标签归档：膜电位

膜电位荧光探针Di-8-ANEPPS CAS 157134-53-7-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
膜电位荧光探针Di-8-ANEPPS CAS 157134-53-7价格 2823
产品规格

5 mg

产品货号

膜电位荧光探针Di-8-ANEPPS CAS 157134-53-7

产品参数
Ex (nm) 467 Em (nm) 631
分子量 592.88 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：膜电位荧光探针Di-8-ANEPPS

CAS：157134-53-7

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：592.88

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：498

发射波长（nm）：513

 

产品介绍

膜电位荧光探针Di-8-ANEPPS是美国AAT Bioquest生产的用于开发荧光生物共轭物的荧光染料。Di-8-ANEPPS广泛用于监测快速膜电位变化。ANEP染料属于快速响应膜电位染料的类别。它们的光学响应足够快以检测可兴奋细胞中的瞬时膜电位变化，其中它们表现出激发光谱中膜电位依赖性的变化。该特征允许通过激发比测量膜电位变化。这些染料在水性介质中是弱荧光的，并且在与亲脂性环境（例如膜）结合后变得强烈发荧光。与其他ANEP染料相比，Di-8-ANEPPS对细胞内化的敏感性可能低于其磺酸盐基团。通常，快速响应探针通过改变其电子结构，从而改变其荧光特性，响应周围电场的变化。它们的光学响应足够快，可以检测可兴奋细胞的瞬时（毫秒）电位变化，包括单个神经元，心肌细胞和完整的大脑。然而，它们的电位依赖性荧光变化的幅度通常很小; 快速响应探针通常显示每100mV 2-10％的荧光变化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的膜电位荧光探针Di-8-ANEPPS。 

点击查看光谱

 

参考文献

Cholesterol is required for maintaining T-tubule integrity and intercellular connections at intercalated discs in cardiomyocytes
Authors: Yanqi Zhu, Caimei Zhang, Biyi Chen, Rong Chen, Ang Guo, Jiang Hong, Long-Sheng Song
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 204–212

膜电位荧光探针Di-4-ANEPPS CAS 90134-00-2-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
膜电位荧光探针Di-4-ANEPPS CAS 90134-00-2价格 2823
产品规格

5 mg

产品货号

膜电位荧光探针Di-4-ANEPPS CAS 90134-00-2

产品参数
Ex (nm) 482 Em (nm) 686
分子量 480.66 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

产品基本信息

产品名称：膜电位荧光探针Di-4-ANEPPS

CAS：90134-00-2

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量：480.66

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：497

发射波长（nm）：705

 

产品介绍

膜电位荧光探针Di-4-ANEPPS是美国AAT Bioquest生产的用于膜电位的荧光探针。电位敏感的ANEP染料是两性离子分子，在不同的细胞和组织类型中表现出一致的电位响应。可以通过将原液直接添加到细胞培养基中，使用Pluronic®F-127或通过逆行标记将它们引入细胞。ANEP染料在结合到膜之前是不发荧光的，并且它们对周围环境中的电势变化的荧光响应。ANEP染料是一种快速响应的探针，通过响应周围电场的变化，通过改变其电子结构并因此改变其荧光性质来工作。它们的光学响应足够快，可以检测到兴奋性细胞（包括单个神经元，心脏细胞和完整的大脑）中的瞬态（毫秒）电势变化。然而，它们的电位依赖性荧光变化的幅度通常很小；快速响应探针通常每100 mV显示2-10％的荧光变化。此外，这些染料在其激发光谱中显示出电位依赖性变化，因此可以使用激发比测量定量膜电位。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的膜电位荧光探针Di-4-ANEPPS。 

点击查看光谱

 

参考文献

The voltage-sensitive dye di-4-ANEPPS slows conduction velocity in isolated guinea pig hearts
Authors: Larsen AP, Sciuto KJ, Moreno AP, Poelzing S.
Journal: Heart Rhythm (2012): 1493

A novel approach to dual excitation ratiometric optical mapping of cardiac action potentials with di-4-ANEPPS using pulsed LED excitation
Authors: Bachtel AD, Gray RA, Stohlman JM, Bourgeois EB, Pollard AE, Rogers JM.
Journal: IEEE Trans Biomed Eng (2011): 2120

Potential-modulated fluorescence spectroscopy of the membrane potential-sensitive dye di-4-ANEPPS at the 1,2-dichloroethane/water interface
Authors: Osakai T, Sawada J, Nagatani H.
Journal: Anal Bioanal Chem (2009): 1055

Validation of a voltage-sensitive dye (di-4-ANEPPS)-based method for assessing drug-induced delayed repolarisation in beagle dog left ventricular midmyocardial myocytes
Authors: Hardy ME, Pollard CE, Small BG, Bridgland-Taylor M, Woods AJ, Valentin JP, Abi-Gerges N.
Journal: J Pharmacol Toxicol Methods (2009): 94

Effects of voltage sensitive dye di-4-ANEPPS on guinea pig and rabbit myocardium
Authors: Novakova M, Bardonova J, Provaznik I, Taborska E, Bochorakova H, Paulova H, Horky D.
Journal: Gen Physiol Biophys (2008): 45

[Spectral study of voltage sensitive dye di-4-ANEPPS]
Authors: Xu ZH, Zhang ZX, Wang J, Zhang H, Li Z, Jin YS, Ding HY.
Journal: Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi (2007): 1359

Two-photon excitation of di-4-ANEPPS for optical recording of action potentials in rabbit heart
Authors: Dumas JH, 3rd, Knisley SB.
Journal: Ann Biomed Eng (2005): 1802

Quantification of optical signals with electrophysiological signals in neural activities of Di-4-ANEPPS stained rat hippocampal slices
Authors: Tominaga T, Tominaga Y, Yamada H, Matsumoto G, Ichikawa M.
Journal: J Neurosci Methods (2000): 11

Errors caused by combination of Di-4 ANEPPS and Fluo3/4 for simultaneous measurements of transmembrane potentials and intracellular calcium
Authors: Johnson PL, Smith W, Baynham TC, Knisley SB.
Journal: Ann Biomed Eng (1999): 563

Measurement of membrane potential in Saccharomyces cerevisiae by the electrochromic probe di-4-ANEPPS: effect of intracellular probe distribution
Authors: Chaloupka R, Plasek J, Slavik J, Siglerova V, Sigler K.
Journal: Folia Microbiol (Praha) (1997): 451

线粒体膜电位荧光探针JC-1 CAS 3520-43-2-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
线粒体膜电位荧光探针JC-1 CAS 3520-43-2价格 1386
产品规格

5 mg

产品货号

线粒体膜电位荧光探针JC-1 CAS 3520-43-2

产品参数
Ex (nm) 515 Em (nm) 530
分子量 652.23 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

线粒体膜电位荧光探针JC-1是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂，JC-1广泛用于通过流式细胞术确定线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体，并且随着线粒体膜电位增加（超过约80-100mV的值）可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于线粒体膜极化后JC-1聚集体的可逆形式导致发射光从530nm（即JC-1单体形式的发射）转变为590nm（即J-聚集形式的发射）。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-1的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的滤波器可以检测两种颜色，可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。使用JC-1的主要优点是，它可以从绿色到橙色荧光发射转移，它既可以定性，又可以在FL1和FL2通道中检测到纯荧光强度又可以定量。除了广泛用于流式细胞仪外，JC-1还用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光酶标仪平台中使用它的方案，尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。我们的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些细胞系中具有优于JC-1的性能。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的线粒体膜电位荧光探针。

点击查看光谱

 

适用仪器

流式细胞仪  
Ex: 488 nm
Em： 530/30 nm, 575/26 nm
通道: FITC, PE通道

 

荧光显微镜
Ex: 490 nm
Em： 525 nm（比率分析为 590 nm）
推荐孔板: 黑色透明底板
通道： FITC 和 TRITC通道

 

荧光酶标仪

  
Ex: 490 nm
Em： 525 nm（比率分析为 590 nm）
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

JC-1样品分析方案

概述

用测试化合物制备细胞

添加JC-1工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）在室温或37℃孵育1小时

移除JC-1工作溶液

读取 Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光强度

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。该方案仅提供指南，实际情况应根据您的具体实验进行调整修改。

 

1.准备JC-1工作溶液：

1.1在高质量无水DMSO中制备2至10 mM JC-1的储备液。 应随用随配及时使用或等分配制，应将使用剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。

注意：避免反复冻融循环，避免光照。

1.2制备1X JC-1工作溶液：在实验当天，将JC-1固体溶解在DMSO中或将等分试样的JC-1储备溶液解冻至室温。在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或其他缓冲液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制备10至30μM1XJC-1工作溶液。

注意：JC-1不溶于水，因此它会在溶液中聚集。 建议在将JC-1工作溶液加载到微孔板之前对其进行过滤。

 

2.用荧光酶标仪进行JC-1检测：

2.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔板的JC-1工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-1加载在37℃，5％CO2培养箱中培养15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度，每个实验的孵育时间需要根据相应实验进行控制。

2.4从平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或其他缓冲液清洗细胞。 将100μL/孔的96孔板或25μL/孔的384孔HHBS板加回到细胞板中。

2.5监测Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化以进行比率分析。

 

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-1测定：

3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。

3.3在500μLJC-1工作溶液中重悬细胞（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C下避光孵育10至30分钟。

3.5用HHBS或其他缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬于500μLHHBS中以获得每管1-5×105个细胞。

3.6用荧光显微镜（使用FITC和TRITC滤光片）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）观察Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm处的荧光变化。

 

参考文献

Cell death mechanisms of the anti-cancer drug etoposide on human cardiomyocytes isolated from pluripotent stem cells
Authors: Harshal Nemade, Umesh Chaudhari, Aviseka Acharya, Jürgen Hescheler, Jan Georg Hengstler, Symeon Papadopoulos, Agapios Sachinidis
Journal: Archives of Toxicology (2018): 1–18

Mesenchymal stem cells ameliorate hyperglycemia-induced endothelial injury through modulation of mitophagy
Authors: Wuzheng Zhu, Yujia Yuan, Guangneng Liao, Lan Li, Jingping Liu, Younan Chen, Jie Zhang, Jingqiu Cheng, Yanrong Lu
Journal: Cell Death & Disease (2018): 837

overexpression of protocadherin 7 inhibits neuronal survival by downregulating Birc5 in vitro
Authors: Huajuan Xiao, Ziling Sun, Jun Wan, Shengtao Hou, Yi Xiong
Journal: Experimental cell research (2018): 71–80

Therapeutic potential of GSK-J4, a histone demethylase KDM6B/JMJD3 inhibitor, for acute myeloid leukemia
Authors: Yunan Li, Mingying Zhang, Mengyao Sheng, Peng Zhang, Zizhen Chen, Wen Xing, Jie Bai, Tao Cheng, Feng-Chun Yang, Yuan Zhou
Journal: Journal of Cancer Research and Clinical Oncology (2018): 1–13

Hyaluronan polymeric micelles for topical drug delivery
Authors: Daniela Smejkalová, Tomáš Muthny, Kristina Nešporová, Martina Hermannová, Eva Achbergerová, Gloria Huerta-Angeles, Marek Svoboda, Martin Cepa, Veronika Machalová, Dominika Luptáková
Journal: Carbohydrate Polymers (2017): 86–96

New ruthenium compounds bearing semicarbazone 2-formylopyridine moiety: Playing with auxiliary ligands for tuning the mechanism of biological activity
Authors: Michal Lomzik, Olga Mazuryk, Dorota Rutkowska-Zbik, Grazyna Stochel, Philippe C Gros, Malgorzata Brindell
Journal: Journal of Inorganic Biochemistry (2017)

Inhibition of mTOR’s Catalytic Site by PKI-587 Is a Promising Therapeutic Option for Gastroenteropancreatic Neuroendocrine Tumor Disease
Authors: Helma Freitag, Friederike Christen, Florentine Lewens, Irina Grass, Franziska Briest, Sara Iwaszkiewicz, Britta Siegmund, Patricia Grabowski
Journal: Neuroendocrinology (2016)

Mesenchymal Stem Cells-Conditioned Media Ameliorates Diabetic Endothelial dysfunction by Improving Mitochondrial Bioenergetics via the Sirt1/AMPK/PGC-1α Pathway
Authors: Yujia Yuan, Meimei Shi, Lan Li, Jingping Liu, Bo Chen, Younan Chen, Xingxing An, Shuyun Liu, Ruixi Luo, Dan Long
Journal: Clinical Science (2016): CS20160235

mTOR complex-2 stimulates acetyl-CoA and de novo lipogenesis through ATP citrate lyase in HER2/PIK3CA-hyperactive breast cancer
Authors: Yaqing Chen, Jianchang Qian, Qun He, Hui Zhao, Lourdes Toral-Barza, Celine Shi, Xuesai Zhang, Jiang Wu, Ker Yu
Journal: Oncotarget (2016): 25224–25240

Multiple Active Compounds from Viscum album L. Synergistically Converge to Promote Apoptosis in Ewing Sarcoma
Authors: Monika Twardziok, Susann Kleinsimon, Jana Rolff, Sebastian Jäger, Angelika Eggert, Georg Seifert, Catharina I Delebinski
Journal: PloS one (2016): e0159749

线粒体膜电位荧光探针JC-10 JC-1的卓越代替品-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
线粒体膜电位荧光探针JC-10 JC-1的卓越代替品价格 1386
产品规格

5×100 uL

产品货号

线粒体膜电位荧光探针JC-10 JC-1的卓越代替品

产品参数
Ex (nm) 508 Em (nm) 524
分子量 583.34 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

线粒体膜电位荧光探针JC-10是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的荧光探针是JC-1的替代品。JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10已被开发为JC-1的替代物。与JC-1相比，我们的JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）转变为570nm（即J-聚集体形式的发射）。当在490nm激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，JC-10还可用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微孔板平台中使用JC-10的方案。在一些细胞系中，JC-10具有优于JC-1的性能。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的线粒体膜电位荧光探针。

点击查看光谱

实验方案

JC-10的分析方案

概述

准备含有测试化合物的细胞

添加JC-10工作溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）

在室温或37 ℃孵育1小时

在Ex读取荧光强度 / Em = 490 / 525nm和540 / 590nm

注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。

 

操作步骤

1.准备JC-10工作溶液：

1.1每瓶DMSO原液（100μL，2 mg / mL，3 mM）只能使用一次。任何未使用的小瓶应储存在<-20℃。注意：避免反复冻融循环，并避光.

1.2准备1X JC-10工作溶液：在实验当天，解冻一份JC-10 stockolution到室温。在Hanks和20 mM Hepesbuffer（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7-8，含0.02％Pluronic F-127）中制备10至30μM1X工作溶液。通过votexing将它们混合均匀。注意：对于某些细胞系，pH值为8的工作溶液可能会阻止JC-10泄漏。

2.用荧光酶标仪进行JC-10检测：

2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。

2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-10工作溶液（来自步骤1.2）加入到细胞板中。

2.3将JC-10加载板在37 oC，5％CO2培养箱中孵育15-60分钟。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.4监测Ex / Em = 490/525 nm（FITC通道）和540/590 nm（TRITC通道）的荧光变化，进行比率分析。

可选：从板上取下JC-10工作溶液; 在分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-10检测：

3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。

3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。

3.3将细胞重悬于500μLJC-10工作溶液中（来自步骤1.2）。

3.4在室温或37°C，5％CO2培养箱中孵育10至30分钟，避光。

注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

3.5使用荧光显微镜（使用FITC和TRITC过滤器）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）监测Ex / Em = 490/525 nm和540/590 nm处的荧光变化。可选：移除JC-10工作 从板上解决; 在荧光显微镜下分析之前，将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。

 

参考文献

JC-10™ has been used to study many biologically significant processes across several key disciplines. To list a few, JC-10™ has been used to investigate topics such as mitochondrial membrane potential, cytotoxicity, cell viability, oxidative stress, cancer metastasis, apoptosis, signal transduction, mitochondrial fission and induced pluripotent stem cells (iPSCs). 

Below, you may find a small sampling of specific JC-10™ applications. To inquire about a potential application of JC-10™, or to consult with our fluorescent dye specialists, please contact us at support@aatbio.com or 1-800-990-8053.

High-content assays for hepatotoxicity using induced pluripotent stem cell–derived cells.
Researchers use JC-10™ to monitor mitochondrial depolarization as an indication of hepatotoxicity and oxidative stress in induced pluripotent stem cell-derived cells, with the ultimate goal of designing a reliable, high-content and imaging-based in vitro toxicity assay. 

High-Content High-Throughput Assays for Characterizing the Viability and Morphology of Human iPSC-Derived Neuronal Cultures
JC-10™ was used to study neurons derived from induced pluripotent stem-cells. Since JC-10™ will accumulate in the mitochondria of viable cells, it was used to determine cell viability in a high-throughput assay context.

Anticancer Activity of New Synthetic α-Methylene-δ-Lactones on Two Breast Cancer Cell Lines
Researchers chose JC-10™ to investigate mitochondrial membrane potential and membrane integrity in cells treated with natural products, such as α-Methylene-δ-Lactones, with the goal of developing new treatments for breast cancer.

Tetrandrine protects mouse retinal ganglion cells from ischemic injury.
JC-10™ was used in flow cytometry to study mitochondrial membrane potential (ΔΨm) in primary cultured retinal ganglion cells, as an extension of the field of drug discovery into prevention of ischemic injury. 

Midazolam induces cellular apoptosis in human cancer cells and inhibits tumor growth in xenograft mice
In a study of human cancer cells, JC-10™ was employed to track cellular apoptosis as a function of mitochondrial membrane potential, and consequently, mitochondrial activity. Researchers were interested in the possible anesthetic properties of midazolam for anticancer drug delivery.

Mitochondrial proteomics with siRNA knockdown to reveal ACAT1 and MDH2 in the development of doxorubicin-resistant uterine cancer
JC-10™ was used by researchers for the purposes of drug discovery. In particular, researchers were interested in finding new treatments for doxorubicin-resistant uterine cancer, using JC-10™ to monitor mitochondrial membrane potential and validate cell viability results. 

Cold exposure lowers energy expenditure at the cellular level
Researchers used JC-10™ to investigate the relationship between temperature and cellular activity. In particular, researchers wanted to explore if cold temperature acts as a stressor on mitochondrial membrane potential, with regards to the oxidative phosphorylation process which generates ATP.

Susceptibility of gametes and embryos of the eastern oyster, Crassostrea virginica, to Karenia brevis and its toxins
JC-10™ was used in the study of sperm viability, fertilization successs and embryonic survival of Crassostrea virginica. Specifically, JC-10™ was used to quantify mitochondrial membrane potential in sperm cells and to determine possible toxicity effects of algal blooms.

Calmodulin antagonists induce cell cycle arrest and apoptosis in vitro and inhibit tumor growth in vivo in human multiple myeloma
JC-10™ was used by researchers to study cell cycle and apoptosis in human multiple myeloma. JC-10™ functioned as a probe for the detection of mitochondrial membrane potential depolarization, which was crucial to the study of caspase activated apoptosis.

Activation of the mitochondrial apoptotic pathway produces reactive oxygen species and oxidative damage in hepatocytes that contribute to liver tumorigenesis
Researchers were interested in the pathways involved with liver tumorigenesis. To that end, they used JC-10™ to study activation of apoptotic pathways related to changes in mitochondrial membrane potential, with the ultimate goal of discovering if antioxidant therapy might help suppress liver carinogenesis.

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测 价格 4245
产品规格

500 Tests

产品货号

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测

产品参数
Ex (nm) 508 Em (nm) 524
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测 是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的试剂盒，JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差导致大的不便。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10被开发成为JC的优异替代品。与JC-1相比，JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。该性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）向570nm（即J-聚集体形式的发射）的移动。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，它还可用于荧光成像和荧光微孔板平台。这种Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了强大的检测方法。

这种Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了可靠的检测方法。该试剂盒基于阳离子亲脂性JC-10染料检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中，JC-10浓缩在线粒体基质中，在那里形成红色荧光聚集体。然而，在凋亡和坏死细胞中，JC-10扩散出线粒体。它变成单体形式并以绿色荧光染色细胞。该试剂盒可用于筛选凋亡抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的线粒体膜电位荧光探针。

点击查看光谱

 

荧光酶标仪

  
Ex: 490/540 nm
Em： 525/590 nm
Cutoff： 515/570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式： 底读模式
实验方案

96孔板样品分析

概述

准备细胞

添加测试化合物

添加JC-10染料加载溶液（50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板）

在37℃，5％CO2培养箱中孵育30至60分钟

添加测定 缓冲液B（50μL/孔/ 96孔板或12.5μL/孔/ 384孔板）

在Ex / Em = 490/525和540/590 nm处监测荧光强度

 

操作步骤

1.准备细胞：
1.1对于贴壁细胞：在生长培养基中将细胞以20,000至80,000个细胞/孔/90μL过夜，96孔板或5,000至20,000个细胞/孔/20μL，用于384孔板。
1.2对于非粘附细胞：从培养基中离心细胞，然后将细胞沉淀悬浮于100,000-200,000细胞/孔/90μL的培养基中，用于96孔poly-D赖氨酸平板或25,000-50,000细胞/孔 /20μL，用于384孔聚-D赖氨酸板。 在实验之前，在制动器关闭的情况下以800rpm离心板2分钟。
注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的佳细胞密度。

 

2.准备JC-10染料加载溶液：
2.1使用前在室温下清洗所有套件组件。
2.2将50μL100XJC-10（组分A）加入5mL测定缓冲液A（组分B）中，充分混合。
注意：将未使用的100X JC-10（组分A）等分并保存在-20 oC。 避免反复冻/融循环。

 

3.运行JC-10测定：
3.1通过向所需缓冲液（例如PBS或HHBS）中加入10μL10X测试化合物（96孔板）或5μL5X测试化合物（384-板）来处理细胞。
注意：在添加化合物之前不必洗涤细胞。然而，如果测试的化合物对血清敏感，则可在添加化合物之前吸出生长培养基和血清因子。在抽吸后将相同体积的HHBS添加到孔中（例如对于96孔板为90μL或对于384孔板为20μL）。或者，细胞可以在无血清培养基中生长。
3.2在室温或37℃，5％CO2培养箱中培养细胞板至少15分钟或所需的时间（对于Jurkat细胞，用喜树碱4-6小时或用星形孢菌素处理3-5小时）到诱导细胞凋亡
3.3将50μL/孔（96孔板）或12.5μL/孔（384孔板）的JC-10染料加载溶液（来自步骤2.2）加入细胞板（来自步骤3.2）。
3.4将染料加载板在37℃，5％CO2培养箱中孵育30-60分钟，避光。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5在读取荧光强度之前，将50μL/孔（96孔板）或12.5μL/孔（384孔板）的测定缓冲液B（组分C）加入染料加载板（来自步骤3.4）。
注1：装载后请勿清洗电池。
注2：对于非粘附细胞，建议在加入分析缓冲液B（组分C）后，以800rpm离心细胞板2分钟，同时停止制动。
3.6使用底部读取模式监测Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）和540 / 590nm（在570nm处截止）的荧光强度以进行比率分析。

 

数据分析

Em在525/590处的荧光强度比率用于数据分析。

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测

图1.在Jurkat细胞中用JC-10和JC-1测量了喜树碱诱导的线粒体膜电位变化。 用喜树碱（10mM）处理Jurkat细胞4小时后，向孔中加入JC-1和JC-10染料上样溶液并孵育30分钟。 使用NOVOstar酶标仪（BMG Labtech）在Ex / Em = 490 / 525nm和490 / 590nm下测量J-聚集体和单体形式的JC-1和JC-10的荧光强度。

 

参考文献

Determination of Hepatotoxicity in iPSC-Derived Hepatocytes by Multiplexed High Content Assays
Authors: Oksana Sirenko, Evan F Cromwell
Journal: (2018): 339–354

Inhibitors of Aβ42-induced endoplasmic reticular unfolded protein response (UPRER), in yeast, also rescue yeast cells from Aβ42-mediated apoptosis
Authors: Asma Derf, Ramesh Mudududdla, Sandip B Bharate, Bhabatosh Chaudhuri
Journal: European Journal of Pharmaceutical Sciences (2018)

Knockout of Mpv17-Like Protein (M-LPH) Gene in Human Hepatoma Cells Results in Impairment of mtDNA Integrity through Reduction of TFAM, OGG1, and LIG3 at the Protein Levels
Authors: Reiko Iida, Misuzu Ueki, Toshihiro Yasuda
Journal: Oxidative Medicine and Cellular Longevity (2018)

Role of Mcl-1 in regulation of cell death in human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes in vitro
Authors: Liang Guo, Sandy Eldridge, Michael Furniss, Jodie Mussio, Myrtle Davis
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2018)

Boosted Membrane Potential as Bioenergetic Response to Anoxia in Dinoroseobacter shibae
Authors: Christian Kirchhoff, Heribert Cypionka
Journal: Frontiers in Microbiology (2017): 695

Evaluation of anticancer properties of a new α-methylene-δ-lactone DL-249 on two cancer cell lines
Authors: Dorota K Pomorska, Katarzyna Gach-Janczak, Rafal Jakubowski, Tomasz Janecki, Jacek Szymański, Anna Janecka
Journal: Open Life Sciences (2017): 178–189

In vitro cardiotoxicity assessment of environmental chemicals using an organotypic human induced pluripotent stem cell-derived model
Authors: Oksana Sirenko, Fabian A Grimm, Kristen R Ryan, Yasuhiro Iwata, Weihsueh A Chiu, Frederick Parham, Jessica A Wignall, Blake Anson, Evan F Cromwell, Mamta Behl
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2017)

Study of the relationship between AGEs and oxidative stress damage to trophoblast cell mitochondria
Authors: Lingling Jiang, Jianying Yan, Lixiang Wu
Journal: Ginekologia Polska (2017): 372–378

13-Methyl-palmatrubine induces apoptosis and cell cycle arrest in A549 cells in vitro and in vivo
Authors: Jingxian Chen, Xingang Lu, Chenghua Lu, Chunying Wang, Haizhu Xu, Xiaoli Xu, Haixin Gou, Bing Zhu, Wangchun Du
Journal: Oncology Reports (2016): 2526–2534

Anti-proliferation effects, efficacy of cyasterone in vitro and in vivo and its mechanism
Authors: XinGang Lu, HongFu Qiu, Liu Yang, JieYing Zhang, ShuJie Ma, Lan Zhen
Journal: Biomedicine & Pharmacotherapy (2016): 330–339

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测 Cat#22801

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测 价格 4245
产品规格

100 Tests

产品货号

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测

产品参数
Ex (nm) 508 Em (nm) 524
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞仪检测 是美国AAT Bioquest研发的用于检测线粒体膜电位的试剂盒，JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差导致大的不便。即使在1μM浓度下，JC-1也倾向于在水性缓冲液中沉淀。当需要高染料浓度时，JC-10被开发成为JC的优异替代品。与JC-1相比，JC-10具有更好的水溶性。 JC-10能够选择性地进入线粒体，并随着膜电位的增加可逆地将其颜色从绿色变为橙色。该性质是由于膜极化时JC-10聚集体的可逆形成导致发射光从520nm（即JC-10单体形式的发射）向570nm（即J-聚集体形式的发射）的移动。当在490nm处激发时，随着线粒体膜变得更加极化，JC-10的颜色从绿色橙色可逆地变为绿色橙色。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）中分析绿色发射，在通道2（FL2）中分析绿色橙色发射。除了用于流式细胞仪外，它还可用于荧光成像和荧光微孔板平台。这种Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了强大的检测方法。

这种Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒使研究人员能够以酶标仪的形式运行JC-10检测，并为监测线粒体膜电位变化提供了可靠的检测方法。该试剂盒基于阳离子亲脂性JC-10染料检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中，JC-10浓缩在线粒体基质中，在那里形成红色荧光聚集体。然而，在凋亡和坏死细胞中，JC-10扩散出线粒体。它变成单体形式并以绿色荧光染色细胞。该试剂盒可用于筛选凋亡抑制剂。可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行测定。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供优质的线粒体膜电位荧光探针。

点击查看光谱

 

适用仪器

流式细胞仪  
Ex: 488 nm
Em： 530/30 nm、575/26 nm
通道: FITC、PE通道
实验方案

96孔板样品分析

概述

用密度为5×105到1×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

用500μL1XJC-10染料加载溶液重悬细胞（2-5×105细胞/管）

37°C孵育/ 室温15-30分钟

用流式细胞仪分析FL1通道（绿色荧光单体信号）和FL2通道（橙色荧光聚合信号）

 

操作方法

1.准备细胞：
以5×105至1×106个细胞/ mL的密度制备细胞。
注意：应根据个体评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。

 

2.准备JC-10染料加载溶液：
2.1使用前在室温下清洗所有试剂盒中的试剂。
2.2将25μL的200X JC-10（组分A）加入5mL的测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。
注意：将未使用的200X JC-10（组分A）等分并保存在-20℃。 避免反复冻/融循环。

 

3.运行JC-10测定：
3.1用测试化合物细胞培养所需的一段时间以诱导细胞凋亡。设置并行控制实验。
对于阴性对照：仅用载体处理细胞。
对于阳性对照：在37℃，5％CO2培养箱中用2-10μM的FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。
注意：CCCP或FCCP可与JC-10染料加载溶液同时添加（来自步骤2.2）。可能需要滴定CCCP或FCCP以获得具有单个细胞系的结果。
3.2离心细胞，每管2-5×105个细胞。
注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞摄入，用含有血清的培养基洗涤细胞一次，然后用JC-10染料加载溶液孵育（参见步骤3.3）。
3.3在500μLJC-10染料加载溶液中重悬细胞（来自步骤2.2）。
3.4在室温下或在37℃，5％CO2培养箱中孵育染料装载细胞15-60分钟，避光。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
3.5通过在FL1通道中使用流式细胞仪检测荧光强度，获得绿色荧光单体信号（在凋亡细胞中），并使用FL2通道检测橙色荧光聚集信号（在健康细胞中）。建议使用FCCP或CCCP处理的细胞进行补偿校正（见附录）。

 

数据分析

1.在活的非凋亡细胞中，JC-10作为细胞溶质染色绿色中的单体存在，并且还在线粒体染成红色的聚集体中积累。 在凋亡细胞和死细胞中，JC-10仅以单体形式存在，染色细胞溶质绿。
2.使用FL2通道可检测到健康细胞中含有红色JC-10聚集体的线粒体。 通过使用FL1通道（FITC）可检测凋亡细胞中的绿色JC-10单体。
3. FL1与FL2的强度比用于监测化合物处理诱导的线粒体膜电位变化。

Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合流式细胞检测

图1. FCCP诱导的JurKat细胞线粒体膜电位变化的影响。 将JurKat细胞染色载有JC-10染料加载溶液以及DMSO（Top）或5μMFCCP（低）10分钟。 使用FL1和FL2通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪测量J-聚集体和单体形式JC-10的荧光强度。 将未补偿的数据（左栏）与补偿数据（右栏）进行比较。

 

参考文献

Anticancer properties of a new non-oxido vanadium (IV) complex with a catechol-modified 3, 3′-diindolylmethane ligand
Authors: Katja Dankhoff, Aamir Ahmad, Birgit Weber, Bernhard Biersack, Rainer Schobert
Journal: Journal of Inorganic Biochemistry (2019)

BDE-47 decreases progesterone levels in BeWo cells by interfering with mitochondrial functions and genes related to cholesterol transport
Authors: Anqi Shan, Mengxue Li, Xuejun Li, Yaoyan Li, Mengfan Yan, Ping Xian, Ying Chang, Xi Chen, Nai-jun Tang
Journal: Chemical Research in Toxicology (2019)

Enhancing magnetic resonance/photoluminescence imaging-guided photodynamic therapy by multiple pathways
Authors: Pei Liu, Jinghua Ren, Yuxuan Xiong, Zhe Yang, Wei Zhu, Qianyuan He, Zushun Xu, Wenshan He, Jing Wang
Journal: Biomaterials (2019)

5-Fluorouracil inhibits neural differentiation via Mfn1/2 reduction in human induced pluripotent stem cells
Authors: Shigeru Yamada, Daiju Yamazaki, Yasunari Kanda
Journal: The Journal of Toxicological Sciences (2018): 727–734

Determination of Hepatotoxicity in iPSC-Derived Hepatocytes by Multiplexed High Content Assays
Authors: Oksana Sirenko, Evan F Cromwell
Journal: (2018): 339–354

Yap1 safeguards mouse embryonic stem cells from excessive apoptosis during differentiation
Authors: Lucy LeBlanc, Bum-Kyu Lee, C Yu Andy, Mijeong Kim, Aparna V Kambhampati, Shannon M Dupont, Davide Seruggia, Byoung U Ryu, Stuart H Orkin, Jonghwan Kim
Journal: eLife (2018): e40167

Boosted Membrane Potential as Bioenergetic Response to Anoxia in Dinoroseobacter shibae
Authors: Christian Kirchhoff, Heribert Cypionka
Journal: Frontiers in Microbiology (2017): 695

Evaluation of anticancer properties of a new α-methylene-δ-lactone DL-249 on two cancer cell lines
Authors: Dorota K Pomorska, Katarzyna Gach-Janczak, Rafal Jakubowski, Tomasz Janecki, Jacek Szymański, Anna Janecka
Journal: Open Life Sciences (2017): 178–189

In vitro cardiotoxicity assessment of environmental chemicals using an organotypic human induced pluripotent stem cell-derived model
Authors: Oksana Sirenko, Fabian A Grimm, Kristen R Ryan, Yasuhiro Iwata, Weihsueh A Chiu, Frederick Parham, Jessica A Wignall, Blake Anson, Evan F Cromwell, Mamta Behl
Journal: Toxicology and Applied Pharmacology (2017)

Study of the relationship between AGEs and oxidative stress damage to trophoblast cell mitochondria
Authors: Lingling Jiang, Jianying Yan, Lixiang Wu
Journal: Ginekologia Polska (2017): 372–378

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter JC-10线粒体膜电位检测试剂盒 适合微孔板检测 Cat#22800

Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合流式细胞检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合流式细胞检测 价格 2823
产品规格

100 Tests

产品货号

Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合流式细胞检测

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的丧失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter NIR膜电位检测试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可检测细胞凋亡的线粒体膜电位。该荧光测定法是基于我们专有的阳离子MitoLite NIR 染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR 主要在线粒体中积累，但是在凋亡细胞中，MitoLite NIR 染色强度降低。通过MitoLite NIR 染色的细胞可以通过流式细胞术观察到红色激发和远红色发射（FL4通道）。该试剂盒可与其他试剂配对，例如蓝激发碘化丙啶和Cell Meter 磷脂酰丝氨酸凋亡检测试剂盒（＃22803），用于多参数研究细胞活力和凋亡。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器

流式细胞仪  
Ex: 640 nm
Em： 660/20 nm
通道: APC 通道
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 将5 µL 200X MitoLite NIR加入1 mL细胞溶液中
  3. 在37°C，5％CO2的培养箱中孵育细胞15-30分钟
  4. 沉淀细胞，并将细胞重悬于1 mL生长培养基中
  5. 使用带有FL4通道的流式细胞仪分析细胞

 

操作步骤

1.对于每个样品，在1 mL温暖的培养基或您选择的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。 注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的佳细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

阴性对照：仅用载体处理细胞。

阳性对照：在37℃，5％CO2培养箱中，以5-50 µM的浓度用FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。 注意：CCCP或FCCP可以与MitoLite NIR同时添加。 为了获得佳结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

3.向处理过的细胞中加入5 µL 200X MitoLite NIR（组分A）。

4.将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育15至30分钟。 注意：对于贴壁细胞，在用MitoLite NIR染料上样溶液孵育之前，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并用含血清的培养基洗涤一次。

5.以1000 rpm离心细胞4分钟，然后将细胞重悬于1 mL分析缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

6.使用带有FL4通道的流式细胞仪（Ex / Em = 635/660 nm）检测荧光强度。

 

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合微孔板检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合微孔板检测 价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒 适合微孔板检测

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的丧失来监测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter NIR线粒体膜电位检测试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方法，可检测线粒体膜电位丧失的细胞凋亡。该荧光测定法是基于我们专有的阳离子MitoLite NIR 染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR 主要在线粒体中积累，但是在凋亡细胞中，MitoLite NIR 染色强度降低。用MitoLite NIR 染色的细胞可以在620-640 nm激发下在660-680 nm荧光下进行检测。该试剂盒可用于筛选凋亡和抑制剂。该测定可以以方便的96孔和384孔荧光微量滴定板形式进行。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位近红外检测试剂盒。

点击查看光谱

 

荧光酶标仪

  
Ex: 640 nm
Em： 680 nm
Cutoff： 665 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式： 底读模式
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 添加测试化合物
  3. 添加MitoLite NIR工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
  4. 在5％CO2的培养箱中于37°C孵育30-60分钟
  5. 添加测定缓冲液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）
  6. 检测Ex / Em = 640/680 nm（截止= 665 nm）的荧光强度（底部读取模式）

 

溶液配制

工作溶液配制

将50 µL的200X MitoLite NIR（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液A（组分B）中，并充分混合以制成MitoLite NIR工作溶液，避光。

 

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间，以诱导细胞凋亡并建立平行对照实验。

阴性对照：仅用载体处理细胞。

阳性对照：在37℃，5％CO2培养箱中，以5-50 µM的浓度用FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。 注意：CCCP或FCCP可以与MitoLite NIR同时添加。 为了获得结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

2.在添加MitoLite NIR工作溶液之前，请去除细胞培养基。注意：在添加MitoLite NIR工作溶液之前，必须除去细胞培养基。

3.将100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoLite NIR工作溶液添加到细胞板中。

4.在37°C，5％CO2的培养箱中避光放置30-60分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.在检测荧光信号之前，将50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的测定缓冲液B（组分C）加入细胞板。注意：加载后请勿洗涤细胞。对于非贴壁细胞，建议在加入测定缓冲液B（组分C）后，以800 rpm离心细胞板2分钟，然后制动。

6.加入测定缓冲液B（组分）10到30分钟后，使用荧光酶标仪（底部读取模式）（Ex / Em = 640/680 nm（Cutoff = 665 nm））检测荧光强度。

 

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测 价格 2823
产品规格

100 Tests

产品货号

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于线粒体膜电位检测的试剂盒，Cell Meter检测试剂盒是一类用于检测细胞功能的系列工具，包括细胞活性、细胞毒性、细胞凋亡、细胞膜电位以及细胞周期等方面的指标。每种检测方案均能提供不同荧光颜色的检测方案。这些检测方案为从多角度研究细胞功能活动提供了一种十分有效的方法。Cell Meter线粒体膜电位检测试剂盒 *橙色荧光 适合流式细胞检测* 专门通过检测线粒体跨膜电势的减少来检测细胞凋亡。线粒体跨膜电势瓦解与线粒体渗透转运孔的开放相一致，导致细胞色素C释放到胞浆中，它是下游凋亡级联反应的触发器。该荧光实验方案利用我们独有的MitoLite Orange来检测凋亡细胞中线粒体跨膜电势的减少。在正常细胞中，当MitoLite Orange积聚于线粒体时，红色荧光增加。然而在凋亡细胞中，MitoLite Orange随着线粒体跨膜电位的塌陷而减少。被MitoLite Orange染色的细胞可以通过488n的激发光（FL2 通道）来观察。该试剂盒可以与其它Cell Meter检测试剂盒同时检测细胞的活性和凋亡，该试剂盒已被优化，可用于流式细胞法筛选凋亡抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。 

点击查看光谱

 

适用仪器

流式细胞仪  
Ex: 488 nm or 532 nm
Em： 575/26 nm
通道: PE 通道
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.用密度为5×105到1×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞
2.将2μL500XMitoTell Orange加入1 mL细胞溶液中
3.将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育15-30分钟
4.将细胞沉淀，并将细胞重悬于1mL生长培养基中
5.使用具有FL2通道的流式细胞仪分析细胞

 

操作步骤

1.对于每个样品，将细胞制备在1 mL温热培养基或您选择的缓冲液中，密度为5×105至1×106个细胞/ mL。注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段所需的时间以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

3.对于阴性对照：仅用载体处理细胞。

4.对于阳性对照：使用FCCP或CCCP以5-50μM在37℃，5％CO2培养箱中处理细胞15至30分钟。注意：CCCP或FCCP可与MitoTell Orange同时添加。为了获得结果，可能需要对每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

5.将2μL500XMitoTell 橙（组分A）加入处理过的细胞中。

6.将细胞在37℃，5％CO2培养箱中孵育15至30分钟。注意：对于粘附细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用MitoTell Orange染料加载溶液孵育之前用含有血清的培养基洗涤细胞一次。

7.将细胞以1000rpm离心4分钟，然后将细胞重悬于1mL的分析缓冲液（组分B）或您选择的缓冲液中。

8.使用具有FL2通道（Ex / Em = 540 / 590nm）的流式细胞仪监测荧光强度。

 

数据分析

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合流式细胞检测

图1.在Jurkat细胞中添加FCCP后MitoTell Orange的荧光强度降低。 将Jurkat细胞单独加载MitoTell Orange（蓝色）或在30μMFCCP（红色）存在下加载15分钟。 使用FL2通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪测量MitoTell Orange的荧光强度。

 

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

[Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry]
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

 

相关产品

产品名称 货号
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合流式细胞检测 Cat#22806
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合微孔板检测 Cat#22805
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合微孔板检测 Cat#22807

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合微孔板检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合微孔板检测 价格 2823
产品规格

500 Tests

产品货号

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 橙色荧光 适合微孔板检测

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞功能的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位（MMP）的丢失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的凋亡与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。该荧光测定法使用我们专有的阳离子MitoLite Orange检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中，当线粒体中积累了MitoLite Orange时，橙色荧光强度会增加。但是，在凋亡细胞中，MMP凋亡后，MitoLite Orange的荧光强度降低。可以对用MitoLite Orange染色的细胞进行荧光检测。我们的Cell Meter 橙色线粒体膜电位测定试剂盒可通过优化的测定方法提供所有必需成分。该试剂盒可用于筛选凋亡抑制剂。而且该测定可以以方便的96孔和384孔荧光酶标仪进行检测，而无需清洗步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。

 

荧光酶标仪

  
Ex: 540 nm
Em： 590 nm
Cutoff： 570 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式： 底读模式
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 添加测试化合物
  3. 添加MitoTell Orange工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
  4. 将板在5％CO2、37°C的培养箱中孵育15-30分钟
  5. 添加测定缓冲液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）
  6. 检测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加（底部读取模式）

 

溶液配制

工作溶液配制

将50 µL的200X MitoTell 橙色（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液A（组分B）中，并充分混合以制成MitoTell Orange工作溶液，避光。

 

实验步骤

1.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

阴性对照：仅用载体处理细胞。

阳性对照：在37°C 5％CO2培养箱中，以5-50 µM的浓度用FCCP或CCCP处理细胞15至30分钟。 注意：CCCP或FCCP可以与MitoTell Orange同时添加。 为了获得结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

2.取出细胞培养基。注意：在添加MitoTell Orange工作溶液之前，必须除去细胞培养基。

3.将100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoTell Orange工作溶液添加到细胞板中。

4.将板在5％CO2、37°C​​的培养箱中避光放置15-30分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

5.将50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的测定缓冲液B（组分C）添加到细胞板中。注意：加载后请勿洗涤细胞。对于非贴壁细胞，建议在加入测定缓冲液B（组分C）后，以800 rpm离心细胞板2分钟，然后制动。

6.在加入分析缓冲液B（成分C）10至30分钟后，使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex/Em=640/680 nm（截止=665 nm）处检测荧光强度，可以使用终点模式，也可以使用动力学模式。

 

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合流式细胞检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合流式细胞检测 价格 2823
产品规格

100 tests

产品货号

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合流式细胞检测

产品参数
Ex (nm) 613 Em (nm) 631
分子量 – 溶剂 –
存储条件 –
产品概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞功能的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位（MMP）的丢失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的凋亡与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联反应中的其他下游事件。该荧光测定法使用我们专有的阳离子MitoLite red检测细胞中线粒体膜电位的变化。在正常细胞中，当线粒体中积累了MitoLite red时，红色荧光强度会增加。但是，在凋亡细胞中，MMP凋亡后，MitoLite red的荧光强度降低。可以对用MitoLite red染色的细胞进行荧光检测。我们的Cell Meter 红色线粒体膜电位测定试剂盒可通过优化的测定方法提供所有必需成分。该试剂盒可用于筛选凋亡抑制剂。该试剂盒可以使用流式细胞仪在APC或Cy5通道上观察用MitoTell Red染色的细胞。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪筛选凋亡抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。

点击查看光谱

 

适用仪器

流式细胞仪  
Ex: 640 nm
Em： 660/20 nm
通道: APC 通道
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 用5×105至1×106细胞/ mL的密度制备含测试化合物的细胞
  2. 在0.5 mL细胞溶液中加入1 µL 500X MitoTell Red
  3. 将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育15-30分钟
  4. 沉淀细胞，然后将细胞重悬于0.5 mL检测缓冲液中
  5. 使用带有APC或Cy5通道的流式细胞仪分析细胞

 

实验步骤

1.对于每个样品，在0.5 mL温暖的培养基或自备的缓冲液中以5×105至1×106细胞/ mL的密度制备细胞。注意：应单独评估每种细胞系，以确定诱导凋亡的细胞密度。

2.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。注意：我们在37ºC下用20µM CCCP处理Jurkat细胞15分钟，以改变线粒体膜电位。CCCP或FCCP可以与MitoTell Red同时添加。为了获得结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

3.向处理过的细胞中加入1 µL 500X MitoTell Red（组分A）。

4.将细胞在37°C，5％CO2培养箱中孵育15至30分钟。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在与MitoTell Red孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

5.以800 rpm的速度离心细胞4分钟，然后将细胞重悬于0.5 mL的测定缓冲液（组分B）或自备的缓冲液中。

6.使用流式细胞仪通过APC或Cy5通道检测荧光强度。

 

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合微孔板检测-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合微孔板检测 价格 2823
产品规格

500 tests

产品货号

Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒 红色荧光 适合微孔板检测

产品参数
Ex (nm) 613 Em (nm) 631
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位（MMP）的消失来检测细胞凋亡。 MMP的凋亡与线粒体通透性过渡孔的开放相吻合，导致细胞色素C释放到细胞质中，进而触发了细胞凋亡级联反应中的其他下游事件。我们的Cell Meter 线粒体膜电位测定试剂盒可通过优化的测定方法提供所有基本成分。荧光测定法使用我们专有的阳离子MitoTell Red检测MMP消失的细胞凋亡。在正常细胞中，当MitoTell Red堆积在线粒体中时，红色荧光强度会增加。但是，在凋亡细胞中，MMP凋亡后，MitoTell Red的荧光强度降低。 MitoTell Red染色的细胞可以通过荧光显微镜Cy5通道或荧光酶标仪读取。该试剂盒经过优化，可通过荧光酶标仪读取凋亡和抑制剂。而且该测定可以以方便的96孔和384孔荧光酶标仪进行检测，而无需清洗步骤。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter 线粒体膜电位检测试剂盒。

点击查看光谱

 

荧光酶标仪

  
Ex: 610 nm
Em： 650 nm
Cutoff： 630 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式： 底读模式
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 准备细胞
  2. 添加测试化合物
  3. 添加MitoTell Red工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）
  4. 将板在5％CO2、37°C的培养箱中孵育30分钟
  5. 添加测定缓冲液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）
  6. 在Ex / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm）或使用Cy5滤光片的荧光显微镜下检测荧光增加（底部读取模式）

 

溶液配制

将50 µL的200X MitoTell Red（组分A）添加到10 mL的测定缓冲液A（组分B）中，并充分混合以制成MitoTell Red工作溶液，避光。

 

实验步骤

1.用测试化合物处理细胞一段时间，以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。注意：我们用20 µM CCCP处理HeLa细胞15分钟，以改变线粒体膜电位。CCCP或FCCP可以与MitoTell Red同时添加。为了获得结果，可能需要为每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

2.将100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoTell Red工作溶液加入细胞板。

3.在避光的条件下，将板在37ºC下孵育15-30分钟。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

4.将50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的测定缓冲液B（组分C）添加到细胞板中。注意：加载后请勿洗涤细胞。对于非贴壁细胞，建议在加入测定缓冲液B（组分C）后，以800 rpm离心细胞板2分钟，然后制动。

5.加入测定缓冲液B（组分C）后10到30分钟，用荧光酶标仪（Ext / Em = 610/650 nm（截止= 630 nm））检测荧光强度，或在荧光下用带Cy5滤镜的显微镜观察荧光信号。

 

参考文献

Safranine O as a fluorescent probe for mitochondrial membrane potential studied on the single particle level and in suspension
Authors: Perevoshchikova IV, Sorochkina AI, Zorov DB, Antonenko YN.
Journal: Biochemistry (Mosc) (2009): 663

Computer-assisted live cell analysis of mitochondrial membrane potential, morphology and calcium handling
Authors: Koopman WJ, Distelmaier F, Esseling JJ, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Methods (2008): 304

Determination of high mitochondrial membrane potential in spermatozoa loaded with the mitochondrial probe 5,5′,6,6′-tetrachloro-1,1′,3,3′-tetraethylbenzimidazolyl-carbocyanine iodide (JC-1) by using fluorescence-activated flow cytometry
Authors: Guthrie HD, Welch GR.
Journal: Methods Mol Biol (2008): 89

Effects of eprosartan on mitochondrial membrane potential and H2O2 levels in leucocytes in hypertension
Authors: Labios M, Martinez M, Gabriel F, Guiral V, Ruiz-Aja S, Beltran B, Munoz A.
Journal: J Hum Hypertens (2008): 493

Evaluation of sperm mitochondrial membrane potential by JC-1 fluorescent staining and flow cytometry
Authors: Xia XY, Wu YM, Hou BS, Yang B, Pan LJ, Shi YC, Jin BF, Shao Y, Cui YX, Huang YF.
Journal: Zhonghua Nan Ke Xue (2008): 135

How DASPMI reveals mitochondrial membrane potential: fluorescence decay kinetics and steady-state anisotropy in living cells
Authors: Ramadass R, Bereiter-Hahn J.
Journal: Biophys J (2008): 4068

Life cell quantification of mitochondrial membrane potential at the single organelle level
Authors: Distelmaier F, Koopman WJ, Testa ER, de Jong AS, Swarts HG, Mayatepek E, Smeitink JA, Willems PH.
Journal: Cytometry A (2008): 129

Mitochondrial membrane potential in axons increases with local nerve growth factor or semaphorin signaling
Authors: Verburg J, Hollenbeck PJ.
Journal: J Neurosci (2008): 8306

The mitochondrial membrane potential and Ca2+ oscillations in smooth muscle
Authors: Chalmers S, McCarron JG.
Journal: J Cell Sci (2008): 75

Cyclosporin A-induced oxidative stress is not the consequence of an increase in mitochondrial membrane potential
Authors: van der Toorn M, Kauffman HF, van der Deen M, Slebos DJ, Koeter GH, Gans RO, Bakker SJ.
Journal: Febs J (2007): 3003

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光 价格 2823
产品规格

1 plate

产品货号

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

膜电位是细胞内外的电压差。膜电位使细胞发挥电池的作用，为各种嵌入膜内的“分子器件”提供动力。在神经元等电兴奋性细胞中，膜电位被用来在细胞的不同部位传递信号。在膜的某一点上打开或关闭离子通道会使膜电位发生局部变化，从而使电流迅速流向膜的其他点。离子通道已被确定为重要的药物发现靶点。我们的Screen Quest 膜电位检测试剂盒是一种具有快速读取的均相检测方法。它使用我们专有的长波长膜电位指示剂检测由离子通道的打开和关闭引起的膜电位变化。试剂盒中使用的膜电位指示剂的红色荧光增强了进入细胞的荧光，并将筛选化合物和细胞自身荧光造成的干扰降至低。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 膜电位检测试剂盒。

 

适用仪器

荧光酶标仪  
Ex: 530 nm
Em： 570 nm
Cutoff： 550 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底部读取/分液处理

 

其他可用仪器  
FDSS、FLIPR、FlexStation、NOVOStar  
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 在生长培养基中准备细胞
  2. 添加MP染料工作液
  3. 在室温下孵育30至60分钟
  4. 检测添加膜电位后化合物的荧光变化

 

溶液配制

储备溶液配制

1.分析缓冲液原液（1X）：将1 mL的10X分析缓冲液（组分B）添加到9 mL的HHBS中（组分C，不包括#36001），并充分混合。 注意：10 mL的1X分析缓冲液足以用于1个板。

 

工作溶液配制

将15 uL的MP Sensor（组分A）添加到10 mL的1X 分析缓冲液储备溶液中并充分混合。 该工作溶液在室温下稳定至少两个小时。

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）MP染料工作溶液添加到细胞板中。注意：如果您的筛选化合物干扰了生长培养基和血清因子，那么在添加MP染料工作溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。注意：上色后请勿清洗细胞。

2.在细胞培养箱中孵育工作溶液板30分钟。注意：在某些情况下，在室温下孵育30至60分钟可能会更好。

3.通过使用HHBS或所需的缓冲液来准备复合板。

4.在加入化合物的前后，使用荧光酶标仪中的内置液体处理器，通过检测Ex / Em = 530/570 nm处的荧光来运行膜电势测定。注意：在实验之前进行信号测试非常重要，不同的仪器具有各自的强度范围。将信号测试强度调整为大仪器强度计数的10％到15％。例如，FLIPR-384的大荧光强度计数为65,000，因此应调整仪器设置，使其信号测试强度约为7,000至10,000。

 

图示

 

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光

图1.用P2X受体瞬时转染的HEK细胞中的ATP剂量反应。 用P2X受体瞬时转染的HEK细胞以40,000个细胞/ 100 µL /孔的速度在Costar黑墙/透明底部96孔板中过夜接种。 将细胞与100 µL MP染料上载溶液在5％CO2、37°C的培养箱中孵育60分钟。 FlexStation添加了ATP（50 µL /孔）以达到指示的浓度。 用底部读取模式在Ex / Em = 530/570 nm（在550 nm处截止）下测量荧光信号。

 

 

参考文献

A novel high-throughput screening assay for HCN channel blocker using membrane potential-sensitive dye and FLIPR
Authors: Vasilyev DV, Shan QJ, Lee YT, Soloveva V, Nawoschik SP, Kaftan EJ, Dunlop J, Mayer SC, Bowlby MR.
Journal: J Biomol Screen (2009): 1119

A high-capacity membrane potential FRET-based assay for the sodium-coupled glucose co-transporter SGLT1
Authors: Weinglass AB, Swensen AM, Liu J, Schmalhofer W, Thomas A, Williams B, Ross L, Hashizume K, Kohler M, Kaczorowski GJ, Garcia ML.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 255

Miniaturization and HTS of a FRET-based membrane potential assay for K(ir) channel inhibitors
Authors: Solly K, Cassaday J, Felix JP, Garcia ML, Ferrer M, Strulovici B, Kiss L.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2008): 225

A quantitative evaluation of peroxidase inhibitors for tyramide signal amplification mediated cytochemistry and histochemistry
Authors: Liu G, Amin S, Okuhama NN, Liao G, Mingle LA.
Journal: Histochem Cell Biol (2006): 283

Validation of a fluorescent imaging plate reader membrane potential assay for high-throughput screening of glycine transporter modulators
Authors: Benjamin ER, Skelton J, Hanway D, Olanrewaju S, Pruthi F, Ilyin VI, Lavery D, Victory SF, Valenzano KJ.
Journal: J Biomol Screen (2005): 365

Functional assay of voltage-gated sodium channels using membrane potential-sensitive dyes
Authors: Felix JP, Williams BS, Priest BT, Brochu RM, Dick IE, Warren VA, Yan L, Slaughter RS, Kaczorowski GJ, Smith MM, Garcia ML.
Journal: Assay Drug Dev Technol (2004): 260

Functional characterisation of the human alpha1 glycine receptor in a fluorescence-based membrane potential assay
Authors: Jensen AA, Kristiansen U.
Journal: Biochem Pharmacol (2004): 1789

Pharmacological characterization of human excitatory amino acid transporters EAAT1, EAAT2 and EAAT3 in a fluorescence-based membrane potential assay
Authors: Jensen AA, Brauner-Osborne H.
Journal: Biochem Pharmacol (2004): 2115

A rapid assay for the brevetoxin group of sodium channel activators based on fluorescence monitoring of synaptoneurosomal membrane potential
Authors: David LS, Plakas SM, El Said KR, Jester EL, Dickey RW, Nicholson RA.
Journal: Toxicon (2003): 191

Membrane potential fluorescence: a rapid and highly sensitive assay for nicotinic receptor channel function
Authors: Fitch RW, Xiao Y, Kellar KJ, Daly JW.
Journal: Proc Natl Acad Sci U S A (2003): 4909

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光-AAT Bioquest荧光染料

发表于由

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光 价格 2823
产品规格

1 plate

产品货号

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光

产品参数
Ex (nm) – Em (nm) –
分子量 – 溶剂 –
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

Screen Quest 膜电位检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测膜电位的试剂盒，膜电位是电池内部和外部之间的电压差。膜电位允许电池充当电池，提供电力以操作嵌入膜中的各种“分子装置”。在诸如神经元的可电激发细胞中，膜电位用于在细胞的不同部分之间传递信号。在膜中的一个点处打开或关闭离子通道产生膜电位的局部变化，这导致电流快速流到膜中的其他点。离子通道已被确定为重要的药物发现目标。我们的Screen Quest 膜电位检测试剂盒是一种均质检测，具有快速读取时间。它使用我们专有的长波膜电位指示剂来检测由离子通道的打开和关闭引起的膜电位变化。试剂盒中使用的膜电位指示剂的红色荧光在进入细胞时具有增强的荧光，并小化由筛选化合物和/或细胞自发荧光引起的干扰。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Screen Quest 膜电位检测试剂盒。 

 

适用仪器

荧光酶标仪  
激发： 620nm
发射： 650nm
cutoff: 630nm
推荐孔板： 黑色透明
读取模式： 底读模式
其他仪器
FDSS, NOVOStar, FlexStation
实验方案

样品实验方案

简要概述

在生长培养基或HHBS中制备细胞
添加MP染料加载溶液（100μL/孔用于96孔板或25μL/孔用于384孔板）
在室温或37℃孵育1小时
检测Ex / Em = 620 / 650nm处的荧光强度

 

工作溶液配制

MP染料加载方案：将1mL 10X MP（组分A）加入9mL HHBS（组分B）中，并充分混合。 注意：MP染料加载溶液在室温下稳定至少2小时。 注意：1 mL 10X MP指示剂足以容纳一块板。 如果储存得当，未使用的10X MP（A组分）可以等分并在<-20℃下储存几个月。 避免反复冻融循环。 注意：为方便起见，HHBS（组分B）可以存储在4℃。有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

 

操作步骤

1.向细胞板中加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的MP染料加载溶液。注意：如果筛选化合物干扰生长培养基和血清因子，在添加MP染料加载溶液之前，用等体积的HHBS缓冲液替换生长培养基。或者，细胞可以在无血清条件下生长。注意：加载染料后请勿清洗细胞。

2.将染料加载板在5％CO2,37℃培养箱中孵育30至60分钟。注意：在某些情况下，室温孵育30至60分钟可能会更好。

3.使用HHBS（组分B）或所需的缓冲液制备复合板。用HHBS或所需缓冲液制备化合物板。

4.监测Ex / Em = 620 / 650nm处的荧光强度。注意：在实验前进行信号测试非常重要。不同的仪器有自己的强度范围。将信号测试强度调整到大仪器强度计数的10％至15％的水平。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数（对照（Max）的％）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 

Screen Quest 膜电位检测试剂盒 红色荧光

图1.用P2X受体瞬时转染的HEK细胞中的ATP剂量反应。 将用P2X受体瞬时转染的HEK细胞以40,000个细胞/100μL/孔接种在Costar黑色/透明底96孔板中过夜。 将细胞与100μLMP染料加载溶液在5％CO2,37℃培养箱中孵育60分钟。 通过FlexStation添加ATP（50μL/孔）以达到指示的浓度。 在底部读取模式下在Ex / Em = 620 / 650nm（630nm处的截止值）下测量荧光信号。

 

参考文献

The short-chain fatty acid propionate increases glucagon and FABP4 production, impairing insulin action in mice and humans
Authors: Amir Tirosh, Ediz S Calay, Gurol Tuncman, Kathryn C Claiborn, Karen E Inouye, Kosei Eguchi, Michael Alcala, Moran Rathaus, Kenneth S Hollander, Idit Ron
Journal: Science translational medicine (2019): eaav0120

 

相关产品

产品名称 货号
Screen Quest 膜电位检测试剂盒 橙色荧光 Cat#35999