使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

使用 RNA 测序对细胞类型进行分类

RNA 测序 (RNA-seq) 是一项革命性技术,改变了基因组学领域。它为研究人员揭示细胞和分子水平上发生的许多复杂过程开辟了新途径。与 DNA 测序不同,RNA-seq 通过提供任何给定时间所有活性基因的快照来深入了解基因组的功能元件。那么,这如何帮助用户对不同的细胞类型进行分类呢?请继续阅读以了解更多信息。

RNA 测序在细胞类型分类中的威力

RNA 测序已成为细胞类型分类的强大工具。它使科学家能够识别特定的细胞类型并了解它们在各种生物过程中的作用。这是因为 RNA-seq 能够分析单个细胞中的基因表达水平。许多研究领域都将从这种开创性的方法中受益,但它在研究肺纤维化等疾病方面已经显示出非凡的潜力,在这些疾病中,不同细胞群的作用尚未全了解。

单细胞 RNA 测序:游戏规则改变者

单细胞 RNA 测序 (scRNA-seq) 将 RNA 测序提升到一个新水平。它使科学家能够分析单个细胞的转录组,提供细胞类型和状态的高分辨率视图。与传统的 RNA 测序方法相比,这是一个重大进步,传统的 RNA 测序方法提供大量细胞的平均基因表达谱。

在最近一项题为“单细胞 RNA 测序揭示肺纤维化中不同上皮和间质谱系的促纤维化作用“的研究中,scRNA-seq 被用来揭示肺纤维化的复杂细胞景观。该研究使用 10x Genomics Chromium 平台进行单细胞 RNA 测序,该平台生成乳液中的单细胞凝胶珠 (GEM),用于逆转录过程以创建 cDNA。然后对该 cDNA 进行扩增并用于测序。

DeNovix 在 RNA 测序中的作用

DeNovix DS-11 FX+ 分光光度计/荧光计在这项研究中发挥了至关重要的作用。该仪器用于定量 RNA,这是 RNA 测序过程中的关键步骤。RNA的定量确保了测序过程有足够的材料,并有助于保证样品的质量。这是 10x Genomics 平台单细胞 RNA 测序的准备步骤。

细胞计数是 RNA 测序的另一个重要准备步骤。在一项相关研究“模拟人类肺细胞暴露于野火中发现异常的 lncRNA 特征“中,DeNovix CellDrop™ 系统用于在 0.4% 台盼蓝 1:1 稀释液中对人类永生化支气管气管细胞 (AALE) 进行计数,并在其死亡前 24 小时进行计数。直接烟雾暴露(DSE)。暴露于气液界面 (ALI) 室后,细胞用于 RNA 测序分析,以识别 IncRNA 的变化。结果表明烟雾成分对于野火烟雾的分子效应的重要性。具体来说: 

“我们的结果阐明了化学成分(以及地理来源)在评估野火烟雾暴露可能导致的呼吸系统健康风险方面的重要性。我们使用通过实验生成的 RNA-seq 数据进行公正的分析,旨在识别差异表达的转录本,在这里,通过严格和全局的分析,我们证明不同的野火烟雾会诱导 lncRNA 的异常表达。”

机器学习和 RNA 测序

机器学习是另一种越来越多地与 RNA 测序结合使用的工具。通过训练已知细胞类型的数据,机器学习算法可以根据细胞类型的基因表达谱对细胞类型进行分类。这可以大大提高细胞类型分类的准确性和效率。

RNA测序的应用

RNA-seq 的应用广泛且多样。从了解疾病中细胞群的复杂性到发现选择性剪接变体,RNA-seq 是现代基因组学库中的多功能工具。

RNA 测序的未来

随着新技术和方法的不断开发,RNA测序的未来是光明的。对不同 RNA 分子及其表达水平的研究不断增长,这将与 RNA-seq 的进步契合,并扩大我们可以理解的细胞类型的数量。 

在 DeNovix,我们很自豪能够成为这个令人兴奋的领域的一部分。我们邀请您探索我们的产品和服务范围,并与我们一起突破 RNA 测序的可能界限。使用我们的组合分光光度计/荧光计和开创性的自动细胞计数器,用户可以优化 RNA 测序的准备步骤,以保证最高的质量。我们可以一起继续解开细胞的秘密,并在分子水平上增进我们对生命的理解。

MTS细胞活力分析试剂盒TBS2004


MTS细胞活力分析试剂盒

简要描述:TribioScience的MTS细胞活力检测试剂盒是一种比色方法,用于在增殖和细胞毒性检测中灵敏地定量活细胞。MTS细胞活力分析试剂盒

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品牌 其他品牌 货号 TBS2004
供货周期 一个月

MTS细胞活力分析试剂盒

TribioScience的MTS细胞活力检测试剂盒是一种比色方法,用于在增殖和细胞毒性检测中灵敏地定量活细胞。该方法基于活细胞对MTS四唑化合物的还原,生成可溶于细胞培养基的有色甲产物。这种转化被认为是由代谢活性细胞中的NAD(P)H-依赖性脱氢酶进行的。活细胞产生的甲染料可以通过测量490-500 nm处的吸光度来定量。该试验可用于测量响应生长因子、细胞因子、促有丝分裂原和营养物等的细胞增殖。它还可以用于分析细胞毒性化合物,如抗癌药和许多其他毒性试剂和药物化合物。TribioScience的MTS检测是通过将试剂直接添加到细胞培养基中进行的,而无需常规MTT检测所需的间歇步骤。此外,这种高通量分析不需要洗涤或溶解步骤,可以在96孔微量滴定板中进行。

应用程序

  • 细胞因子、生长因子和营养素的作用。
  • 细胞毒性和细胞凋亡:评估有毒化合物、抗癌抗体、毒素、环境污染物等。
  • 药物发现:高通量筛选有毒和抗癌药物。

关键特征

  • 简单安全:单一均质溶液,非放射性检测。
  • 灵敏准确:低至950个细胞都可以准确定量。多孔微孔板读数器。
  • 方便和高通量:“添加-培养-测量”型分析。涉及免清洗和试剂转移步骤。

套件组件和存储:

名字
单位尺寸
MTS分析试剂 20毫升
在–20°C下储存
保质期:收货后12个月。

MTS细胞活力分析试剂盒

细胞复苏时血清更换注意事项及步骤

细胞复苏时血清更换注意事项及步骤

血清更换注意事项及步骤

一、推荐在复苏时步骤:

1.首先准备一只15ml离心管,加入3倍以上体积培养基(含10%澳范血清,1%青链霉素的适配培养基,具体培养基类型查询ATCC)。

2.将需要复苏的冻存管放于37℃水浴锅中(液面没过冻存液),并持续轻柔晃动冻存管,直至冰晶消失。

2.迅速转移细胞至无菌操作台,酒精棉球擦拭干净冻存管表面后开盖。

3.轻柔地将细胞转移至已经准备好的无菌离心管,800-1000g离心5min(不同离心机离心力不同,请选择合适离心力),弃去上清,用上述培养基重悬细胞,放入37℃,5%二氧化碳培养箱培养。并隔天更换培养基。

二、对于对数生长期的细胞,推荐按梯度更换血清:

         将上述培养基与之前所使用培养基按1:1混匀后,采用换液法更换培养基。持续培养1代后更换为只含10%澳范血清的培养基。(其余所需物质照常添加)

三、不推荐直接更换血清:

        可能导致细胞营养不良,形态变皱缩/纤细,代谢和活性相关表型改变。

血清储存及化冻

储存:在 -15°C到-20°C低温冰箱血清的保存期限为5年。

 

解冻:第一步:从-40°C–80°C超低温冰箱取出后需在 -20°C冰箱平衡48小时。

           第二步:立放与水平摇床并开启摇床。若解冻血清的时候无法使用摇床则在室温下融化,前半小时内每隔5分钟-10分钟轻微晃动血清使其瓶底及瓶身周边的纤粘蛋白融化。

4度冰箱解冻血清容易造成析出并丢失贴壁因子、会影响细胞的培养。

 

解析:血清中含有冷不溶蛋白较多如血清中纤粘蛋白(fibronection)属于冷不溶蛋白,在4度解冻时,不会溶解,是以沉淀状态在血清中。

           冰箱存在自动化霜功能,冰箱在化霜过程中箱体处于加热状态、贴近箱体底部及周边储存的试剂容易被溶解反复冻融影响质量。实验室使用化霜冰箱的时候存放试剂时需避免直接存放在锡箔纸上面。

常见细胞污染分类和污染的处理

常见细胞污染分类和污染的处理

常见细胞污染

细胞污染——培养物出现浑浊、混浊。培养液pH值升高,液黄。细胞异常的形态,如胞质内细菌吞噬体。细胞的生长速率减缓,对数生长期变得不规律。异常的细胞死亡或细胞溶解情况。

 

真菌污染——培养液可能出现异味。培养皿内有异常的颜色、纹理或斑点。细胞显示出不正常的细胞形态,如真菌吞噬体或真菌丝状体。细胞的生长速率可能受到抑制,细胞数量不断减少。

 

支原体污染——支原体污染通常不会导致明显的细胞培养液变化。因此,支原体污染通常需要PCR或DNA杂交来检测。可能出现感染迹象,如出现包涵体或囊泡。细胞的生长速率减缓。

 

常见污染处理

因污染会改变细胞表型,在细胞种子充足及排除污染因素的情况下,首先丢弃污染细胞,重新复苏。

在未检测的情况下沿用当前细胞试剂及耗材可能导致污染扩散,应及时灭菌或丢弃。

 

如果怀疑细胞培养受到污染,应立即采取行动来确认并解决问题。常见的处理方法包括:

 

1.隔离:将受污染的培养物隔离,并最后处理污染细胞,以防止污染蔓延到其他培养物中。

 

2.污染源排除:查找和消除污染的来源,可使用无抗LB摇菌培养或污染检测试剂。

 

3.更换培养液:将受污染的培养液更换为新的培养液,细菌污染添加敏感抗生素如氨苄青霉素,真菌添加两性霉素B,支原体添加氧氟沙星以控制污染。

 

4.细胞重新传代:如有必要,将细胞重新传代到新的培养皿中,离心速度低于平时,200-300g。

 

5.污染检测:进行污染检测,以确认污染的类型和程度,从而采取适当的措施。

 

操作手册

● 原代细胞提取

● 血清更换注意事项及步骤

● 血清储存及化冻

● 持续更新中

 

原代细胞提取-1

固体组织样品(肝,肺,肿瘤等)

1.分离组织后立即移入超净台操作(<20min),或放入组织保存液中四度保存(不超过48h)。

注意:以下步骤均需无菌操作,且保持低温!

2.取一无菌小皿,加入3ml预冷的PBS,放入组织清洗。重复此步骤一次。

3.用无菌剪和无菌镊(高温高压灭菌)去除脂肪或坏死区域等非目标组织。

4.转移组织块至一无菌15ml/50ml离心管中,加入组织体积10倍的advanced DMEM/F12培养基(缓冲液可自行调整,与后续培养体系一致)。离心管置于冰上,用无菌剪将组织剪成肉泥状。(此步骤注意低温)

5.四度600g离心5分钟,去上清,加入消化液(浸没组织),37℃摇床(800rpm)消化15min,视解离状态调整消化时间,一般不超过45min。(消化液需视组织类型自行调整。一般组成为胶原酶1和4,浓度为400-1000U/ml,以及核酸酶5-20U/ml,可选择添加10uM ROCK抑制剂以提高组织活率。)

 

原代细胞提取-2

6.消化结束立即冰上,加入体积6%的血清终止消化,四度离心弃上清,用巴氏管吸取1-2ml全培养基重悬后细胞滤网过滤,根据后续目的和细胞类型选择滤网大小(类器官需要细胞团一般选择较大的100um,建库的单细胞悬液一般选择70um或更小)。

7.视上一步沉淀颜色选择是否裂红,裂红至沉淀无明显红色即可。裂红液现配,至少10ml,常温避光裂红10min。

8.用巴氏管充分混匀细胞悬液,吸取10ul细胞悬液与2x台盼蓝混匀后计数板计数。一般细胞活性>85%为达标。如不达标,则低速(200-300g)四度离心后弃上清,重悬,再次计数和测量活性,直至达标。)

9.计算所需细胞数量并进行下一步操作,直接种板培养,点胶,或上机等。

 

液体样品(血液,胸水,腹水等)

1.直接600g四度离心5min后弃上清,用medium重悬清洗两次。

2.过滤可选,直接进入裂红判断步骤

3.后续步骤同上。

常见培养基类型及适配细胞

常见培养基类型及适配细胞

常见培养基类型及适配细胞

DMEM

Dulbecco's Modified Eagle Medium)

 

DMEM是由美国科学家Eagle于1959年改良的,多用于上皮细胞,神经元、胶质细胞、平滑肌细胞。

        成分:DMEM包括基础培养基,如高糖量的DMEM和低糖量的DMEM。DMEM包含的主要成分包括高浓度的葡萄糖、氨基酸、维生素、盐类、L-谷氨酰胺和胰酶抑制剂。适用范围广。

MEM(Minimum Essential Medium)

        MEM最早由Eagle于1959年开发。可用于成纤维细胞和原代大鼠星形胶质细胞等。

        成分:MEM为低基本培养基。MEM可以具有不同的变种,如Eagle's MEM和Earle's MEM,它们在成分和用途上略有不同。

RPMI-1640(Roswell Park Memorial Institute Medium 1640)

 RPMI-1640最早是由Moore等人1966年开发的,多用于淋巴细胞和肿瘤细胞的培养。

        成分:RPMI-1640是一种富含氨基酸、维生素和微量元素的培养基。

F12(Ham's F-12 Nutrient Mixture)

  F12培养基最早是由Ham于1965年开发的。多用于MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞、人内皮细胞。

        成分:F12包括氨基酸、葡萄糖、核酸、维生素和盐类。另有是 DMEM 和 F12 的 1:1 混合物的DMEM/F-12 培养基。

什么是细胞外囊泡?

什么是细胞外囊泡?

细胞外囊泡 (EV) 是细胞分泌的小型膜结合颗粒,被认为充当细胞信使,将货物从一个细胞运送到另一个细胞。 EV 有多种亚型,其功能、货物和尺寸各不相同,直径范围约为 30-1000 nm。最小的 EV 类型是外泌体,其大小约为 30-150 nm。 EV 起源于称为多泡体 (MVB) 的细胞区室,其本身源自内体的内陷。当 MVB 与质膜融合并释放其货物时,囊泡就会被释放。

在生物医学研究中,电动汽车及其货物被用作癌症和其他疾病的诊断生物标志物。可以使用超速离心、PEG 沉淀和免疫捕获珠等技术从血液或其他生物液体中分离 EV。

EV 膜含有源自原始细胞质膜的跨膜蛋白,其中通常包括四跨膜蛋白家族的蛋白(例如 CD9、CD63 和 CD81)。 EV 内部含有蛋白质和 RNA 等细胞质成分。 EV 成分可以使用 RNAseq、蛋白质印迹和流式细胞术等方法进行分析。为了通过流式细胞术进行表征,研究人员可以使用对 EV 成分(如膜和核酸)进行染色的染料,以及与四跨膜蛋白或其他感兴趣的蛋白质结合的抗体。

人类软骨细胞培养基概述

人类软骨细胞培养基概述

概述

干细胞软骨细胞培养基是从人间充质基质细胞生成软骨细胞的优化分化培养基。适用于扩张型干细胞分化能力的分析或质量控制,或 体外的 研究了干细胞间质干细胞分化的过程,包括基因表达或蛋白质特征分析。


在资源选项卡上可以找到有关MBA文化的详细方案。


详细产品信息

软骨细胞在骨的发育和愈合以及其他结构组织中起着重要作用。因此,软骨细胞是组织工程学研究的焦点,研究的疾病包括:骨软骨瘤、不愈合性骨折和骨关节炎。阐明软骨细胞的发育和调节机制(软骨发生)仍然是这些研究领域的一个关键重点,因此,需要利用优化的培养基来有效地、重复地生成软骨细胞。


在茎软骨质培养基中培养21天后,染有毛细胞(红色)和核(蓝色)的软骨细胞。

人类软骨细胞培养基概述

biorep 自动胰岛素细胞计数仪


biorep 自动胰岛素细胞计数仪

简要描述:Biorep Technologies公司成立于1995年,最初是一家医疗设备生产商,产品用于辅助医生进行胰岛分离和胰岛细胞移植。biorep 自动胰岛素细胞计数仪

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品牌 其他品牌 价格区间 面议
产地类别 进口 应用领域 医疗卫生,化工,生物产业,制药,综合

biorep 自动胰岛素细胞计数仪

Biorep Technologies公司成立于1995年,最初是一家医疗设备生产商,产品用于辅助医生进行胰岛分离和胰岛细胞移植。现在,Biorep的设备已经被国内和世界的糖尿病研究实验室使用。Biorep今后将继续致力于设计用于糖尿病治疗研究的工具。

胰岛计数器用于生成分离胰岛样本量的细胞计数。ICC系统使用户能够在不到一分钟的时间内可靠、重复地量化胰岛当量(IEQ)。胰岛定量基于临床胰岛移植联盟 (CIT) 方案。

该软件产生颗粒数(IPN),IEQ,并根据细胞面积按大小组对细胞进行排序。

此外,用户还可以获得:所覆盖的区域、B因子、IEQ贡献饼图和分布统计,例如尺寸组直方图。此外,只需按一下按钮即可生成 Excel® 报告。该软件允许图像存档,用于文档、培训和验证目的。

biorep 自动胰岛素细胞计数仪

cytiva 经典细胞培养基SH30003.04


cytiva 经典细胞培养基

简要描述:cytiva 经典细胞培养基
高葡萄糖 HyClone™ Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM):粉末——支持研究和生物制造细胞培养过程中的细胞生长。

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cytiva 经典细胞培养基

高葡萄糖 HyClone™ Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM):粉末

支持研究和生物制造细胞培养过程中的细胞生长。

原材料成分经过严格的质量控制测试筛选,以确保批次间的一致性。

  • 产品使用纯化的工艺水进行水合并进行无菌过滤。

范围 DMEM/HIGH,含 L-谷氨酰胺,不含丙酮酸钠
添加剂 含:L-谷氨酰胺、葡萄糖 不含:丙酮酸钠、碳酸氢钠 
保质期 36个月 
贮存 2°至8°C,避光、防潮 
消毒 非无菌 
格式 粉末 
包装尺寸 2×5升 

















产品产品           名称

SH30003.02    DMEM/HIGH,含 L-谷氨酰胺,不含丙酮酸钠

SH30346.03    DMEM/高葡萄糖,不含 L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、钙、镁

SH30003.04    DMEM/HIGH,含 L-谷氨酰胺,不含丙酮酸钠

SH30346.01    DMEM/高葡萄糖,不含 L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、钙、镁

SH30003.03    DMEM/HIGH,含 L-谷氨酰胺,不含丙酮酸钠


海金畔生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌

3100 型细胞内静电计


3100 型细胞内静电计

简要描述:细胞内放大器——3100 型细胞内静电计MODEL 3100 INTRACELLULAR ELECTROMETER
细胞内和细胞外记录。电流钳位。染料注射。
3100 型可以在教学预算内实现研究质量的录音。
交流或直流信号增益、滤波、容量补偿
低噪声1.8 µV 峰峰值10 Hz 至 10 kHz

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细胞内放大器:3100 型细胞内静电计是一款简单易用的低成本全功能细胞内放大器。您可以通过教学预算购买仪器来实现研究质量的录音。

常见应用包括但不限于:

  • 细胞内记录

  • 低噪声细胞外记录

  • 电流钳

  • 染料注射

放大器电流补偿电路包括双瞬态控制,可在膜记录期间对瞬态抑制进行极其精确的调整。其直流平衡控制无需外部电桥或差分输入示波器。直流偏置控制可消除高达 ±1V 的偏置。

内部方波发生器提供 100Hz 电流脉冲来确定电极电阻。容量补偿可调整高达35pF的电极电容。通过使用头部探头上的驱动屏蔽连接器可以减少额外的杂散电容。

3100 型使用先进的电容“Ringer”来清洁电极头端并增强神经元的膜穿透性。发送到电极的脉冲振荡的振铃幅度和频率可以调节。研究人员可以使用低通滤波与线路频率陷波滤波器相结合来减少无关频率和外部线路噪声。

电流注入系统允许内部产生和外部产生的电流。该电流可设置为连续或瞬时注入。电流总和可由外部 TTL 逻辑信号源选通。

放大器的小尺寸及其远程电源提供了将放大器放置在靠近实验装置的位置的优势。例如,放大器可以放置在法拉第笼内,以最小化电源线干扰。

  • 噪声(10 Hz – 50 kHz):18 µV,均方根短路; < 350 µV,20 MΩ 源

  • 输入阻抗:10 13 Ω;电容可调至零

  • 偏置电流:可调至零

  • 电压增益:x1 和 x10

  • 容量补偿:-4 pF–35 pF

  • 直流偏移:±1V

  • 最大内部电流:1 µA

  • 外部电流:100nA/V;最大 10V

  • 电极测试:100 Hz,10 nA; (即10 mV/MΩ电极电阻)

  • 振铃:0 – 10 V 双相,2 – 8 kHz

  • 外部电源低噪音

上海金畔生物科技有限公司

  1. 国内试剂耗材经销代理。

  2. 国外试剂的订购。可提供欧美实验室品牌的采购方案。

  3. 提供加急物流处理,进口货物,最快交期1-2周。

  4. 进出口货物代理服务。

  5. 公司代理众多有名生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品品牌

条件细胞培养基简介

条件细胞培养基简介

什么是条件媒体?

培养的细胞通常需要添加特定的生长因子以实现增殖、分化或存活。然而,一些重组蛋白的使用成本昂贵。这要么是因为它们难以制造(因此成本高昂),要么是因为它们需要大量。

生产纯化重组蛋白的大部分成本是纯化步骤。然而,如果重组蛋白由生产细胞分泌到周围介质中,则可以避免纯化。为了使细胞培养变得经济实惠,许多研究人员选择通过将培养基与生产细胞一起孵育,将这些重组蛋白直接添加到细胞培养基中。在用生长因子调节培养基后,可以立即将其储存或转移到需要它的感兴趣的细胞上。这种含有细胞分泌的成分且另一组细胞需要的成分的培养基称为条件培养基。

条件细胞培养基简介

Wnt-3a 和 R-Spondin 1 经常通过调节添加到培养基中。重组 Wnt-3a 很难制备,因此价格昂贵。 R-Spondin 1 并不昂贵,但细胞培养中通常需要高浓度 (0.5-1.0 ug/ml),这意味着需要大量使用。

考虑到经济上可行的重组蛋白替代品,花费数小时培养细胞和分析条件培养基的科学家可能会改变选择。此外,使用这种方法增加了另一个变量,因为用于调节培养基的细胞会将代谢物分泌到培养基中并耗尽营养物质。实际上,接受培养基的细胞正在获得二手培养基,尽管分泌的生长因子有所改善。

那么有没有更好的解决方案呢?增长因子成本的部分驱动因素是浪费。添加到培养基中的大部分生长因子在到达细胞之前就会降解。对于 3D 培养物来说,这个问题尤其严重,因为细胞被保存在水凝胶中,生长因子无法有效迁移。在 CellGS,我们一直与美国、欧洲和亚洲的实验室合作,研究 PODS的使用 ,以提供更低成本、更有效的条件培养基替代品。

PODS在细胞附近缓慢释放蛋白质,从而减少了需要添加的生长因子的频率,并使可用性曲线变平,减少了细胞的压力,从而提高了细胞的质量。

pluriselect:细胞过滤器


pluriselect:细胞过滤器

简要描述:pluriStrainer®是一种筛选设备(或细胞过滤器),适用于需要过滤和纯化液体的广泛实验室应用。pluriselect:细胞过滤器

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pluriselect:细胞过滤器

pluriStrainer®是一种筛选设备(或细胞过滤器),适用于需要过滤和纯化液体的广泛实验室应用。其设计特点是改善了通风,避免了智能样品制备的堵塞。pluriStrainer®可堆叠,允许不同网目尺寸的直接过滤,也可以倒置以回收筛过的材料。对于大样本量,可以将其与漏斗相结合。它适用于所有主要品牌的50毫升离心(锥形)管。多功能过滤器®和连接环的组合允许使用支持过滤的低压。此外,可以阻挡通过筛网的流动并将液体滞留在筛网顶部。筛网顶部的液体可用于样品制备和培养,如组织解离或用细胞裂解试剂(如缓冲液RLT、TRIzol®)处理细胞。

应用

消化乳腺组织和类器官后获得真正的单细胞悬浮液

 

使用polyriBead技术富集特定细胞

 

骨髓、胰腺、胸腺、淋巴结和其他血细胞的单细胞悬浮液的制备

 

细胞与其他原发组织的分离

 

用于流式细胞术(FACS)的真实单细胞悬浮液的制备™)

 

更快、更容易地替代纱布过滤

 

复杂和粘稠液体的筛分(与连接器环和真空注射器结合使用)

 

细胞/细胞因子的短时间孵育(与多能干细胞和连接环结合)

pluriselect:细胞过滤器

3D细胞打印技术的应用

3D细胞打印技术的应用

过去15年左右,梦想推动了生物3D打印领域的投资和研究。生物3D打印技术是根据仿生形态、生物结构或生物功能、细胞的微环境等要求,采用“三维打印”技术制造生物单元(细胞/蛋白质/DNA等)和生物材料。 “技术手段制作个性化的体外三维结构模型或三维生物功能结构。

其科学研究、技术应用和产业发展广泛涉及以下方面:生物3D打印设备和生物墨水的开发与制造、医疗器械制造、复杂组织工程支架制造、功能结构制造等。
生物3D打印作为一个新兴的交叉前沿技术领域,目前受到许多国家战略重视

生物3D打印技术的应用

根据所用生物材料的不同特性,清华大学生物3D打印中心将其分为4个等级。

1级

无生物相容性要求的打印材料可用于3D打印体外病例模型、手术导板、3D打印体外假肢或骨科辅助器具等,这一层面的应用极大发挥了3D打印在个性化定制方面的优势,帮助相关患者量身定制相关手术模型或治疗工具,让患者得到更好的治疗。

2级

印刷材料采用生物相容性但不可降解的材料。这种印刷产品可以用作体内的长期植入物。该材料可以是例如钛合金金属,或惰性聚合物材料。 T3D打印金属植入物制造商(爱康医疗)已获得多个CFDA上市许可,产品已应用于临床。

3级

打印具有良好生物相容性和可降解性的生物材料,主要应用领域是打印组织工程支架。此外。它要求打印的植入物不仅要与身体相容,还要具有可生物降解的特性,并能在一段时间内促进体内有缺陷的组织的生长和愈合。

清华大学生物制造中心的3D打印低温沉积制造技术,融合了生物3D打印和冷冻干燥显微造孔技术的优点。既可以实现宏观可控孔隙(100微米),又可以实现微观微丝孔隙。

3D打印组织工程支架提高了支架内的细胞种植率,更有利于支架内部细胞的生长和组织功能的实现。在骨组织工程支架领域得到良好应用,并开始转化为临床。

4级

细胞3D打印技术可以直接以细胞、蛋白质等生物活性物质(蛋白质、DNA、生长因子)为基本单位。它直接构建体外生物结构、组织或器官模型。

细胞3D打印的技术挑战

细胞(生物)3D打印技术是目前前沿的技术,也是器官打印潜力最大的技术。在打印过程中,细胞不可避免地会承受一定的机械力,甚至造成一定的损伤。因此,细胞3D打印技术的实现充满了各种技术挑战。细胞3D打印的技术挑战主要包括以下几个方面:

材料可以打印吗?

首先,我们要选择生物3D打印机可以打印的生物材料/生物墨水。不同的印刷工艺对生物链接的粘度有不同的要求。粘度太低或太高的生物墨水都难以打印。因此,细胞3D打印的首要挑战是寻找可打印的生物墨水。

可以构建 3D 结构吗?

并非所有印刷生物墨水都可以构建 3D 结构。为了打印高分辨率的3D复杂细胞结构,细胞印刷油墨需要增加印刷油墨的粘度。它需要增加生物墨水的凝胶容量以保持堆叠结构的机械性能。

细胞能存活吗?

增加细胞印刷油墨的粘度将导致印刷过程中单元的剪切力增加。并且会导致打印后细胞的存活率下降。因此,在印刷过程中控制细胞印刷油墨的粘度(不能太高也不能太低)。而找到适合细胞打印墨水的粘弹性区间是实现良好细胞3D打印的重要一步。如良好的成型性和生物性能。

功能齐全吗?

新打印的3D细胞结构只是细胞和生物材料的3D组合,并不形成组织特征。因此,打印的3D细胞结构必须经过适当的培养条件才能形成组织功能。这一环节需要保证生物材料的生物相容性、机械性能和功能性、充足的培养基供应和充足的废物排放。甚至某些组织也需要特定的生物反应器来通过流体、力或电刺激来实现其功能。

综上所述,细胞3D打印充满了不同甚至矛盾的技术挑战,需要多学科的背景知识和经验来解决这些问题。

细胞3D打印技术的四大分类

细胞3D打印技术的四大分类

喷墨细胞打印技术

喷墨细胞打印是基于普通喷墨打印机的打印原理,利用热气泡或压电体积变化挤压墨盒中的细胞墨水,离散地产生并喷射含有细胞的细胞墨水液滴[1]。喷墨打印机的喷嘴直径只有几十微米,可以进行高精度的细胞打印。然而,由于喷嘴直径相对较小,喷墨细胞打印很难离散地打印高粘度的细胞墨水,这使得该技术很难直接打印3D生物实体模型。此外,热气泡的产生和压电体的变形肯定会损坏电池,需要更好地控制打印工艺参数。代表性的研究机构包括德克萨斯大学Boland教授的研究组。

微挤压单元3D打印技术

微挤压细胞三维打印技术利用机械力或气压通过微喷嘴直接挤压生物材料和细胞,构建三维生物结构[2,3]。由于常用的微挤压细胞打印机的喷嘴直径在数百微米,打印精度一般,但挤压工艺可以打印高粘弹性的生物墨水,易于实现3D生物实体的构建。此外,该技术在牺牲精度的同时增加了打印的每个离散单元的尺寸,从而间接提高了打印效率和细胞存活率。代表性研究机构包括清华大学生物制造中心孙伟教授研究组和哈佛大学Jennifer Lewis教授研究组。

激光直写细胞打印技术

激光直写细胞打印技术是指利用光压力控制细胞排列成高精度的空间结构。其精度可以达到单个细胞的数量级。然而,精度的提高也导致了成形效率的显着下降,而且该工艺也难以打印粘度较高的生物材料,降低了其打印三维生物结构的能力[4]。代表性的研究机构是明尼苏达大学David Odde教授的研究小组。

立体光刻单元3D打印技术

三维光刻细胞三维打印技术通过激光或紫外光在空间的扫描运动,实现含有光刻胶的细胞的三维凝固成型,创造出预先设计的三维生物结构[5] 。尽管这项技术灵活性很高,但其成型效率却并不如预期。有研究人员不再利用细小的激光光斑扫描三维固化成型,而是利用投影仪的原理进行曲面投影,各层同时固化成型。根据投影机类型,制程可分为LCD投影机式和DMD投影机式。

两者的本质区别在于,液晶投影机首先将光源分解为3种单色光,然后分别通过三片液晶面板控制这三种单色光的亮度,合成所需的光线和图案。 ,而DMD仅使用可以反射光源的数字阵列显微镜来实现。该工艺的光敏水凝胶是预先储存在成型室中的,造成材料浪费,且难以制备多种细胞异质结构,且大多数光敏水凝胶具有不同程度的毒性,使得细胞存活率较低。 。代表性的研究机构是加州大学圣地亚哥分校陈绍辰课题组。

声驱动细胞打印技术

声驱动细胞打印技术是一种利用声波振动产生液滴喷射的方法,其精度可低至10μm左右。然而,这一过程也是一种液滴喷射方法,很难喷射高粘度的生物材料,使得打印三维生物结构的能力受到限制[6]。代表性研究机构包括美国斯坦福大学Demirci教授研究组。

综上所述,各种细胞打印方法各有千秋,但对于三维复杂异质生物结构,微挤压细胞三维打印技术更适合,更容易构建多细胞三维模型。效率更高,细胞存活率高,打印精度(100微米)也能满足一般科学研究的需要。因此,目前市场上主流的细胞3D打印机大多基于该技术。代表企业有德国Envision TEC、瑞士RegenHu、中国SunP Biotech、Genova等。

细胞3D打印技术的四大分类
3D生物技术打印眼细胞

美国DeNovix细胞计数器


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品牌 DeNovix 供货周期 两周
应用领域 环保,化工,生物产业,能源

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描述:

可消除常规细胞计数中的塑料载玻片和笨重的血细胞计数器。具有双重荧光和明场光学器件,可变高度的样品室以及功能强大,易于使用的分析软件。这些仪器可在的细胞密度,细胞类型和应用范围内实现快的细胞计数,活力评估和GFP转染效率测量。

DirectPipette技术

CellDrop自动细胞计数仪系列将微体积分光光度计的熟悉的“装载,测量和擦拭清洁”功能引入细胞计数。传统的塑料载玻片或玻璃血细胞计数器被两个 光学蓝宝石表面取代。它们通过无标度的机构彼此平行放置,从而形成高度定义的腔室。将10µL细胞悬液吸移到培养室中,进行分析,然后用干的实验室擦拭布将其擦干。强大的实时取景图像可立即验证清洁是否成功。

在max宽的像元尺寸和密度范围内准确

使用常规计数,具有高或低细胞密度的样品需要费时的稀释或浓缩步骤。CellDrop自动细胞计数仪的可变高度室可在max宽的细胞密度–7 x 10 2–2.5 x 10 7上实现准确的计数。腔室高度也可以调节,以容纳直径范围为4至400μm的几乎所有腔室。

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