产品基本信息

产品名称：Tide Fluor 3酸  Cy3的代替品

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：559.70

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：555

发射波长（nm）：584

产品介绍

Tide Fluor 3（TF3）系列具有与Cy3相同的光谱特性。 与Cy3探针相比，TF3家族具有更强的荧光和更高的光稳定性。 此外，它们的荧光在3到11之间不受pH限制。这些特性使这种新染料家族成为Cy3的优良替代品。 TF3标记的肽和核苷酸比用Cy3标记的肽和核苷酸显示出更强的荧光和更高的光稳定性。 与我们的Tide Quencher™3（TQ3）配合使用，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子信标，从而提高了灵敏度和稳定性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 3酸  Cy3的代替品。 

点击查看光谱

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

相关产品

产品基本信息

产品名称：Tide Fluor 3胺  Cy3的代替品

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：856.69

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：555

发射波长（nm）：584

产品介绍

Tide Fluor 3（TF3）系列具有与Cy3相同的光谱特性。 与Cy3探针相比，TF3家族具有更强的荧光和更高的光稳定性。 此外，它们的荧光在3到11之间不受pH限制。这些特性使这种新染料家族成为Cy3的优良替代品。 TF3标记的肽和核苷酸比用Cy3标记的肽和核苷酸显示出更强的荧光和更高的光稳定性。 与我们的Tide Quencher™3（TQ3）配合使用，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子信标，从而提高了灵敏度和稳定性。 该TF3产品主要用于标记含有羰基的小分子。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 3胺  Cy3的代替品。 

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参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

相关产品

产品基本信息

产品名称：Tide Fluor 3马来酰亚胺  Cy3的代替品 

储存条件：-15℃避光防潮

保质期：12个月

产品物理化学光谱特性

分子量：651.71

溶剂：DMSO

激发波长（nm）：555

发射波长（nm）：584

产品介绍

Tide Fluor 3（TF3）系列具有与Cy3相同的光谱特性。 与Cy3探针相比，TF3家族具有更强的荧光和更高的光稳定性。 此外，它们的荧光在3到11之间不受pH限制。这些特性使这种新染料家族成为Cy3的优良替代品。 TF3标记的肽和核苷酸比用Cy3标记的肽和核苷酸显示出更强的荧光和更高的光稳定性。 与我们的Tide Quencher™3（TQ3）配合使用，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子信标，从而提高了灵敏度和稳定性。 该TF3产品用于半胱氨酸修饰的巯基修饰的寡核苷酸和肽。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 3马来酰亚胺  Cy3的代替品。 

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参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

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Tide Fluor 3琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Tide Fluor 3（TF3）系列的光谱特性与Cy3的光谱特性基本相同。与Cy3探针相比，TF3家族具有更强的荧光和更高的光稳定性。此外，它们的荧光与pH不相关，pH值为3至11.这些特性使这种新染料系列成为Cy3的优良替代品。TF3标记的肽和核苷酸比用Cy3标记的肽具有更强的荧光和更高的光稳定性。在与我们的Tide Quencher 3（TQ3）配对时，可以开发多种FRET肽和核苷酸，用于检测具有增强的灵敏度和稳定性的蛋白酶和分子信标。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 3琥珀酰亚胺酯。 

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用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

        以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm）的专有寡核苷酸。 您需要根据您的特定实验调整操作方案。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.准备Oligo溶液（溶液A）

1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

4.1.4小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行终纯化

使用Tide Fluor 染料标记肽

        以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要根据您的实验，调整实验方案。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

注2：操作过程中避免强光。

参考文献

A mechanistic model to predict effects of cathepsin B and cystatin C on β-amyloid aggregation and degradation
Authors: Tyler J Perlenfein, Regina M Murphy
Journal: Journal of Biological Chemistry (2017): jbc–M117

Real-Time Detection of a Self-Replicating RNA Enzyme
Authors: Charles Olea, Gerald F Joyce
Journal: Molecules (2016): 1310

Development of Multi-Parametric/Multimodal Spectroscopy Apparatus for Characterization of Functional Interfaces
Authors: Lang Zhou, Mary Arugula, Christopher J Easley, Curtis Shannon, Aleksandr Simonian
Journal: ECS Transactions (2015): 9–16

Maternal serum glycosylated fibronectin as a point-of-care biomarker for assessment of preeclampsia
Authors: Juha Rasanen, Matthew J Quinn, Amber Laurie, Eric Bean, Charles T Roberts, Srinivasa R Nagalla, Michael G Gravett
Journal: American journal of obstetrics and gynecology (2015): 82–e1

Array of biodegradable microrafts for isolation and implantation of living, adherent cells
Authors: Yuli Wang, Colleen N Phillips, Gabriela S Herrera, Christopher E Sims, Jen Jen Yeh, Nancy L Allbritton
Journal: RSC advances (2013): 9264–9272

Development of SNAP-Tag Fluorogenic Probes for Wash-Free Fluorescence Imaging
Authors: Xiaoli Sun, Aihua Zhang, Brenda Baker, Luo Sun, Angela Howard, John Buswell, Damien Maurel, Anastasiya Masharina, Kai Johnsson, Christopher J Noren
Journal: ChemBioChem (2011): 2217–2226

FERRAMENTAS PARA ESTUDO DA BIOLOGIA DE GPCRS (G-PROTEIN COUPLED RECEPTORS)
Authors: Frederico Marianetti Soriani, Remo Castro Russo
Journal: Unknown

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Tide Fluor 5酸  Cy5的代替品是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，Tide Fluor 3（TF3）系列的光谱特性与Cy3的光谱特性基本相同。与Cy3探针相比，TF3家族具有更强的荧光和更高的光稳定性。此外，它们的荧光与pH不相关，pH值为3至11.这些特性使这种新染料系列成为Cy3的优良替代品。TF3标记的肽和核苷酸比用Cy3标记的肽具有更强的荧光和更高的光稳定性。在与我们的Tide Quencher 3（TQ3）配对时，可以开发多种FRET肽和核苷酸，用于检测具有增强的灵敏度和稳定性的蛋白酶和分子信标。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 5酸  Cy5的代替品。 

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用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

        以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。 您需要根据您的特定实验调整操作方案。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.准备Oligo溶液（溶液A）

1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

4.1.4小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行终纯化

使用Tide Fluor 染料标记肽

        以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要根据您的实验，调整实验方案。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

注2：操作过程中避免强光。

参考文献

Fluorescent DNA: the development of 7-deazapurine nucleoside triphosphates applicable for sequencing at the single molecule level
Authors: Seela F, Feiling E, Gross J, Hillenkamp F, Ramzaeva N, Rosemeyer H, Zulauf M.
Journal: J Biotechnol (2001): 269

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Tide Fluor 5WS（TF5WS）系列具有与Cy5相同的光谱特性。 与Cy5探针相比，TF5WS系列具有更强的荧光和更高的光稳定性。 此外，它们的荧光在3到11之间不受pH限制。这些特性使这种新染料家族成为Cy5的优良替代品。 TF5WS标记的肽和核苷酸比用Cy5标记的肽和核苷酸显示出更强的荧光和更高的光稳定性。 与我们的Tide Quencher™5WS（TQ5WS）配合使用，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子信标，从而提高了灵敏度和稳定性。 该TF5WS产品主要用于标记含有羰基的小分子。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 5胺  Cy5的代替品。 

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用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

        以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。 您需要根据您的特定实验调整操作方案。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.准备Oligo溶液（溶液A）

1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

4.1.4小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行终纯化

使用Tide Fluor 染料标记肽

        以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要根据您的实验，调整实验方案。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

注2：操作过程中避免强光。

参考文献

Fluorescent DNA: the development of 7-deazapurine nucleoside triphosphates applicable for sequencing at the single molecule level
Authors: Seela F, Feiling E, Gross J, Hillenkamp F, Ramzaeva N, Rosemeyer H, Zulauf M.
Journal: J Biotechnol (2001): 269

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Tide Fluor 5WS（TF5WS）系列具有与Cy5相同的光谱特性。 与Cy5探针相比，TF5WS系列具有更强的荧光和更高的光稳定性。 此外，它们的荧光在3到11之间不受pH限制。这些特性使这种新染料家族成为Cy5的优良替代品。 TF5WS标记的肽和核苷酸比用Cy5标记的肽和核苷酸显示出更强的荧光和更高的光稳定性。 与我们的Tide Quencher™5WS（TQ5WS）配合使用，可以开发出多种FRET肽和核苷酸来检测蛋白酶和分子信标，从而提高了灵敏度和稳定性。 该TF5WS产品用于硫醇修饰的寡核苷酸和含半胱氨酸的肽的标记。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Tide Fluor 5马来酰亚胺  Cy5的卓越代替品。 

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用Tide Fluor 染料标记氨基修饰的寡核苷酸

        以下方案已经过优化，可用于标记200μg（~6 A260 nm单位）的专有寡核苷酸。 您需要根据您的特定实验调整操作方案。 您的氨基改性OLIGO必须进行处理以去除快速反应并消耗染料SUCCINIMIDYL酯的氨。

1.准备Oligo溶液（溶液A）

1.1将氨基修饰的oligo（~200μg）溶解在四硼酸盐缓冲液（100μL，pH 8.5±0.5）中。

注1：寡核苷酸必须在5’末端用胺基合成。参见Appenxidx 1纯化氨基修饰的寡核苷酸。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将1mg染料SE溶解在100μLDMSO中（如果可能，> 10mg / mL）。将小瓶侧面的溶液原液离心至小瓶底部。

注意：在开始缀合之前准备DMSO染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMSO染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1在搅拌或摇动（保持反应混合物避光）的同时向染料溶液（B，20-50μL）中加入寡聚物溶液（A，100μL）。

3.2在室温下在旋转器或振荡器上旋转或摇动反应混合物4-6小时。

注意：在第一个小时内每10分钟轻轻涡旋一下小瓶，以确保反应溶液保持充分混合。不要剧烈混合，因为材料可能留在小瓶的两侧。六小时后，应标记50-90％的胺修饰的寡核苷酸分子。如果更方便的话，反应可以孵育过夜。然而，在大多数情况下，过夜孵育不会导致更高的标记效率。

4.纯化染料 – 寡糖结合物

4.1通过乙醇沉淀标记的寡核苷酸进行初步纯化

4.1.1将20μL（一般十分之一反应溶液体积）的3M NaCl和300μL冷无水乙醇（通常为两个半反应溶液体积）加入反应小瓶中。

4.1.2充分混合溶液并将其置于-20℃下30分钟。

4.1.3将该溶液在微量离心机中以10,000至15,000×g离心30分钟。

注意：如果离心时间不够长，可能会导致样品丢失。

4.1.4小心取出上清液，用冷的70％乙醇冲洗沉淀1-3次并短暂干燥。

注意：一些未反应的标记试剂可能在反应过程中沉淀或可能粘在反应瓶的壁上。在离心之前，通过大量涡旋混合将该材料完全再溶解。重新溶解标记试剂可确保沉淀的寡核苷酸少被未反应的标记物污染。

4.2通过HPLC或凝胶电泳进行终纯化

使用Tide Fluor 染料标记肽

        以下方案已经过优化，用于标记10 mg仅含有一个游离氨基的专利肽（MW~2000）。您需要根据您的实验，调整实验方案。

1.制备肽溶液（溶液A）

1.1将肽（~10 mg）溶解在DMF（~1 ml）中。

注1：肽必须用碱如三乙胺或碳酸钾中和。

注2：避免使用含有伯胺的缓冲液，如Tris，因为它们与胺反应性化合物竞争结合。

2.准备染料溶液（溶液B）

2.1通过上下吸移将5mg染料SE溶解在500μLDMF中（如果可能，> 10mg / mL）。

注意：在开始缀合之前准备DMF染料溶液。染料溶液的长期储存可降低染料活性。任何含有染料的溶液都应避光。我们不建议您存储DMF染料溶液以备将来使用。

3.运行共轭反应

3.1向染料溶液（B，500μL）中加入肽溶液（A，1mL），搅拌或摇动（保持反应混合物不发光）。

3.2在室温下搅拌反应混合物4-6小时。

4.纯化染料 – 肽缀合物

4.1浓缩反应溶液并在C18柱上纯化，得到所需的缀合物。通过HPLC分析级分，合并> 97％纯度的级分并冻干。

注1：HPLC纯化条件：TEAB缓冲液（三乙基碳酸氢铵，0.25mmol，pH = 7.0-8.0）用作缓冲液A，乙腈用作缓冲液B. HPLC在60分钟内从0％B至30％B进行（流速：100毫升/分钟）。

注2：操作过程中避免强光。

参考文献

Fluorescent DNA: the development of 7-deazapurine nucleoside triphosphates applicable for sequencing at the single molecule level
Authors: Seela F, Feiling E, Gross J, Hillenkamp F, Ramzaeva N, Rosemeyer H, Zulauf M.
Journal: J Biotechnol (2001): 269

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