, Fengling Zhang, Enben Su, Hong Liu, Zhongze Gu
Journal: Analytical Chemistry (2017)

Spinal Cord Inflammation: Molecular Imaging after Thoracic Aortic Ischemia Reperfusion Injury
Authors: Hassan Albadawi, John W Chen, Rahmi Oklu, Yue Wu, Gregory Wojtkiewicz, Benjamin Pulli, John D Milner, Richard P Cambria, Michael T Watkins
Journal: Radiology (2016): 152222

Myeloperoxidase Nuclear Imaging for Epileptogenesis
Authors: Yinian Zhang, Daniel P Seeburg, Benjamin Pulli, Gregory R Wojtkiewicz, Lionel Bure, Wendy Atkinson, Stefan Schob, Yoshiko Iwamoto, Muhammad Ali, Wei Zhang
Journal: Radiology (2015): 822–830

Myeloperoxidase–Hepatocyte–Stellate Cell Cross Talk Promotes Hepatocyte Injury and Fibrosis in Experimental Nonalcoholic Steatohepatitis
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Yoshiko Iwamoto, Matthias WG Zeller, Stefan Schob, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: Antioxidants & redox signaling (2015): 1255–1269

Ordered cleavage of myeloperoxidase ester bonds releases active site heme leading to inactivation of myeloperoxidase by benzoic acid hydrazide analogs
Authors: Jiansheng Huang, Forrest Smith, Peter Panizzi
Journal: Archives of biochemistry and biophysics (2014): 74–85

Raising the shields: PCR in the presence of metallic surfaces protected by tailor-made coatings
Authors: Frank D Scherag, Thomas Brandstetter, Jürgen Rühe
Journal: Colloids and Surfaces B: Biointerfaces (2014): 576–582

Measuring myeloperoxidase activity in biological samples
Authors: Benjamin Pulli, Muhammad Ali, Reza Forghani, Stefan Schob, Kevin LC Hsieh, Gregory Wojtkiewicz, Jenny J Linnoila, John W Chen
Journal: PLoS One (2013): e67976

Micro-volume wall-less immunoassays using patterned planar plates
Authors: Katherine R Kozak, Jianyong Wang, Melvin Lye, Rashi Takkar, Namyong Kim, Hyunjae Lee, Noo Li Jeon, Kedan Lin, Crystal Zhang, Wai Lee T Wong
Journal: Lab on a Chip (2013): 1342–1350

Distinguishing inflammation from tumor and peritumoral edema by myeloperoxidase magnetic resonance imaging
Authors: Anne Kleijn, John W Chen, Jason S Buhrman, Gregory R Wojtkiewicz, Yoshiko Iwamoto, Martine L Lamfers, Anat O Stemmer-Rachamimov, Samuel D Rabkin, Ralph Weissleder, Robert L Martuza
Journal: Clinical Cancer Research (2011): 4484–4493

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Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒蓝色-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月29日由上海金畔生物科技有限公司

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Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒蓝色价格 2823
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500 Tests

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Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒蓝色

产品参数

Ex (nm)	–	Em (nm)	–
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法过氧化酶检测试剂盒。

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收:	664 ± 5nm
推荐孔板:	透明底板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 蓝色底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 蓝色过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到HRP小瓶（组分D）中以制备20U / mL HRP储备溶液。

1.3 H₂O₂溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂溶液。注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL的20U / mL HRP溶液加入985μL的测定缓冲液（组分C）中，得到300mU / mL的HRP标准溶液（SD7）。取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 – SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的Amplite Blue Peroxidase Substrate储备液（100X）和50μL的H₂O₂储备溶液（20 mM）加入到4.9 mL的分析缓冲液（组分C）中，使总体积为5 mL的HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.白壁/透明底96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	…	…
SD2	SD2	…	…
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释（0.3至300 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分C）
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLHRP工作溶液，使总HRP测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLHRP工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用吸光度读板仪在664±5nm下监测吸光度。

参考文献

Enzymatic oxidation of dipyridamole in homogeneous and micellar solutions in the horseradish peroxidase-hydrogen peroxide system
Authors: Almeida LE, Imasato H, Tabak M.
Journal: Biochim Biophys Acta (2006): 216

Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295

Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547

Vesicular transport route of horseradish C1a peroxidase is regulated by N- and C-terminal propeptides in tobacco cells
Authors: Matsui T, Nakayama H, Yoshida K, Shinmyo A.
Journal: Appl Microbiol Biotechnol (2003): 517

Development of a novel enzyme/prodrug combination for gene therapy of cancer: horseradish peroxidase/indole-3-acetic acid
Authors: Greco O, Folkes LK, Wardman P, Tozer GM, Dachs GU.
Journal: Cancer Gene Ther (2000): 1414

Preparation, morphological characterization, and activity of thin films of horseradish peroxidase
Authors: Vianello F, Zennaro L, Di Paolo ML, Rigo A, Malacarne C, Scarpa M.
Journal: Biotechnol Bioeng (2000): 488

Synthesis and purification of horseradish peroxidase-labeled oligonucleotides for tyramide-based fluorescence in situ hybridization
Authors: van Gijlswijk RP, van de Corput MP, Bezrookove V, Wiegant J, Tanke HJ, Raap AK.
Journal: Histochem Cell Biol (2000): 175

Evidence for free radical formation during the oxidation of 2′-7′-dichlorofluorescin to the fluorescent dye 2′-7′-dichlorofluorescein by horseradish peroxidase: possible implications for oxidative stress measurements
Authors: Rota C, Chignell CF, Mason RP.
Journal: Free Radic Biol Med (1999): 873

In situ identification of cyanobacteria with horseradish peroxidase-labeled, rRNA-targeted oligonucleotide probes
Authors: Schonhuber W, Zarda B, Eix S, Rippka R, Herdman M, Ludwig W, Amann R.
Journal: Appl Environ Microbiol (1999): 1259

Relative number of cells projecting from contralateral and ipsilateral nucleus isthmi to loci in the optic tectum is dependent on visuotopic location: horseradish peroxidase study in the leopard frog
Authors: Dudkin EA, Gruberg ER.
Journal: J Comp Neurol (1999): 212

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Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月29日由上海金畔生物科技有限公司

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500 Tests

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Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒红色荧光

产品参数

Ex (nm)	571	Em (nm)	584
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite比色法过氧化酶检测试剂盒 *蓝色* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒使用Amplite Blue，我们的超灵敏HRP显色底物，即Amplite Blue作为过氧化酶的显色底物，它比双氧水和过氧化酶及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite Blue产生高吸收物质，在664nm处有大吸收峰。这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小。本试剂盒可以用于ELISA，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收:	576 ± 5nm
推荐孔板:	透明底板

荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	575nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测664±5 nm的吸光度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。应立即使用原液，避光。

2. HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中以制备20U / mL的HRP标准溶液。

3. H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL分析缓冲液（组分C）中加入1μL的20U / mL HRP标准溶液，得到10mU / mL HRP标准溶液（SD7）。取10 mU / mL HRP标准溶液（SD7）并进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6-SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H₂O₂储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液（组分C）中以制备HRP工作溶液，避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.01至10 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	…	…
SD2	SD2	…	…
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分C）
TS	50ul	测试样品

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。注意：高水平的HRP（例如，> 100mU / mL终浓度）可能由于Amplite TM Red（至非荧光）的过度氧化而导致荧光信号降低。

3.在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 540±10nm，发射= 590±10nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 575nm）监测荧光增加。注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Identification of acetylcholinesterase inhibitors using homogenous cell-based assays in quantitative high-throughput screening platforms
Authors: Shuaizhang Li, Ruili Huang, Samuel Solomon, Yitong Liu, Bin Zhao, Michael F Santillo, Menghang Xia
Journal: Biotechnology journal (2017): 1600715

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Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒近红外荧光-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒近红外荧光价格 4245
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒近红外荧光

产品参数

Ex (nm)	648	Em (nm)	668
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比，过氧化酶也更便宜；其主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低；而在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite荧光法过氧化酶检测试剂盒 *近红外荧光* 提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均质的、无需洗脱的分析检测方案。本试剂盒使用Amplite IR，HRP近红外荧光底物。Amplite IR是过氧化酶的显色底物，它比H2O2和过氧化酶，及其它的过氧化酶的显色底物（例如TMB, ABTS, OPD 和K-Blue）具有更高的灵敏度。Amplite IR可产生在647 nm具有大吸收光，在670 nM处具有大激发光的底物，这种近红外吸收使自动化检测生物样品时本底吸收很小，在600nm处几乎没有光吸收。本试剂盒可以用于ELISAs，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。本试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒。

点击查看光谱

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收:	647 ± 5nm
推荐孔板:	透明底板

荧光酶标仪
Ex:	640nm
Em:	680nm
Cutoff:	665nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备过氧化物酶工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监测Ex / Em = 640/680 nm处的荧光强度（截止= 665 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite IR过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite IR过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中以制备20U / mL HRP标准溶液。

1.3 H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL20U / mL HRP标准溶液加入985μL测定缓冲液（组分C）中，得到300 mU / mL HRP标准溶液（SD7）。取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 – SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H₂O₂储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液（组分C）中以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.41至300mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	…	…
SD2	SD2	…	…
SD3	SD3
SD4	SD4
SD5	SD5
SD6	SD6
SD7	SD7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.41至300 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分C）
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL过氧化物酶工作溶液，使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL过氧化物酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 600-650nm，发射= 650-690nm（佳Ex / Em = 640 / 680nm，截止= 665nm）监测荧光增加。注意：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在647±5nm波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

参考文献

Horseradish peroxidase-driven fluorescent labeling of nanotubes with quantum dots
Authors: Didenko VV, Baskin DS.
Journal: Biotechniques (2006): 295

Recent advances in catalytic peroxidase histochemistry
Authors: Krieg R, Halbhuber KJ.
Journal: Cell Mol Biol (Noisy-le-grand) (2003): 547

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Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒	Cat#11552
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Amplite 发光法过氧化酶检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 发光法过氧化酶检测试剂盒

产品参数

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分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 发光法过氧化酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，过氧化酶是常用于与抗体按4:1比例结合的小分子(MW ~40 KD)。由于分子量小，因此在与抗体、抗原结合形成复合物时不会带来空间阻碍。与其它酶标签相比过氧化酶更便宜。主要它的主要缺点是在保护剂（例如叠氮化钠）存在的条件下溶解性低，在低浓度下，过氧化酶的活性低。HRP偶联物是广泛用作ELISA（酶联免疫吸附实验）、免疫组化技术、Northern、 Southern和Western blot分析的第二个检测试剂。Amplite生物发光法过氧化酶检测试剂盒提供了一种快速(10分钟)HRP一步法均衡的、无需洗脱的分析方案。本试剂盒可以用于ELISAs，酶促反应动力学分析，氧化酶抑制剂高通量筛选等。试剂盒经过优化处理，并且可用于高通量液体处理设备。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 发光法过氧化酶检测试剂盒。

适用仪器

发光酶标仪
推荐孔板:	纯白色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备HRP工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30分钟至2小时
4.监测发光强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 HRP原液（20 U / mL）：
将1mL含有0.1％BSA的PBS加入到辣根过氧化物酶（组分C）的小瓶中。

2.标准溶液

HRP标准
在1999μL含0.1％BSA的PBS中加入1μL20U / mL HRP储备液，得到10 mU / mL HRP标准溶液（PS7）。然后使用10 mU / mL标准溶液并进行1：2连续稀释以获得剩余的连续稀释的标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

将30μL3％稳定的H₂O₂溶液（组分B）加入5mL分析缓冲液（组分A）中以制备HRP工作溶液并避光。注意：HRP工作溶液在室温下稳定至少8小时，如果避光，不会造成活性损失。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 PS =过氧化物酶标准品（PS1-PS7,0.156至10mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
PS1	PS1	…	…
PS2	PS2	…	…
PS3	PS3
PS4	PS4
PS5	PS5
PS6	PS6
PS7	PS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
PS1-PS7	50ul	连续稀释（0.156至10 mU / mL）
BL	50ul	PBS含0.1％BSA
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（PS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

3.在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

4.使用标准光度计监测发光强度。

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒红色荧光

产品参数

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产品概述

Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒红色荧光是美国AAT Bioquest生产的检测谷胱甘肽过氧化物酶的试剂盒，谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）是具有过氧化物酶活性的酶家族，以保护生物体免受氧化损伤。GPx在将有机氢过氧化物（例如脂质氢过氧化物）还原成其相应的醇或将游离过氧化氢还原成水。因此，它可以防止细胞膜和细胞中其他氧化剂敏感位点的氧化损伤。现在科研已经注意到，改变GPx水平与由许多评论和复杂疾病引起的损伤相关。在生物样品中测量GPx水平，作为潜在癌症，糖尿病，神经退行性疾病和心血管疾病的潜在指标。AAT Bioquest的荧光谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒提供灵敏的荧光测定法，用于测量生物样品中的GPx水平。该测定基于GPx催化的谷胱甘肽（GSH）氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。生成的GSSG通过谷胱甘肽还原酶（GR）和NADPH再循环至还原态GSH：

R-O-O-H + 2GSH ^GPx R-O-H + GSSG + H₂O

GSSG + NADPH + H⁺ ^GR 2GSH + NADP⁺

产品NADP +可以使用我们新开发的专有NADP传感器Quest Fluor™NADP Probe进行专门监控。 NADP传感器仅与NADP反应产生荧光产物。荧光信号可以用荧光酶标仪在Ex / Em = 420 / 480nm处测量，其与GPx活性成正比。与测量NADPH在340 nm处吸光度降低的其他商业试剂盒相比，我们的Quest Fluor™NADP探针可用于直接量化NADP水平。通过这种荧光测定GPx测定，我们能够在155μL反应体积中检测低至1.2 mU / mL的GPx。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法谷胱甘肽过氧化物酶检测试剂盒。

适用仪器

荧光酶标仪
Ex:	420nm
Em:	480nm
Cutoff:	430nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

96孔板的测定方案

概述

准备GPx分析混合物（50μL）

添加GPx标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟

加入20μLQuestFluor™NADP探针

添加20μLNAP检测溶液

在室温下孵育10-20分钟

添加15μL增强剂

溶液在室温孵育30-60分钟，在Ex / Em = 420 / 480nm处记录荧光

注意1.为了获得佳效果，强烈建议使用黑色版。

注意2.在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方法

1.制备谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）标准储备液：

将50μLddH2O或1×PBS缓冲液加入到GPx标准品（组分A）的小瓶中，制成10U / mL标准储备溶液。

注意：未使用的GPx标准储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

2.准备GPx标准的系列稀释液：

2.1将4μLGPx标准储备溶液（10U / mL，来自步骤1）加入996L 1×PBS缓冲液中，以产生浓度为40mU / mL的标准溶液。

注意：稀释的GPx标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

2.2取200μL40mU / mL GPx标准溶液进行1：2连续稀释，得到大约20,10,5,2.5,1.25,0.625和0 mU / mL的GPx标准品系列稀释液。

2.3如表1和2中所述，将GPx标准品和含有GPx的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

表1实心黑色96孔微孔板中GPx标准品和测试样品的布局

BL	BL	TS	TS	….	….
GP 1	GP 1	….	….	….	….
GP 2	GP 2
GP 3	GP 3
GP 4	GP 4
GP 5	GP 5
GP 6	GP 6
GP 7	GP 7

注意：GP = GPx标准，BL =空白对照，TS =测试样品。

表2每个孔的试剂组成

GPx Standard	Blank Control	Test Sample
Serial Dilutions*: 50 μL	1×PBS Buffer : 50 μL	50 μL

*注意：将连续稀释的GPx标准品从大约0.6 mU / mL加到40 mU / mL，一式两份加入GP1到GP7的孔中。

3.准备GSH原液（100X）：

将100μlddH2 O加入到GSH小瓶（组分D）中以制备100X GSH储备溶液。

4.准备GPx底物储备液（100X）：

将100μlddH2O加入到基质小瓶（组分E）中以制备100X底物储备溶液。

5.准备GPx分析混合物：

5.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分C）中。

5.2将50μLGSH储备溶液（来自步骤3的组分D），50μL底物储备溶液（组分E，来自步骤4）加入到组分B + C的瓶子中（来自步骤5.1），并充分混合以进行GPx测定混合物（组分B + C + D + E）。

注1：该GPx测定混合物足以用于一个96孔板。它不稳定，请及时使用。

注2：不建议储存未使用的GPx分析混合物。可以将未使用的组分B + C混合物（来自步骤5.1）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC，尽管灵敏度可能会降低。

注3; 将未使用的100X GSH储备溶液（来自步骤3）和100X GPx底物储备溶液（来自步骤4）分成单次使用的等分试样并储存在-20ºC。

6.运行GPx分析：

6.1将50μLGPx测定混合物（来自步骤5.2）加入到GPx标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLGPx测定混合物。

6.2在室温下孵育反应30分钟，避光。

7.运行NADP测定：

7.1将20μLQuestFluor™NADP探针（组分F）加入到GPx标准品，空白对照品和测试样品的每个孔中，充分混合。

7.2在每个孔中加入20μLNAP检测溶液（组分G），充分混匀。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和10μLQuestFluor™NADP探针（组分F）和10μLNAP检测溶液（组分G）。

7.3在室温下孵育反应10-20分钟，避光。

7.4向每个孔中加入15μL增强剂（组分H），使总测定体积为155μL/孔，并在室温下孵育30-60分钟，避光。

注意：对于384孔板，添加7.5μL增强剂。

7.5使用荧光读板仪在Ex / Em = 420/480 nm处监测荧光增加。

参考文献

A mechanistic mathematical model for the catalytic action of glutathione peroxidase
Authors: Pannala VR, Bazil JN, Camara AK, Dash RK.
Journal: Free Radic Res (2014): 487

A supramolecular microgel glutathione peroxidase mimic with temperature responsive activity
Authors: Yin Y, Jiao S, Lang C, Liu J.
Journal: Soft Matter (2014): 3374

Basal levels of glutathione peroxidase correlate with onset of radiation induced lung disease in inbred mouse strains
Authors: Kunwar A, Haston CK.
Journal: Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol (2014): L597

Can recombinant human glutathione peroxidase 1 with high activity be efficiently produced in Escherichia coli
Authors: Guo X, Song J, Yu Y, Wei J.
Journal: Antioxid Redox Signal (2014): 1524

Changes of the Thioredoxin System, Glutathione Peroxidase Activity and Total Antioxidant Capacity in Rat Brain Cortex During Acute Liver Failure: Modulation by L-histidine
Authors: Ruszkiewicz J, Albrecht J.
Journal: Neurochem Res. (2014)

Characterization and structural analysis of human selenium-dependent glutathione peroxidase 4 mutant expressed in Escherichia coli
Authors: Yu Y, Song J, Guo X, Wang S, Yang X, Chen L, Wei J.
Journal: Free Radic Biol Med (2014): 332

Characterization of biochemical properties of a selenium-independent glutathione peroxidase of Cryptosporidium parvum
Authors: Kang JM, Ju HL, Sohn WM, Na BK.
Journal: Parasitology (2014): 570

Clinical significance and therapeutic value of glutathione peroxidase 3 (GPx3) in hepatocellular carcinoma
Authors: Qi X, Ng KT, Lian QZ, Liu XB, Li CX, Geng W, Ling CC, Ma YY, Yeung WH, Tu WW, Fan ST, Lo CM, Man K.
Journal: Oncotarget. (2014)

Construction of a highly stable artificial glutathione peroxidase on a protein nanoring
Authors: Miao L, Zhang X, Si C, Gao Y, Zhao L, Hou C, Shoseyov O, Luo Q, Liu J.
Journal: Org Biomol Chem (2014): 362

Daily rhythms of catalase and glutathione peroxidase expression and activity are endogenously driven in the hippocampus and are modified by a vitamin A-free diet
Authors: Navigatore-Fonzo LS, Delgado SM, Gimenez MS, Anzulovich AC.
Journal: Nutr Neurosci (2014): 21

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒黄色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒黄色荧光价格 2111
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Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒黄色荧光

产品参数

Ex (nm)	–	Em (nm)	–
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于过氧化物酶的试剂盒，碱性磷酸酶是用于ELISA，免疫组织化学，Northern，Southern和Western印迹应用的高度灵敏的酶。它广泛用于各种生物测定（特别是免疫测定）和基于ELISA的诊断。这种Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒使用pNPP（一种生色磷酸酶底物）来定量溶液，细胞提取物以及固体表面（如PVDF膜）上的碱性磷酸酶活性。该试剂盒通过我们优化的“混合和读取”测定方案提供所有必需组分，该方案与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒。

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收:	400nm
推荐孔板:	透明底板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
2.添加ALP工作溶液（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测400nm处的吸光度增加

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 pNPP储备液（100X）：
将300μL蒸馏水加入pNPP小瓶（组分A）中。好好混合。应立即使用pNPP储备溶液。注意：如果妥善保存，解决方案应该有效期为3-4周。

1.2 碱性磷酸盐标准溶液：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

2.标准溶液

碱性磷酸盐标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。然后取100μL的1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液进行1:10稀释，得到100 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。然后进行1：3连续稀释以获得剩余标准品（AS6-AS1）。注意：应丢弃未使用的稀释碱性磷酸酶标准溶液部分。

3.工作溶液

将50μLpNPP储备溶液（100X）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，使总体积为5.05mL的pNPP工作溶液。

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和白色/透明底96孔微孔板中的样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	…	…
AS2	AS2	…	…
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.1至100 mU / mL）
BL	50ul	H₂O-0.1％BSA
TS	50ul	测试样品

1.在上清液中：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸盐标准品（AS），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸盐标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLpNPP工作溶液，使总碱性磷酸盐测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μLpNPP工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

1.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

2.在细胞中：

2.1根据需要处理细胞。

2.2将等体积的pNPP工作溶液加入每个细胞孔（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）中。注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL工作溶液。然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.4用吸光度读板仪在400 nm处监测吸光度的增加。

参考文献

An mTOR Signaling Modulator Suppressed Heterotopic Ossification of Fibrodysplasia Ossificans Progressiva
Authors: Kyosuke Hino, Chengzhu Zhao, Kazuhiko Horigome, Megumi Nishio, Yasue Okanishi, Sanae Nagata, Shingo Komura, Yasuhiro Yamada, Junya Toguchida, Akira Ohta
Journal: Stem cell reports (2018): 1106–1119

R51Q SNX10 induces osteopetrosis by promoting uncontrolled fusion of monocytes to form giant, non-functional osteoclasts
Authors: Maayan Barnea, Merle Stein, Sabina Winograd-Katz, Moran Shalev, Esther Arman, Ori Brenner, Fadi Thalji, Moien Kanaan, Hila Elinav, Polina Stepensky
Journal: bioRxiv (2018): 332551

The impact of various scaffold components on vascularized bone constructs
Authors: Ahmad Eweida, Matthias Schulte, Oliver Frisch, Ulrich Kneser, Leila Harhaus
Journal: Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery (2017)

A Mineralized High Strength and Tough Hydrogel for Skull Bone Regeneration
Authors: Bing Xu, Pengbin Zheng, Fei Gao, Wei Wang, Hongtao Zhang, Xuran Zhang, Xuequan Feng, Wenguang Liu
Journal: Advanced Functional Materials (2016)

DRG axon elongation and growth cone collapse rate induced by Sema3A are differently dependent on NGF concentration
Authors: Andrius Kaselis, Rimantas Treinys, Ruta Vosyliute, Saulius Satkauskas
Journal: Cellular and molecular neurobiology (2014): 289–296

Acute oral toxicity and kinetic behaviors of inorganic layered nanoparticles
Authors: Jin Yu, Hea-Eun Chung, Soo-Jin Choi
Journal: Journal of Nanomaterials (2013): 12

Effect of Some Antihypertensive Drugs on Alkaline Phosphatase and DNA of Mice
Authors: OY El-Khawaga, A El-Waseef, YO Ellazec, MM El-Naggar, Abd M Alla
Journal: International Journal of Genomics and Proteomics (2013): 60

An engineering understanding of the small intestine
Authors: Monica Rosalia Jaime Fonseca
Journal: (2012)

Cytotoxicity and alkaline phosphatase activity evaluation of endosequence root repair material
Authors: Mahmoud Reza Modareszadeh, Peter M Di Fiore, David A Tipton, Narges Salamat
Journal: Journal of endodontics (2012): 1101–1105

Alginate-loaded liposomes can protect encapsulated alkaline phosphatase functionality when exposed to gastric pH
Authors: Alan M Smith, Monica R Jaime-Fonseca, Liam M Grover, Serafim Bakalis
Journal: Journal of agricultural and food chemistry (2010): 4719–4724

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Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒蓝色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒蓝色荧光价格 2823
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500 Tests

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Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒蓝色荧光

产品参数

Ex (nm)	360	Em (nm)	448
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *蓝色荧光* 用MUP，一种碱性磷酸酶的蓝色荧光底物来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。本试剂盒提供所有必须成分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒。

点击查看光谱

适用仪器

荧光酶标仪
Ex:	360nm
Em:	450nm
Cutoff:	435nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测Ex / Em = 360/450 nm处的荧光强度（截止= 435 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 MUP Plus 原液（250X）：
将100μL无菌H2O加入到MUP Plus （组分A）的小瓶中，制成250X MUP Plus 原液。应立即使用MUP Plus 原液。

1.2 碱性磷酸酶标准溶液（100 mU / mL）：
加入100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），得到100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。取1,000 mU / mL标准溶液，在H2O-0.1％BSA中进行1:10，得到100 mU / mL标准溶液（AS7）。然后取100 mU / mL标准溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）。注意：应丢弃未使用部分稀释的碱性磷酸酶标准溶液。

3.工作溶液

将20μL250XMUP Plus 储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中，制成碱性磷酸酶工作溶液。注意：避光。为每个实验准备新鲜的碱性磷酸酶工作溶液。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

表1.在实心黑色96孔微孔板中的碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1-100mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	…	…
AS2	AS2	…	…
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释液（0.1至100 mU / mL）
BL	50ul	H₂O – 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸盐测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.2向碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL碱性磷酸酶工作溶液，使总碱性磷酸酶测定体积为100μL/孔。对于384孔板，在每个孔中加入25μL碱性磷酸酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。

1.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm，发射= 450±10nm（截止= 435nm）监测荧光增加。

2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2向每个细胞孔中加入等体积的碱性磷酸酶工作溶液（例如100μL/ 96孔板或50μL/ 384孔板）。注意：或者，从细胞板中取出生长培养基，用5 mL蒸馏水稀释5 mL碱性磷酸酶工作溶液。然后向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的工作溶液。

2.3将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.4用荧光板读数器在激发= 360±10nm，发射= 450±10nm（截止= 435nm）监测荧光增加。

参考文献

Acute oral toxicity and kinetic behaviors of inorganic layered nanoparticles
Authors: Jin Yu, Hea-Eun Chung, Soo-Jin Choi
Journal: Journal of Nanomaterials (2013): 12

An engineering understanding of the small intestine
Authors: Monica Rosalia Jaime Fonseca
Journal: (2012)

Regulation of the osteoblast-specific transcription factor Osterix by NO66, a Jumonji family histone demethylase
Authors: Krishna M Sinha, Hideyo Yasuda, Madelene M Coombes, Sharon YR Dent, Benoit De Crombrugghe
Journal: The EMBO journal (2010): 68–79

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产品名称	货号
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11953
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11954
Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11950

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒绿色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月29日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒绿色荧光价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒绿色荧光

产品参数

Ex (nm)	498	Em (nm)	517
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒 *绿色荧光* 用FDP，一种灵敏的碱性磷酸酶绿色荧光底物来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。本试剂盒提供所有必需组分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒。

点击查看光谱

适用仪器

荧光酶标仪
Ex:	490nm
Em:	525nm
Cutoff:	515nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育10 – 30分钟
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度（Cutfoff = 515 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 FDP（250X）：
将100μLDMSO（组分D）加入到FDP小瓶（组分A）中以制备250X FDF储备溶液。应立即使用FDP储备溶液。

1.2 碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
将100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水加入碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位）中，得到100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，进行1:10（AS7），然后在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）的连续稀释液。

3.工作溶液

将20μL250XFDP储备溶液加入5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。注意：避光。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和实心黑色96孔微孔板中的测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.1至100 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	…	…
AS2	AS2	…	…
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.1至100 mU / mL）
BL	50ul	H₂O – 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。注意：根据需要准备细胞或组织样本。应丢弃未使用的碱性磷酸酶标准品系列稀释液。

1.3将反应在所需温度下孵育10至30分钟，避光。可选：在30分钟孵育结束时，加入50μL/孔（对于96孔板）或25μL/孔（对于384孔板）的终止溶液（组分E）。

1.4用荧光板读数器在激发= 490±10，发射= 525±10nm（截止= 515nm）监测荧光增加。

2.在细胞中运行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。注意：由于生长培养基与FDP的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4向细胞孔中加入100μL（对于96孔板）或50μL（对于384孔板）1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液。

2.5将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。可选：在30分钟孵育结束时加入50μL/孔（对于96孔板）或25μL/孔（对于384孔板）的终止溶液（组分E）。

2.6用荧光板读数器在激发= 490±10，发射= 525±10nm（截止= 515nm）监测荧光增加。

参考文献

Development and validation of bioengineered intestinal tubules for translational research aimed at safety and efficacy testing of drugs and nutrients
Authors: Paulus GM Jochems, Jeroen van Bergenhenegouwen, Anne Metje van Genderen, Sophie T Eis, Livia JF Wilod Versprille, Harry J Wichers, Prescilla V Jeurink, Johan Garssen, Rosalinde Masereeuw
Journal: Toxicology in Vitro (2019)

Rapid detection of Escherichia coli in beverages using genetically engineered bacteriophage T7
Authors: Nicharee Wisuthiphaet, Xu Yang, Glenn M Young, Nitin Nitin
Journal: AMB Express (2019): 55

Acute oral toxicity and kinetic behaviors of inorganic layered nanoparticles
Authors: Jin Yu, Hea-Eun Chung, Soo-Jin Choi
Journal: Journal of Nanomaterials (2013): 12

An engineering understanding of the small intestine
Authors: Monica Rosalia Jaime Fonseca
Journal: (2012)

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产品名称	货号
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11954
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Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月28日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒红色荧光价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒红色荧光

产品参数

Ex (nm)	592	Em (nm)	609
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 荧光法碱性磷酸酶分析试剂盒 *红色荧光* 利用磷酸酶SunRed红色荧光底物的特性，来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。这种磷酸酶荧光底物在磷酸酶催化下产生的荧光产物具有强烈的红色荧光。本试剂盒提供所有必需组分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒。

点击查看光谱

适用仪器

荧光酶标仪
Ex:	620nm
Em:	660nm
Cutoff:	630nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温或37°C孵育30至120分钟
4.监测Ex / Em = 620/660 nm处的荧光强度（截止= 630 nm）

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 SunRed 底物储备液（250X）：
将100μL双无菌H2O加入到SunRed 底物（组分A）的小瓶中，制备250X SunRed 底物储备溶液。应立即使用原液。

1.2碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
添加100μL含0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水至碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位），以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS7-AS1）和H2O-0.1％BSA。

3.工作溶液

对于一个96孔板，将20μL250XSunRed 底物储备溶液加入到5 mL分析缓冲液（组分B）中并充分混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。注意：避免光照并为每个实验准备新鲜的反应混合物。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

表1.碱性磷酸酶标准品和实心黑色96孔微孔板中的测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.3至300 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	…	…
AS2	AS2	…	…
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.3至300 mU / mL）
BL	50ul	H₂O – 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.3在所需温度下将反应温育30至120分钟，避光。

1.4用Ex / Em = 620 / 660nm（截止值= 630nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

2.在细胞中运行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。注意：由于生长培养基与SunRed™底物的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4向每个细胞孔中加入100μL（96孔板）或50μL（384孔板）的1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液。

2.5在所需温度下孵育反应30至60分钟，避光。

2.6用Ex / Em = 620 / 660nm（截止值= 630nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

参考文献

Acute oral toxicity and kinetic behaviors of inorganic layered nanoparticles
Authors: Jin Yu, Hea-Eun Chung, Soo-Jin Choi
Journal: Journal of Nanomaterials (2013): 12

An engineering understanding of the small intestine
Authors: Monica Rosalia Jaime Fonseca
Journal: (2012)

相关产品

产品名称	货号
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11953
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11952
Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11950

Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒生物发光法-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月28日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒生物发光法价格 2823
产品规格

100 Tests

产品货号

Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒生物发光法

产品参数

Ex (nm)	–	Em (nm)	–
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于磷酸酶的试剂盒，碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织,。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA 或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端，并生成一分子的有机基团和一分子的无机磷酸。碱性磷酸酶不是单一的酶，而是一组同功酶。碱性磷酸酶在ELISA、免疫组化，Northern, Southern 和 Western blot分析中有很高的灵敏度。它广泛地用于多种生物学分析（特别是免疫分析）和基于ELISA的疾病诊断。Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒 *生物发光法* 利用碱性磷酸酶底物产生冷光的特性，来定量检测溶液中、细胞抽提液，固相物质表面（例如PVDF膜）的碱性磷酸酶活性。这种磷酸酶荧光底物在磷酸酶催化下产生的荧光产物具有强烈的荧光。本试剂盒提供所有必需组分，包括我们佳的产品组合和分析方法，并且与可用于HTS（高通量筛选）。本试剂盒具有非常高的灵敏度，可用于对灵敏度有要求的分析中。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 碱性磷酸酶检测试剂盒。

适用仪器

发光酶标仪
推荐孔板:	纯白色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备碱性磷酸酶工作溶液（50μL）
2.添加碱性磷酸酶标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.添加分析缓冲液（组分D）（50μL）
5.在室温下孵育10-30分钟
6.监测发光强度

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1碱性磷酸酶标准溶液（100 U / mL）：
将100μL含有0.1％BSA（H2O-0.1％BSA）的蒸馏水加入到碱性磷酸酶标准品（组分C，10单位）的小瓶中，以产生100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液。注意：碱性磷酸酶标准溶液不稳定。

2.标准溶液

碱性磷酸酶标准
将10μL100单位/ mL碱性磷酸酶标准溶液加入990μLH2O-0.1％BSA中，生成1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液。取1,000 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液，在H2O-0.1％BSA中以1：100的比例获得10 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7）。然后取10 mU / mL碱性磷酸酶标准溶液（AS7），在H2O-0.1％BSA中进行1：3连续稀释，得到连续稀释的碱性磷酸酶标准品（AS6-AS1）。注意：应废弃未使用的碱性磷酸酶标准品系列稀释液。

3.工作溶液

将磷酸酶底物（组分A）的全部内容物与反应缓冲液（组分B）混合以制备碱性磷酸酶工作溶液。避光。

点击查看细胞制备指南

样品操作及分析

表1.固体白色96孔微孔板中碱性磷酸酶标准品和测试样品的布局。 AS =碱性磷酸酶标准品（AS1-AS7,0.01至10 mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
AS1	AS1	…	…
AS2	AS2	…	…
AS3	AS3
AS4	AS4
AS5	AS5
AS6	AS6
AS7	AS7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
AS1-AS7	50ul	连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	H₂O – 0.1% BSA
TS	50ul	测试样本

1.在上清液中进行碱性磷酸酶测定：

1.1根据表1和2中提供的布局制备碱性磷酸酶标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

1.3在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

1.4将50μL测定缓冲液（组分D）加入碱性磷酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，用测定反应混合物使总碱性磷酸酶测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每个孔中加入25μL测定缓冲液（组分D），总体积为75μL/孔。

1.5在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

1.6用标准发光板读数器监测发光增加。

2.在细胞中进行碱性磷酸酶测定：

2.1根据需要处理细胞。

2.2从细胞板中完全除去生长培养基。注意：由于生长培养基与磷酸酶底物的干扰，重要的是从细胞板中完全除去生长培养基。

2.3用5mL蒸馏水将1mL稀释的5mL碱性磷酸酶工作溶液稀释。

2.4将100μL（96孔板）或50μL（384孔板）的1：1稀释的碱性磷酸酶工作溶液加入细胞孔中。

2.5将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。

2.6将50μL（96孔板）或25μL（384孔板）的测定缓冲液（组分D）加入含有工作溶液的细胞孔中。

2.7在室温下孵育反应10至30分钟，避光。

2.8用标准发光板读数器监测发光增加。

参考文献

Acute oral toxicity and kinetic behaviors of inorganic layered nanoparticles
Authors: Jin Yu, Hea-Eun Chung, Soo-Jin Choi
Journal: Journal of Nanomaterials (2013): 12

An engineering understanding of the small intestine
Authors: Monica Rosalia Jaime Fonseca
Journal: (2012)

相关产品

产品名称	货号
Amplite 比色法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11950
Amplite 荧光法碱性磷酸酶检测试剂盒	Cat#11953
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Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月28日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒价格 5670
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒

产品参数

Ex (nm)	–	Em (nm)	–
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 比色法β-内酰胺酶活性检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-内酰胺酶活性检测的试剂盒，β-内酰胺酶是能够水解β-内酰胺的大家族酶。β-内酰胺环是所有β-内酰胺中的常见成分，包括青霉素衍生物，头孢菌素，单环内酰胺和碳青霉烯类。通过水解，β-内酰胺酶使β-内酰胺环打开，从而使分子的性能失活。临床和非临床环境中的通过合成β-内酰胺酶变得越来越对β-内酰胺产生抗性。为了克服这种抗性，β-内酰胺通常与β-内酰胺酶抑制剂如克拉维酸一起给予。因此，检测β-内酰胺酶活性对于评估β-内酰胺以及预防抗性至关重要。AAT Bioquest的比色β-内酰胺酶活性测定试剂盒提供灵敏的比色测定，用于测量生物样品中的β-内酰胺酶活性。使用Nitrocefin检测β-内酰胺酶活性，其在β-内酰胺酶水解后由黄色变为红色。可以使用吸光度酶标仪通过测量波长490nm至380nm的OD比来进行测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的β-内酰胺酶活性检测试剂盒。

适用仪器

光吸收酶标仪
吸收：	490/380 nm
推荐孔板:	透明底板

实验方案

96孔板实验示例

概述

准备β-内酰胺酶测定混合物（50μL）

加入β-内酰胺酶标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30-60分钟

在OD比率为490 / 380nm时监测吸光度增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

操作方案

1.制备β-内酰胺酶标准储备液：

将100μLddH2O加入到β-内酰胺酶标准品（组分C）的小瓶中以制备50mU /mLβ-内酰胺酶标准储备溶液。

注意：未使用的β-内酰胺酶标准储备液应分成一次性等分试样并储存在-20oC。

2.准备β-内酰胺酶标准品的连续稀释液：

2.1将10μLβ-内酰胺酶标准储备液（50 mU / mL，步骤1）加入990 L 1×PBS缓冲液中，生成500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液。

注意：稀释的β-内酰胺酶标准溶液不稳定，应及时使用。

2.2取200μL500μU/mLβ-内酰胺酶标准溶液，在PBS中进行1：2连续稀释，得到约250,125,62.5,31.3,15.6,7.8和0μU/ mL系列稀释的β-内酰胺酶标准品。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将含有β-内酰胺酶标准品和含β-内酰胺酶的测试样品的系列稀释液加入到96孔透明底部微量培养板中。

3.准备β-内酰胺酶测定混合物：

将50μL硝基呋喃储备溶液（组分A）加入5mL组分B中，充分混合，制成β-内酰胺酶测定混合物（组分A + B）。

注意：这种β-内酰胺酶测定混合物足以用于一个96孔板。 β-内酰胺酶测定混合物不稳定，每次使用都要新鲜。

4.运行β-内酰胺酶测定：

4.1将50μLβ-内酰胺酶测定混合物（来自步骤3）添加到β-内酰胺酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤2.3），使总体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLβ-内酰胺酶测定混合物。

4.2在室温下孵育反应30-60分钟，避光。

4.3使用吸光度读板仪检测OD比为490/380 nm时的吸光度增加。

参考文献

A nitrocefin-based amperometric assay for the rapid quantification of extended-spectrum beta-lactamase-producing Escherichia coli in wastewaters
Authors: Chantemesse B, Betelli L, Solanas S, Vienney F, Bollache L, Hartmann A, Rochelet M.
Journal: Water Res (2017): 375

Amperometric detection of extended-spectrum beta-lactamase activity: application to the characterization of resistant E. coli strains
Authors: Rochelet M, Solanas S, Betelli L, Neuwirth C, Vienney F, Hartmann A.
Journal: Analyst (2015): 3551

Complete (1)H, (1)(5)N, and (1)(3)C resonance assignments of Bacillus cereus metallo-beta-lactamase and its complex with the inhibitor R-thiomandelic acid
Authors: Karsisiotis AI, Damblon C, Roberts GC.
Journal: Biomol NMR Assign (2014): 313

An altered zinc-binding site confers resistance to a covalent inactivator of New Delhi metallo-beta-lactamase-1 (NDM-1) discovered by high-throughput screening
Authors: Thomas PW, Spicer T, Cammarata M, Brodbelt JS, Hodder P, Fast W.
Journal: Bioorg Med Chem (2013): 3138

Evaluation of phenotypic tests for the detection of AmpC beta-lactamase in clinical isolates of Escherichia coli
Authors: Handa D, Pandey A, Asthana AK, Rawat A, Handa S, Thakuria B.
Journal: Indian J Pathol Microbiol (2013): 135

Horizontal Transfer of Antimicrobial Resistance by Extended-Spectrum beta Lactamase-Producing Enterobacteriaceae
Authors: Vaidya VK.
Journal: J Lab Physicians (2011): 37

Prevalence of bla (CTX M) extended spectrum beta lactamase gene in enterobacteriaceae from critical care patients
Authors: Priyadharsini RI, Kavitha A, Rajan R, Mathavi S, Rajesh KR.
Journal: J Lab Physicians (2011): 80

Virtual screening of AmpC/beta-lactamase as target for antimicrobial resistance in Pseudomonas aeruginosa
Authors: Farmer R, Gautam B, Singh S, Yadav PK, Jain PA.
Journal: Bioinformation (2010): 290

A sensitive coupled HPLC/electrospray mass spectrometry assay for SPM-1 metallo-beta-lactamase inhibitors
Authors: Sanchez PA, Toney JH, Thomas JD, Berger JM.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2009): 170

Fine mapping of the sequence requirements for binding of beta-lactamase inhibitory protein (BLIP) to TEM-1 beta-lactamase using a genetic screen for BLIP function
Authors: Yuan J, Huang W, Chow DC, Palzkill T.
Journal: J Mol Biol (2009): 401

Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒蓝色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于2024年4月28日由上海金畔生物科技有限公司

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Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒蓝色荧光

产品参数

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分子量	–	溶剂	–
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产品概述

Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于β-半乳糖苷酶的试剂盒，神经氨酸酶，也称为唾液酸酶，是糖苷水解酶，其催化末端唾液酸残基和神经氨酸的水解。常见的神经氨酸酶是病毒神经氨酸酶。唾液酸和邻近糖残基之间的连接的切割允许病毒通过粘蛋白转运并破坏宿主细胞上的血凝素受体，从而允许从感染细胞中洗脱后代病毒颗粒。神经氨酸酶促进感染细胞释放流感病毒，并促进病毒在呼吸道内传播。因此，它是流感开发的重要目标。神经氨酸酶的检测和筛选其抑制剂是研究生物过程和预防流感感染的重要任务之一。有一些检测试剂盒可用于检测神经氨酸酶，但所有商业上可用的试剂盒使用起来都很繁琐。我们的Amplite 荧光神经氨酸酶检测试剂盒提供灵敏且稳定的荧光测定法，可检测细胞或生物样品中存在的神经氨酸酶。在神经氨酸酶切割后，非荧光神经氨酸酶底物变为强荧光。该试剂盒可在100μL测定体积中检测低至0.3 mU / mL的神经氨酸酶。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。荧光酶标仪在Ex / Em = ~320 / ~450nm处可以容易地读取信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法神经氨酸酶检测试剂盒。

适用仪器

荧光酶标仪
Ex：	320 nm
Em:	460 nm
Cutoff:	420 nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备神经氨酸酶工作溶液（50 µL）
2.加入神经氨酸酶标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C或室温下孵育1-2小时
4.监控Ex / Em = 320/460 nm（截止= 420 nm）的荧光增加

溶液制备

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免重复冻融循环。
1.1 神经氨酸酶标准溶液（2U / mL）：
将50 µL ddH₂O加入小瓶神经氨酸酶标准品（组分C）中，制成约2 U / mL神经氨酸酶标准溶液。

1.2 FluLite 蓝色原液（200X）：
将50 µL ddH₂O加入FluLite Blue（组分A）小瓶中，制成200X储备溶液。

2.标准溶液

神经氨酸酶标准品
将10 µL的2 U / mL神经氨酸酶标准储备液加到990 µL的测定缓冲液（组分B）中，以生成20 mU / mL的神经氨酸酶标准品（NA7）。取20 mU / mL神经氨酸酶标准溶液，并按1：2进行系列稀释，以使用分析缓冲液（组分B）获得系列稀释的神经氨酸酶标准品（NA6-NA1）。注意：稀释的神经氨酸酶标准溶液不稳定。在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 0.3％β-巯基乙醇测定缓冲液：
将30 µLβ-巯基乙醇（组分F）添加到10 mL反应缓冲液（组分B）中，并充分混合。
注意：制备酶稀释缓冲液需要额外的缓冲液，用于生成标准曲线。

3.2 FDG工作方案：
将25 µL 1X FDG储备溶液加到5 mL的0.3％β-巯基乙醇测定缓冲液中。注意：请勿将FDG溶液在室温下长时间放置，否则会发生自发水解。

3.3 裂解缓冲液工作液：
将25μL的200X FluLite 蓝色储备溶液添加到5 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合以制备神经氨酸酶工作溶液。

样品操作及分析

表1.黑色固体96孔微孔板中神经氨酸酶标准品和测试样品的布局。 NA =神经氨酸酶标准品（NA1-NA7，0.312至20 mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
NA1	NA1	…	…
NA2	NA2	…	…
NA3	NA3
NA4	NA4
NA5	NA5
NA6	NA6
NA7	NA7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
NA1-NA7	50ul	连续稀释（0.312至20 mU / mL）
BL	50ul	空白对照
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局，准备神经氨酸酶标准品（NA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向神经氨酸酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50μL神经氨酸酶工作溶液，以使神经氨酸酶测定的总体积为100μL/孔。对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL神经氨酸酶工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光的条件下，将反应在37°C或室温下孵育1至2小时。注意：37°C孵育可获得更好的结果。

4.用荧光酶标仪监测在Ex / Em = 320/460 nm（截止= 420 nm）处的荧光增加。

参考文献

Neuraminidase inhibiting antibody responses in pigs differ between influenza A virus N2 lineages and by vaccine type
Authors: Sandbulte MR, Gauger PC, Kitikoon P, Chen H, Perez DR, Roth JA, Vincent AL.
Journal: Vaccine (2016): 3773

Rapid screening, identification, and purification of neuraminidase inhibitors from Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc. by ultrafiltration with HPLC-ESI-TOF-MS combined with semipreparative HPLC
Authors: Zhang M, Zhao H, Zhao Z, Yan H, Lv R, Cui L, Yuan J, Wang D, Geng Y, Liu D, Wang X.
Journal: J Sep Sci (2016): 2097

Development of a surface plasmon resonance assay to measure the binding affinity of wild-type influenza neuraminidase and its H274Y mutant to the antiviral drug zanamivir
Authors: Somasundaram B, Fee CJ, Fredericks R, Watson AJ, Fairbanks AJ.
Journal: J Mol Recognit (2015): 87

[Susceptibility of human influenza A (H3N2) viruses to neuraminidase inhibitors isolated during 2011-2012 in China]
Authors: Huang W, Tan M, Zhao X, Cheng Y, Li X, Guo J, Wei H, Xiao N, Wang Z, Wang D, Shu Y.
Journal: Zhonghua Yu Fang Yi Xue Za Zhi (2015): 481

Evaluation of the antigenic relatedness and cross-protective immunity of the neuraminidase between human influenza A (H1N1) virus and highly pathogenic avian influenza A (H5N1) virus
Authors: Lu X, Liu F, Zeng H, Sheu T, Achenbach JE, Veguilla V, Gubareva LV, Garten R, Smith C, Yang H, Stevens J, Xu X, Katz JM, Tumpey TM.
Journal: Virology (2014): 169

Neuraminidase-inhibition assay for the identification of influenza A virus neuraminidase virus subtype or neuraminidase antibody specificity
Authors: Pedersen JC.
Journal: Methods Mol Biol (2014): 27

Partial antiviral activities detection of chicken Mx jointing with neuraminidase gene (NA) against Newcastle disease virus
Authors: Zhang Y, Fu D, Chen H, Zhang Z, Shi Q, Elsayed AK, Li B.
Journal: PLoS One (2013): e71688

Preparation and diagnostic utility of a hemagglutination inhibition test antigen derived from the baculovirus-expressed hemagglutinin-neuraminidase protein gene of Newcastle disease virus
Authors: Choi KS, Kye SJ, Jeon WJ, Park MJ, Kim S, Seul HJ, Kwon JH.
Journal: J Vet Sci (2013): 291

[Evaluation of the anti-neuraminidase antibodies in clinical trials of the live influenza vaccine of the A(H5N2) subtype]
Authors: Smolonogina TA, Desheva Iu A, Rekstin AR, Mironov AN, Rudenko LG.
Journal: Vopr Virusol (2013): 31

The chemiluminescent neuraminidase inhibition assay: a functional method for detection of influenza virus resistance to the neuraminidase inhibitors
Authors: Okomo-Adhiambo M, Hurt AC, Gubareva LV.
Journal: Methods Mol Biol (2012): 95

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Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒绿色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒绿色荧光

产品参数

Ex (nm)	500	Em (nm)	522
分子量	–	溶剂	–
存储条件	–

产品概述

Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的蛋白酶检测试剂盒，蛋白酶体的主要功能是通过蛋白水解（一种破坏肽键的化学反应）降解不需要的或受损的蛋白质。蛋白酶体降解途径对于许多细胞过程是必不可少的，包括细胞周期，基因表达的调节和对氧化应激的反应。该途径中常见的蛋白酶体形式是蛋白酶体26S，一种ATP依赖性蛋白水解复合物，其含有一个20S（700-kDa）核心颗粒结构和两个19S（700-kDa）调节帽。20S核心包含三种主要的蛋白水解活性，包括胰凝乳蛋白酶样，胰蛋白酶样和半胱天冬酶样活性。它负责细胞凋亡，DNA修复，内吞作用和细胞周期控制所涉及的关键蛋白的分解。

我们的Amplite 荧光蛋白酶体20S分析试剂盒是一种均相荧光分析，可测量与培养细胞中蛋白酶体复合物相关的胰凝乳蛋白酶样蛋白酶活性。该试剂盒使用LLVY-R110作为蛋白酶体活性的荧光指示剂。蛋白酶体对LLVY-R110的切割产生强绿色荧光R110，其在520-530nm下荧光监测，激发波长为480-500nm。该试剂盒为所有必需组分提供优化的分析方案。该测定是稳定的，并且容易适用于高通量测定以评估蛋白酶体活性或筛选培养细胞或溶液中的抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法蛋白酶体20S活性检测试剂盒。

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适用仪器

荧光酶标仪
Ex:	490nm
Em:	520nm
Cutoff:	515nm
推荐孔板:	纯黑色孔板
读取模式:	顶读模式

实验方案

检测方案

概述

用测试化合物（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

制备细胞加入等体积的蛋白酶体测定溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）

在37°C或室温下孵育至少1小时

检测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度

溶液配制

储备溶液配制

蛋白酶体 LLVY-R110 底物原液 (400X)

将 25 µL DMSO（组分 C）添加到 Proteasome LLVY-R110 底物（组分 A）小瓶中，并充分混合以制备 400X Proteasome LLVY-R110 底物原液。

工作溶液配制

将 25 μL 400X Proteasome LLVY-R110 底物储备液添加到 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，并充分混合，制成蛋白酶体工作溶液。注意：此蛋白酶体工作溶液足以用于 1 个板。避光。

操作方案

1.用 PBS 或所需缓冲液中的 10 µL 10X 测试化合物（对于 96 孔板）或 5 µL 5X 测试化合物（对于 384 孔板）处理细胞。对于空白孔（不含细胞的培养基），添加相应量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在 5% CO2、37°C 培养箱中孵育所需的时间。注：纯蛋白酶体或细胞裂解物可直接用于筛选蛋白酶体抑制剂。

3.添加 100 µL/孔（96 孔板）或 25 µL/孔（384 孔板）蛋白酶体工作溶液。

4.将板在 37°C 避光孵育至少 1 小时（2 小时至过夜）。注意：每个细胞系应单独评估以确定最佳孵育时间。

5.检测 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff = 515 nm）处的荧光强度（顶部读数）。

参考文献

Melatonin Promotes Ubiquitination of Phosphorylated Pro-Apoptotic Protein Bcl-2-Interacting Mediator of Cell Death-Extra Long (BimEL) in Porcine Granulosa Cells
Authors: Yingzheng Wang, Shenming Zeng
Journal: International journal of molecular sciences (2018): 3431

Mycobacterium tuberculosis Controls Phagosomal Acidification by Targeting CISH-Mediated Signaling
Authors: Christophe J Queval, Ok-Ryul Song, Jean-Philippe Carralot, Jean-Michel Saliou, Antonino Bongiovanni, Gaspard Deloison, Nathalie Deboosère, Samuel Jouny, Raffaella Iantomasi, Vincent Delorme
Journal: Cell Reports (2017): 3188–3198

Autophagy-mediated clearance of ubiquitinated mutant huntingtin by graphene oxide
Authors: Peipei Jin, Pengfei Wei, Yunjiao Zhang, Jun Lin, Rui Sha, Yi Hu, Jiqian Zhang, Wei Zhou, Han Yao, Li Ren
Journal: Nanoscale (2016)

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Journal: Molecular and Cellular Biology (2016): MCB–00419

L-BMAA induced ER stress and enhanced caspase 12 cleavage in human neuroblastoma SH-SY5Y cells at low nonexcitotoxic concentrations
Authors: Oliver Okle, Kerstin Stemmer, Ulrich Deschl, Daniel R Dietrich
Journal: toxicological sciences (2013): 217–224

Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒绿色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒绿色荧光价格 2823
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500 Tests

产品货号

Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒绿色荧光

产品参数

Ex (nm)	491	Em (nm)	516
分子量	–	溶剂	DMSO
存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照

产品概述

蛋白酶测定法广泛用于蛋白酶抑制剂的研究和蛋白酶活性的检测。监测各种蛋白酶活性已成为许多生物实验室的常规任务。一些蛋白酶已被确定为良好的开发目标。

我们的Amplite 通用荧光蛋白酶活性检测试剂盒是进行常规检测分离蛋白酶或鉴定蛋白质样品中污染蛋白酶的理想选择。该试剂盒使用荧光酪蛋白偶联物，其被证明是广谱蛋白酶（例如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和弹性蛋白酶）的通用底物。在完整的底物中，酪蛋白用绿色荧光染料严重标记，导致显着的荧光猝灭。蛋白酶催化的水解减轻了其猝灭效应，产生明亮的荧光染料标记的短肽。荧光强度的增加与蛋白酶活性成正比。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。使用FITC滤光片组，可以使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490/525 nm下轻松读取其信号。

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适用仪器

荧光酶标仪
Ex:	490nm
Em:	525nm
Cutoff:	515nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

实验方案

一个96孔板的测定方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

概述（方案A）

检测样品中的蛋白酶活性

准备蛋白酶底物溶液 (50 µL)

添加底物对照、阳性对照或测试样品 (50 µL)

跳过孵育以进行动力学读数或孵育 30 至 60 分钟以进行终点读数

在 Ex/Em = 490/525 nm 处检测荧光强度

概述（方案B）

使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

准备蛋白酶底物溶液 (10 µL)

添加底物对照、阳性对照、载体对照或测试样品 (90 µL)

跳过孵育以进行动力学读数或孵育 30 至 60 分钟以进行终点读数

在 Ex/Em = 490/525 nm 处检测荧光强度

工作溶液配制

1. 蛋白酶底物溶液（用于方案 A）

在 2X 检测缓冲液（组分 C）中以 1:100 的比例稀释蛋白酶底物（组分 A）。在 96 孔板中，每次测定使用 50 μL 的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 检测缓冲液（组分 C）设计用于检测糜蛋白酶、胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人类白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅下表 1 以了解适当的测定缓冲液配方。

2. 胰蛋白酶稀释（用于方案 A）

在去离子水中以 1:50 的比例稀释胰蛋白酶（5 U/µL，组分 B），以获得 0.1 U/µL 的浓度。

3. 检测缓冲液 (1X)（用于方案 B）

将 5 mL 去离子水加入 5 mL 的 2X 检测缓冲液（组分 C）中。

4. 蛋白酶底物溶液（用于方案 B）

在 1X 检测缓冲液中以 1:20 稀释蛋白酶底物（组分 A）。对 96 孔板使用 10 μL/孔的蛋白酶底物溶液。
注意：2X 测定缓冲液（组分 C）设计用于检测糜蛋白酶、胰蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、蛋白酶 K、蛋白酶 XIV 和人类白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅下表 1 以了解适当的测定缓冲液配方。

5. 蛋白酶稀释（用于方案 B）

将 1X 检测缓冲液中的蛋白酶稀释至 500-1000 nM 的浓度（对于胰蛋白酶 50-100 U/mL）。每孔需要 10 μL 的蛋白酶稀释液。为所有测试样品准备适当的量，为阳性对照和载体对照孔准备额外的量。

表1.蛋白酶的检测缓冲液配方。对于方案 A，需要 2X 检测缓冲液。对于方案 B，需要 1X 检测缓冲液。

蛋白酶	1X 检测缓冲液
组织蛋白酶D	20 mM 柠檬酸钠，pH 3.0
木瓜蛋白酶	20 mM 乙酸钠、20 mM 半胱氨酸、2 mM EDTA，pH 6.5
PAE	20 mM 磷酸钠，pH 8.0
胃蛋白酶	10 mM 盐酸，pH 2.0
猪胰腺弹性蛋白酶	10 mM Tris-HCl，pH 8.8
枯草杆菌蛋白酶	20 mM 磷酸钾缓冲液，pH 7.6，150 mM NaCl

方案二：使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

概述

准备蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物对照，阳性对照，载体对照或测试样品（90μL）

孵育0分钟（用于动力学读数）或30分钟-1小时（用于终点读数）

监测Ex的荧光强度 / Em = 490 / 525nm

操作方法

方案 A：检测样品中的蛋白酶活性

表2. 96 孔板中底物对照、阳性对照和测试样品的布局。SC=底物对照，PC=阳性对照，TS=测试样品。

SC	SC	…	…
PC	PC	…	…
TS	TS
…	…

表3.每孔的试剂组成。如果使用少于 50 µL 的蛋白酶生物样品，添加 ddH₂O 使总体积为 50 µL。

孔	体积	试剂
SC	50 µL	去离子水
PC	50 µL	胰蛋白酶稀释液
TS	50 µL	含蛋白酶溶液

1.在测定板的所有孔中加入 50 μL 的蛋白酶底物溶液（方案A）。充分混合试剂。

2.在Ex/Em = 490/525 nm 处使用荧光酶标仪检测荧光。 对于动力学读数：立即开始连续测量荧光强度并每 5 分钟记录一次数据，持续 30 分钟。 对于终点读数：在所需温度下孵育反应 30 至 60 分钟，避光。然后测量荧光强度。

方案 B：使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

表4. 96 孔微孔板中样品的布局。SC=底物对照，PC=阳性对照，VC=载体对照，TS=测试样品。建议测试每种测试化合物的至少三种不同浓度。所有测试样品应一式两份或一式三份进行。

SC	SC	…	…
PC	PC	…	…
VC	VC
TS	TS
…	…

表5.每孔的试剂组成。对于添加到孔中的每一体积的测试化合物，需要检查用于递送测试化合物的相同体积的溶剂以了解载体对蛋白酶活性的影响。

孔	体积	试剂
SC	90 µL	检测缓冲液 (1X) (90 µL)
PC	90 µL	检测缓冲液 (1X) (80 µL) 蛋白酶稀释液 (10 µL)
VC	90 µL	载体 (X µL) 检测缓冲液 (80 – X µL) 蛋白酶稀释 (10 µL)
TS	90 µL	测试化合物 (X µL) 检测缓冲液 (1X) (80 – X µL) 蛋白酶稀释液 (10 µL)

1.在阳性对照 (PC)、对照 (VC) 和测试样品 (TS) 的孔中加入 10 μL 的蛋白酶底物溶液（方案B）。充分混合试剂。

2.在 Ex/Em = 490 /525 nm 处使用荧光酶标仪检测荧光强度。 对于动力学读数：立即开始连续测量荧光强度并每 5 分钟记录一次数据，持续 30 分钟。 对于终点读数：在所需温度下孵育反应 30 至 60 分钟，避光。然后测量荧光强度。

参考文献

IL-33, IL-25 and TSLP contribute to development of fungal-associated protease-induced innate-type airway inflammation
Authors: Yoshihisa Hiraishi, Sachiko Yamaguchi, Takamichi Yoshizaki, Aya Nambu, Eri Shimura, Ayako Takamori, Seiko Narushima, Wakako Nakanishi, Yosuke Asada, Takafumi Numata
Journal: Scientific reports (2018): 18052

Tranexamic acid blocks the thrombin-mediated delay of epidermal permeability barrier recovery induced by the cedar pollen allergen, Cry j1
Authors: S Nakanishi, J Kumamoto, M Denda
Journal: Scientific reports (2018): 15610

Eosinophil extracellular trap cell death–derived DNA traps: Their presence in secretions and functional attributes
Authors: Shigeharu Ueki, Yasunori Konno, Masahide Takeda, Yuki Moritoki, Makoto Hirokawa, Yoshinori Matsuwaki, Kohei Honda, Nobuo Ohta, Shiori Yamamoto, Yuri Takagi
Journal: Journal of Allergy and Clinical Immunology (2016): 258–267

Japanese Cedar (Cryptomeria japonica) pollen allergen induces elevation of intracellular calcium in human keratinocytes and impairs epidermal barrier function of human skin ex vivo
Authors: Junichi Kumamoto, Moe Tsutsumi, Makiko Goto, Masaharu Nagayama, Mitsuhiro Denda
Journal: Archives of dermatological research (2016): 49–54

Impact of silk biomaterial structure on proteolysis
Authors: Joseph Brown, Chia-Li Lu, Jeannine Coburn, David L Kaplan
Journal: Acta biomaterialia (2015): 212–221

Incorporation of proteinase inhibitors into silk-based delivery devices for enhanced control of degradation and drug release
Authors: Eleanor M Pritchard, Thomas Valentin, Detlev Boison, David L Kaplan
Journal: Biomaterials (2011): 909–918

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