Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光 价格 3534
产品规格

200 Tests

产品货号

Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光

产品参数
Ex (nm) 510 Em (nm) 525
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测辅酶A的试剂盒,辅酶A(CoA)是所有形式的细胞生命中的通用和必需的辅因子,在许多生物合成,能量产生和降解途径中充当主要的酰基载体。它在脂肪酸,丙酮酸氧化和柠檬酸循环的合成和氧化中起重要作用。 CoA的测量是研究许多生物系统中的生物过程和事件的基本任务之一。有一些试剂或检测试剂盒可用于定量生物系统中的CoA含量。现有的商业套件要么缺乏灵敏度,要么程序繁琐。我们的Amplite 荧光CoA 定量分析试剂盒提供超灵敏荧光测定法,通过检测CoA中的-SH基团来定量CoA含量。我们在该试剂盒中使用的专有荧光CoA Green 染料在与-SH反应后变为强荧光。该测定试剂盒可在100μL测定体积(40nM)中检测少至4皮摩尔的CoA。它可以在方便的96孔或384孔微量滴定板格式下以Ex / Em = 490 / 520nm进行,并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em: 520 nm
推荐孔板: 透明底板
实验方案

96孔板检测示例

概述

准备CoA测定混合物(50μL)

添加CoA标准品或测试样品(50μL)

在室温下孵育10分钟 –  1小时

监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意:在开始实验之前,在室温下解冻所有试剂盒组分

 

操作步骤

1.准备CoA标准库存解决方案:

将200μlddH2O加入CoA标准小瓶(组分C)中以制备1mM(1nmol / L)储备溶液。

注意1:强烈建议使用已用氮气喷射的ddH2O去除氧气,以制备辅酶A原液。

注意2:水溶液不稳定,会迅速降解。 应储存在2-8℃,并在1天内使用。

 

2.准备100X CoA Green 原液:

将100μLDMSO(组分D)加入到小瓶CoA Green (组分A)中以制备100X储备溶液。

注意:未使用的CoA Green 原液应分成一次性使用的等分试样,保存在-20℃并避光。

 

3.准备CoA Assay混合物:

将50L 100X CoA Green 储备溶液(来自步骤2)加入5mL测定缓冲液(组分B)中,并充分混合。

 

4.准备CoA标准品的连续稀释液(0至30μM):

4.1将30μLCoA标准储备溶液(来自步骤1)加入970L测定缓冲液(组分B)中以产生30μM(30pmol / L)CoA标准品。

注意:稀释的CoA标准溶液不稳定,应在4小时内使用。

4.2取200μL30μMCoA标准溶液,用Assay缓冲液(组分B)进行1:3连续稀释,得到10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释的CoA标准品。

4.3将CoA标准品和含CoA的测试样品加入到实心黑色96孔微孔板中,如说明书中的表1和2所示。

注意:根据需要处理细胞或组织样本。

 

5.运行CoA测定:

5.1将50μLCoA反应混合物(来自步骤3.1)添加至CoA标准品的每个孔,空白对照和测试样品(参见步骤4.3),以使总CoA测定体积为100μL/孔。

注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLCoA反应混合物。

5.2在室温下孵育反应10分钟至1小时,避光。

5.3用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。

 

参考文献

Methods for measuring CoA and CoA derivatives in biological samples
Authors: Yugo Tsuchiya, Uyen Pham, Ivan Gout
Journal: Biochemical Society Transactions (2014): 1107–1111