AMI 运动记录仪的工作原理介绍

AMI 运动记录仪的工作原理介绍

以下部分旨在解释一般技术并定义设备使用的术语。

每次活动记录仪移动时,运动记录仪加速度计都会产生一个电压。该电压被传递到运动记录器的第二个基本元件,即信号处理。在这里,原始信号根据专有技术进行放大和滤波。如何处理这个经过调节的信号取决于运动记录器采用的操作模式。典型地,基于操作模式的导出信息在被存储在设备的存储器中之前,在被称为时期的用户可选择的时间段内被累积。一分钟周期是标准的,并且与所有睡眠估计算法兼容。周期性腿部运动(PLM)算法需要2秒钟的时间(和ZCM模式)来采集单个腿部运动。一旦内存已满,数据收集就会停止。除非Motionlogger已重新初始化,否则内存永远不会被覆盖。

操作模式

并非每种型号都有每种可用模式。以下是对最常见操作模式的讨论。经调节的加速度计活动信号可以多种不同方式进行处理,以提供关于受试者运动的信息。

AMI 运动记录仪的工作原理介绍

ATOD模式

这代表以采样速率收集整个调理模拟波形的能力。(在标准运动记录器中不可用)

过零(ZC)模式

将经调节的传感器信号与固定的灵敏度阈值进行比较。信号电压与参考电压交叉的次数在临时存储器中累积,直到用户定义的时期长度过去。过零是运动频率的一种度量。这是使用AMI验证算法(即Cole-Kripke,Sadeh)估计睡眠数量和质量常用的操作模式

阈值以上时间(TAT)模式

在这种模式下,在一个时期内累计超过灵敏度阈值的时间量(单位时间对应于采样率)。阈值以上时间是运动时间或工作周期的衡量标准。这种模式在某种程度上与运动强度有关,但在PIM模式(见下文)开发出来后被取代。

比例积分测量模式

整流(绝对值)调节传感器信号下面积的高分辨率测量被称为PIM(比例积分测量)模式。比例积分测量是对活动水平或运动活力的测量。UCSD睡眠估计算法集能够基于PIM模式执行睡眠估计。

生命测量–通常与上述模式之一结合使用,生命测量是宽带活动信号的超高灵敏度过零衍生。它非常敏感,戴在人的手腕上不可能记录零值。这个增加的通道可以帮助确定该装置何时从手腕上取下。

光线–一些运动记录仪可以带有内置的光线传感器。通常,该设备标称校准范围为0至1200勒克斯,具有高分辨率。这允许区分睡觉时可能发生的微小光线变化(手在非常昏暗的房间中伸到床罩下),并帮助确定睡觉时间的界限。

Zero Crossing被选为操作模式,因为它能够高度准确地估计睡眠。迄今为止发表的大部分文献都在使用这种操作模式,特别是关于睡眠的主题。一些研究表明,PIM模式的高分辨率在评估睡眠方面至少是一样好的,如果不是更好的话。此外,PIM模式已被证明在能量消耗和多动的研究中非常有用。同时收集ZC和PIM对实验很有用,因为它捕获了大量关于运动的信息,而没有实际记录原始运动信号。它提供了可靠的睡眠和白天活动水平的估计。实际上,运动记录器通常受限于电池容量,而不是内存大小。因此同时记录ZC和PIM模式是很常见的。

FlexAble抗体标记试剂盒的工作原理

FlexAble抗体标记试剂盒的工作原理

FlexAble 抗体标记是通过使用高亲和力、非共价 FlexLinker 来实现的。 FlexLinker 在几分钟内与抗体紧密结合,一旦结合就不会从抗体上释放。通过添加 FlexQuencher 可以中和未结合的 FlexLinker。

使用 FlexAble 的标记反应可产生均质、结构明确、功能齐全的抗体。标记过程中未观察到抗体聚集或损失。

FlexAble抗体标记试剂盒的工作原理

FlexAble 标签套件可用于标记:

  • 来自任何供应商的一抗

  • 任何浓度的抗体

  • 任何缓冲液配方中的抗体

FlexAble 抗体标记试剂盒已使用来自不同供应商的一抗进行了验证。低浓度一抗、储存在 50% 甘油中的抗体以及补充有 BSA 等载体的抗体均适合与 FlexAble 试剂盒一起使用。

FlexAble 抗体标记试剂盒适用于任何抗体制剂。使用高亲和力 FlexLinker 进行标记不受 BSA 或甘油、含胺缓冲液或防腐剂等稳定剂的影响。

抗体缓冲液配方

FlexAble 抗体标记试剂盒适用于任何抗体制剂,无需在标记前纯化或缓冲液交换。这节省了时间和金钱,还避免了在这些过程中可能发生的抗体损失。由于 FlexAble 利用高亲和力 FlexLinker 分子与抗体进行位点特异性结合,因此结合反应不受 BSA 或甘油等载体、Tris 等含胺缓冲液等防腐剂的影响。

采用简单的两步方案,使用 FlexAble 标记抗体既快速又简单。该过程只需要大约 30 秒的操作时间,并且只需要一根移液器。将一抗、FlexLinker 和 FlexBuffer 混合在一起并孵育 5 分钟。添加 FlexQuencher 以中和未结合的 FlexLinker 并再次孵育 5 分钟。在给试管贴标签的时间内,抗体就可以使用了。

FlexAble 提供了简单的方法来多重使用同一物种和同种型的抗体。 FlexLinker 以高亲和力和特异性与一抗结合,一旦结合就不会从抗体上释放。因此,来自同一物种或同种型的抗体在用FlexAble标记后可以与样品同时孵育。尚未观察到与其他抗体同种型的泄漏或交叉结合。

PLA的工作原理

PLA的工作原理

一、邻位连接技术(PLA)的工作原理?

 Duolink®邻位连接技术(PLA)是一种高特异性、高灵敏地原位检测内源性蛋白、蛋白修饰和蛋白互作的强大工具.该技术可轻松检测和定位未改造细胞和组织内单分子级别的蛋白靶标。一般先使用不同种属来源的两种一抗检测两个蛋白靶标(图1A)。接着用一对寡核苷酸标记的二抗(PLA探针/邻位探针)结合一抗(图1B)。再加入连接寡核苷酸,当一对邻位探针足够贴近时,连接寡核苷酸会与邻位探针对互补杂交,在连接酶的作用下形成封闭的环状DNA,作为滚环扩增(RCA)的模板(图1C)。接着DNA聚合酶以PLA探针为引物,以上述环状DNA为模板,通过RCA反应合成连环序列(图1D)。这使仍与PLA探针相连的序列信号扩大1000倍,方便进行信号定位。最后,用标记寡核苷酸与扩增子内的互补序列杂交(图1E),在荧光显微镜下表现为散点(PLA信号),实现可视化和定量分析(图1F)。Duolink® PLA技术可结合免疫荧光(即绿色、红色、远红或橙色检测)或免疫组化(即过氧化物酶催化反应)检测贴壁细胞、细胞离心涂片和组织切片。此外,Duolink® PLA技术还可结合流式细胞术检测血液或悬浮细胞,也可采用多孔板(例如,96384孔板)搭配高内涵筛选成像仪进行高通量分析。Duolink® PLA 的高特异性、灵敏度和多功能性使其成为信号通路分析、药物筛选、IC50 测定和靶标验证的理想选择。


PLA的工作原理


二、DUOLINK®邻位连接技术检测EGFRHER2二聚化?

表皮生长因子受体(EGFRErbB1HER1)和人表皮受体2HER2ErbB2Neu)的二聚化是一种蛋白质相互作用(PPI)。EGFRHER2是受体酪氨酸激酶ErbB家族的成员,在细胞分裂和死亡调控中起重要作用。影响其中任意一种蛋白质的表达或活性的突变与多种癌症的发生发展有关。当配体(如EGF)结合EGFR的胞外结构域时,EGFR受体激活并自磷酸化细胞质尾区。从而与ErbB家族其他成员形成同源(EGFR-EGFR)和异源(例如,EGFR-HER2)二聚体(图2)。二聚化及之后的磷酸化发生后,会募集一些衔接蛋白,进一步激活几个胞内信号通路,最终可调节基因转录,导致肿瘤细胞的增殖、血管生成、侵袭、转移和抗凋亡。

PLA的工作原理

荧光计的工作原理

荧光计的工作原理

荧光计是用于精确定量微升 (μL) 样品中的各种生物分子(例如核酸和蛋白质)*工具。这些仪器在生命科学、环境监测、药品质量控制和生物工程应用等广泛的生化领域发挥着至关重要的作用。通过提供高灵敏度测量,荧光计能够对亚皮克浓度的样品进行定量。这篇博文将探讨荧光计的工作原理,阐明其基本机制并强调其在科学研究和分析中的重要性。

了解荧光计的功能

荧光计的工作原理是根据荧光对生物分析物进行定量。要开始该过程,需要将感兴趣的样品与特定的荧光剂结合,并使用聚丙烯管将其装入仪器中。有许多市售荧光试剂,包括核酸染料、细胞功能染料和荧光蛋白,使科学家能够根据自己的特定需求定制实验。 

荧光团具有吸收特定激发波长的光并随后以较低的能量发射或发出更长波长的光的能力。某些荧光团在与特定分析物(例如双链 DNA (dsDNA))结合时会增强荧光。通过直接将检测的荧光强度 (RFU) 与样品中所需生物分子的数量相关联,科学家可以准确测量它们的浓度。

荧光测定的灵敏度

荧光测定法是一种极其灵敏的方法,能够以低至 0.0005 纳克/微升 (ng/μL) 的灵敏度检测生物分子。此外,荧光测定法可为所需分析物提供检测,有效消除因样品污染物或未知元素可能引起的测量误差。通过根据检测中已知生物分子的荧光强度对未知物的浓度进行数学量化,科学家可以可靠地确定目标分子的精确浓度水平。

传统荧光测定法的挑战

尽管传统荧光计具有众多优点,但仍然具有主要局限性:缺乏测定独立性。这些仪器通常是预先设计的,具有有限的激发和发射通道,从而限制了荧光测定的选择。然而,DeNovix 通过设计一种新型荧光计来应对这一挑战,改变了该领域。我们的荧光计配备了四个发射和激发通道,在选择荧光检测方法方面提供了灵活性。通过覆盖广泛的激发 (375 – 635 nm) 和发射 (435 –740 nm) 光谱,这些仪器支持一系列扩展的定量分析,适用于测量 dsDNA、ssDNA、RNA、蛋白质甚至定制的浓度水平化验。

DeNovix 荧光计简介

荧光计在科学研究和分析中发挥着至关重要的作用,能够在各个领域对生物分子进行精确定量。通过利用荧光原理,这些仪器提供高灵敏度测量,使科学家能够准确确定样品中核酸和蛋白质的浓度水平。  

传统荧光计的灵活性一直受到限制,但我们 DeNovix 通过提供具有扩展检测选项的仪器,开创了荧光测定的新时代。借助我们先进的荧光计,研究人员可以探索更广泛的定量分析,确保实验中特异性和灵敏度。

在 DeNovix,我们制造专为研究应用量身定制的创新测量设备。我们为成为荧光测量仪器的供应商之一而感到自豪,我们提供荧光计技术,保证荧光测量中灵活性、灵敏度和可重复性。

DS-11系列

我们的DS-11 系列仪器将高动态范围荧光测定设备与微量吸光度能力相结合,为微升样品中的生物分子提供非常好检测。它们结构紧凑、易于使用,并允许进行全光谱紫外-可见分析和荧光,是快速核酸和蛋白质定量的理想选择。

QFX荧光计

我们提供的另一个解决方案是QFX 荧光计,适用于灵敏、可重复的荧光测定应用。它是另一种易于使用的仪器,提供直观的触摸屏界面,可实现无差错运行且无需设置。QFX 用于核酸和蛋白质定量,可与定制荧光应用程序配合使用以实现荧光团分析。与同类其他荧光计相比,QFX 在灵敏度、重现性和数据质量方面表现出色。

SELEX技术原理及特点

SELEX技术原理及特点

SELEX技术是指数富集配体系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)。利用该技术,可以从随机单链核酸序列库中筛选出与目标物质具有高特异性和高亲和力的核酸适体(Aptamers)。自Tuerk等人提出以来,SELEX技术经过十多年的发展,已成为一种重要的研究方法和工具。

SELEX技术原理
SELEX技术的基本思路是在体外化学合成单链寡核苷酸文库,用其与目标物质混合,混合物中目标物质与核酸之间形成复合物,洗去核酸不与目标物质结合,将目标物质与目标物质分离。以核酸分子为模板,通过PCR扩增与物质结合的核酸分子,并进行下一轮筛选过程。通过反复筛选和扩增,一些不与目标物质结合或与目标物质亲和力低或中等的DNA或RNA分子被洗掉,而适配体(Adaptor Protein)则是与目标物质亲和力高的DNA或RNA分子。目标物质。RNA是从一个非常大的随机文库中分离出来的,随着SELEX过程的进行,纯度从p摩尔增加到n摩尔,最终占据文库的大部分(>90%左右)。 SELEX基于分子生物学技术合成了单链随机寡核苷酸文库。通常文库容量为 10 英寸至 10 个单链寡核苷酸序列。文库包括DNA文库、RNA文库和修饰的RNA文库。文库的中间是随机序列,序列长度往往在20到40bp之间。随机序列的两端是带有限制性内切酶位点的固定序列,是聚合酶链式反应和其他酶促反应相关引物的结合位点。在随机库中,单链随机寡核苷酸分子很容易形成多种三维结构,可以与自然界中几乎所有种类的分子相互作用。特别是RNA分子容易形成发夹、假节、凸起、茎环、G四聚体等二级结构,更容易与蛋白质、核酸和核酸相互作用。但它在体内很容易被核酸酶降解,必须进行修饰,如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比,DNA的生产成本较低,在体内相对稳定,不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体(Adaptor Protein)更适合体外诊断和体内治疗。它可以与自然界中几乎所有类型的分子相互作用。特别是RNA分子容易形成发夹、假节、凸起、茎环、G四聚体等二级结构,更容易与蛋白质、核酸和核酸相互作用。但它在体内很容易被核酸酶降解,必须进行修饰,如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比,DNA的生产成本较低,在体内相对稳定,不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体(Adaptor Protein)更适合体外诊断和体内治疗。它可以与自然界中几乎所有类型的分子相互作用。特别是RNA分子容易形成发夹、假节、凸起、茎环、G四聚体等二级结构,更容易与蛋白质、核酸和核酸相互作用。但它在体内很容易被核酸酶降解,必须进行修饰,如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比,DNA的生产成本较低,在体内相对稳定,不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体(Adaptor Protein)更适合体外诊断和体内治疗。核酸和核酸。但它在体内很容易被核酸酶降解,必须进行修饰,如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比,DNA的生产成本较低,在体内相对稳定,不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体(Adaptor Protein)更适合体外诊断和体内治疗。核酸和核酸。但它在体内很容易被核酸酶降解,必须进行修饰,如嘧啶环的2'2F和2'2NH修饰。与RNA相比,DNA的生产成本较低,在体内相对稳定,不易被降解。从构建的文库中筛选出的适配体(Adaptor Protein)更适合体外诊断和体内治疗。

SELEX技术特点
(1)库容量大,适应范围广;靶标没有限制,包括蛋白质、核酸、小分子有机物,甚至金属离子。
(2)高分辨率。根据Jenison等人的研究结果,用茶碱筛选得到的适体与茶碱结合的解离常数Kd为0.1mol/L,或在嘌呤环的N7位上没有甲基。
(3)亲和力高。以蛋白质为目标物质,适配体的解离常数可以达到nmol/L的水平,甚至pmol/L的水平。对于Mr较小的目标物质,解离常数也可以达到mol/L—nmol/L的水平。
(4)筛选过程比较简单、快速、经济。一般情况下,典型的SELEX筛选过程可在2至3个月内完成,筛选出的适配体的小规模合成和纯化不超过3天。无需特殊仪器和试剂,一般实验室即可完成。筛选抗体至少需要3至6个月,费力且成本高。筛选的自动化和规模化可以实现更多、更快、更经济的适体生产。最近,Men-donsa 等人。报道称,当SELEX与毛细管电泳相结合时,只需几天的时间就可以筛选出对目标分子具有高亲和力和高特异性的寡核苷酸适配体。
(5)筛选的实用性。筛选适配体(Adaptor Protein)可定时、定量、保质,适配体的变性和复性快速、可逆、可重复使用、可在室温下长期保存和运输,相对于抗体和其他蛋白分子具有较强的实用性。筛选条件可以根据筛选出的适配体的不同性质人为设定,合成时可以随意连接其他官能团或分子(如生物素、巯基、甲基),以满足用户的需求。需要。
(6)适配体尺寸小。作为药物施用时,仅产生很低的免疫原性,但具有很强的肿瘤穿透力,并且易于在体内清除。

化学发光免疫分析(CLIA)技术的原理及应用

化学发光免疫分析(CLIA)技术的原理及应用

化学发光免疫分析法(CLIA)诞生于1977年,根据放射免疫分析的基本原理,将高灵敏度的化学发光技术与高特异性的免疫反应相结合而建立的化学发光免疫分析法。 CLIA具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽、操作简单、不需要非常昂贵的设备等特点。

化学发光免疫分析是高灵敏度化学发光分析技术与高特异性免疫反应的结合,用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物的检测和分析。 。它是继放射免疫分析、酶免疫分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的最新免疫分析技术。

CLIA的应用范围很广,不仅可以检测不同分子大小的抗原、半抗原和抗体,还可以用于核酸探针的检测。与放射免疫分析(RIA)、荧光免疫分析(IFA)和酶免疫分析(EIA)相比,CLIA具有无辐射、标记物有效期长、全自动化等优点。 CLIA 为兽医、医学和食品分析测试和科学研究提供痕量或超痕量非同位素免疫分析。

一、化学发光免疫分析技术的基本原理

化学发光免疫分析包含免疫分析和化学发光分析两个系统。免疫分析系统采用化学发光物质或酶作为标记物,直接标记在抗原或抗体上,通过抗原与抗体反应形成抗原抗体免疫复合物。化学发光分析系统是在免疫反应后添加氧化剂或酶的发光底物。化学发光物质被氧化剂氧化后,形成处于激发态的中间体,该中间体发射光子释放能量回到稳定的基态。发光强度可以使用发光信号测量仪来检测。根据化学发光标记与发光强度的关系,可以使用标准曲线计算分析物的含量。

2. 化学发光免疫分析的类型

化学发光免疫分析根据标记物的不同可分为三类,即化学发光免疫分析、化学发光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。

2.1 化学发光免疫分析

化学发光免疫测定是一类用化学发光剂直接标记抗体或抗原的免疫测定。目前常见的标记物主要是鲁米诺和吖啶酯化学发光剂。

2.1.1 鲁米诺标记化学发光免疫分析

鲁米诺物质的发光是氧化反应发光。在碱性溶液中,鲁米诺可被多种氧化剂氧化,其中常用的是H2o2。由于发光反应速度慢,需要添加一些酶或无机催化剂。酶主要是辣根过氧化物酶(HRP),无机类有O3、卤素和Fe3、Cu2、Co2及其复合物。

早期主要用于无机和有机生物小分子的测定,因标记后发光强度下降而导致灵敏度降低。研究发现,在发光体系中添加一些酚类及其衍生物、胺类及其衍生物、苯基硼酸衍生物,可以显着增强体系的发光能力,发光强度可提高1000倍,“背景”发光明显降低,发光时间也延长。这些增强剂的使用使得化学发光免疫测定法能够广泛应用于蛋白质和核酸分析领域。

2.1.2吖啶酯标记的化学发光免疫分析:吖啶酯由于热稳定性差而用于CLIA,通过研究合成了更稳定的吖啶酯衍生物。在H2o2和OH的条件下,吖啶酯类化合物可以快速发光,并且量子产率很高。例如吖啶芳基酯的量子产率可以达到0.05。采用吖啶酯作为免疫分析的标记物,发光系统简单。 、速度快、无需添加催化剂、标记效率高、背景低。这些特点引起了广大分析诊断工作者的极大兴趣。

2.2 化学发光酶联免疫分析

化学发光酶免疫分析(cLEIA)是酶免疫分析的一种,只不过酶促反应的底物是发光剂。然后酶作用于发光底物,在信号试剂的作用下发光,用发光信号分析仪进行发光测量。

常用的标记酶有辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP),它们都有各自的发光底物。

常用的 HRP 发光底物是鲁米诺及其衍生物。在CLEIA中,使用过氧化物酶标记的抗体,进行免疫反应后,以鲁米诺作为发光底物,鲁米诺在过氧化物酶和起始发光试剂(NaOH和H2o2)的作用下发光,酶免疫反应中酶的浓度该物质决定化学发光的强度。这种传统的化学发光体系(HRP-H2O2-LUMINOL)在几秒内瞬时闪光,存在发光强度低、测量困难的缺点。后来在发光系统中添加了增强型发光剂,增强发光信号并保持较长时间的稳定,以利于重复测量,从而提高分析灵敏度和准确性。

碱性磷酸酶(ALP)已广泛应用于酶联免疫分析和核酸杂交分析。碱性磷酸酶和1,2。由二氧杂环丁烷组成的发光体系是目前化学发光体系中最重要、灵敏的一类。此类系统的代表是ALP-AMPPD发光系统。 AMPPD在溶液中的磷酸键非常稳定,非酶水解非常缓慢。在pH12的0.05mol/L碳酸钠缓冲溶液中,分解半衰期可达74年,且几乎不存在试剂本身的发光背景。 AMPPD是磷酸酶的直接发光底物,可用于检测碱性磷酸酶或抗体、核酸探针和其他配体的缀合物。 ALP-AMPPD发光系统具有非常高的灵敏度,标记物ALP的检出限达到10-21mol,是灵敏的免疫分析方法之一。对AMPPD进行改进,得到反应动力学更好、灵敏度更高的新一代产品:CSPD、CDP-Star。这些系统已广泛应用于各种基因和病原体DNA的鉴定。

2.3 电化学发光免疫分析

电化学发光(ECL)是指由电化学反应引起的化学发光过程。 ECL反应在电极表面进行,发光底物为三联吡啶钌[Ru(byp)2+3],三丙胺(TPA)用于激发光反应。在阳极表面,两种物质同时失去电子。在电极板上,Ru(byp)2+3 被氧化为 Ru(byp)3+3,TPA 也被氧化为阳离子自由基(TPA+#),TPA+# 自发释放质子,成为不稳定分子(TPA * ) ,将电子传递给 Ru(byp)3+3,形成激发态 Ru(byp)2+3。 Ru(byp)3+3在衰变时发射出波长为620NM的光子,并返回到基态Ru(byp)2+3。这个过程在电极表面重复进行,产生高效稳定的连续发光,并不断增强。

ECL的突出优点是:

①标记物分子小,可实现多重标记,且标记物非常稳定;

②发光时间长、灵敏度高;

③光信号线性好,动态范围宽,超过6个数量级;

④ 可重复测量,重现性好;

⑤ 可实现多重检测和均相免疫分析;

⑥速度快,通常只需18分钟即可完成一个样品的分析;

⑦全自动化。电化学发光免疫分析由于其优越性,是一种很有前景的免疫分析方法,越来越受到人们的重视。它已广泛应用于抗原、半抗原和抗体的免疫检测。

3. 申请

化学发光免疫分析(CLIA)和发光酶免疫分析(CLEIA)是化学发光免疫分析中常用的两种免疫分析方法。底物是发光剂的基础。根据仪器的检测自动化程度,仪器可分为自动和半自动两种。目前国内临床市场的全自动产品大部分都是进口产品;根据分离技术,仪器分为磁珠分离和塑料孔板分离两种。

化学发光免疫分析技术在检验医学中有很多应用,包括肿瘤标志物、心脏标志物、甲状腺功能、胰岛素和C肽以及糖尿病、传染病、骨代谢、细胞因子、激素、生长激素系统、贫血诊断和鉴别诊断、过敏反应等和监测治疗药物浓度。

流式细胞仪参数测量原理

流式细胞仪参数测量原理

流式细胞仪是一种对细胞进行自动分析和分选的设备。它可以快速测量、存储和显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理和生化特征参数,并可以根据预选的参数范围筛选出的细胞亚群。大多数流式细胞仪都是零分辨率仪器,只能测量细胞内的总核酸、总蛋白等指标,而无法识别和测量特定部位的核酸或蛋白量。也就是说,它的细节分辨率为零。

参数测量原理

流式细胞仪可以同时进行多参数测量,信息主要来自特异性荧光信号和非荧光散射信号。测量是在测量区域内进行的,所谓测量区域是照射的激光束与从孔口喷出的液流束的垂直交点。当液流中心的单个细胞通过测量区域时,受到激光照射,以2π立体角向整个空间散射光。散射光的波长与入射光的波长相同。散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形状、质膜和内部结构密切相关,因为这些生物参数还与细胞的光学特性有关,例如光的反射和折射。未染色的细胞具有散射光的特征,因此可以使用不同的散射光信号对未染色的活细胞进行分析和分类。当然,由于光学特性的变化,固定和染色的细胞与活细胞具有不同的散射光信号。散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数有关,还与散射角、收集散射光的立体角等非生物因素有关。

在流式细胞术测量中,常用两种散射光散射方向:①前向角(即0角)散射(FSC); ②侧向散射(SSC),又称90角散射。此时所说的角度是指激光束的照射方向与收集散射光信号的光电倍增管的轴向形成的大致角度。一般来说,前向角散射光的强度与细胞的大小有关,对于相同的细胞群,前向角散射光的强度随着细胞横截面积的增大而增大;对球形活细胞的实验表明,在小立体角范围内基本一致。截面积的大小呈线性;对于具有复杂形状和方向的细胞,它们可能变化很大,并应特别注意。侧向散射光的测量主要用于获取有关细胞内部精细结构的颗粒性质的信息。侧向散射光虽然也与细胞的形状和大小有关,但它对细胞膜、细胞质和核膜的折射率更敏感,对细胞质中较大的颗粒也能给出敏感的反应。并且还可以对细胞质中较大的颗粒做出灵敏的反应。并且还可以对细胞质中较大的颗粒做出灵敏的反应。

实际使用时,仪器首先要测量光散射信号。当光散射分析与荧光探针结合使用时,可以识别样品中染色和未染色的细胞。光散射测量有效的用途是从异质群体中识别某些亚群体。

荧光信号主要包括两部分:①自发荧光,即细胞内部的荧光分子受光照射后未经荧光染色而发出的荧光; ②特征荧光,即荧光染料发出的荧光染料被照射后与细胞结合。荧光,其荧光强度较弱,且波长也与照射的激光不同。自发荧光信号是噪声信号,在大多数情况下会干扰特定荧光信号的分辨率和测量。在免疫细胞化学等测量中,如何提高信噪比是低结合水平荧光抗体的关键。一般来说,细胞成分中自发荧光分子(如核黄素、细胞色素等)含量越高,自发荧光越强;培养细胞中死细胞/活细胞的比例越高,自发荧光越强;细胞样品中亮细胞的比例越高,自发荧光越强。

减少自发荧光的干扰,提高信噪比的主要措施有: 1、尽可能使用较亮的荧光染料; 2、选择合适的激光器和滤光光学系统; 3. 使用电子补偿电路来补偿自发荧光的背景贡献。

PI单染法实验原理及步骤

PI单染法实验原理及步骤

PI单染的原理主要是根据细胞凋亡过程中细胞、亚细胞和分子水平发生的特征性变化。这些变化包括细胞核的变化、细胞器的变化、细胞膜成分的变化和细胞形态的变化,其中细胞核的变化很有特征。

PI简介

荧光染料PI(碘化丙啶)是一种可以对DNA进行染色的核染色试剂。它常用于细胞凋亡检测。英文全称是Propidium Iodide。它是一种溴化乙锭类似物,嵌入双链 DNA 后会发出红色荧光。虽然 PI 不能穿过活细胞膜,但它可以穿过受损的细胞膜并对细胞核进行染色。 PI 通常与 Calcein-AM 或 FDA 等荧光探针一起使用,以同时对活细胞和死细胞进行染色。 PI-DNA复合物的激发波长和发射波长分别为535 nm和615 nm。

外观:红棕色粉末储存条件:-20℃

PI单染法实验原理

1、细胞核的变化:由于凋亡细胞细胞核的变化,导致各种染色体荧光染料对凋亡细胞DNA的染色性发生改变。研究表明,用各种染色体荧光染料对固定的凋亡细胞进行染色会降低 DNA 染色能力。许多学者将 DNA 染色性的降低视为凋亡细胞的标志之一。

2.光散射特性:凋亡细胞形态的变化影响其光散射特性。在流式细胞仪上,前向散射光与细胞的大小有关,而侧向散射光反映了细胞内光的折射,与细胞内颗粒的数量有关。细胞凋亡时,细胞收缩,体积变小,因此前向散射光减少。这一特征通常被认为是凋亡细胞的特征之一。另外,由于细胞凋亡时染色体的降解和核破裂的形成,细胞内颗粒常增多,故凋亡细胞的侧向散射光常增多。细胞坏死时,由于细胞肿胀,前向散射光增加;细胞坏死时侧向散射光也增加,因此根据前向散射光和侧向散射光可以区分凋亡细胞和坏死细胞。但需要注意的是,根据前向散射光和侧向散射光判断凋亡细胞的可靠性,很大程度上受检测细胞形态的均匀性和核质比的影响。因此,在某些淋巴细胞凋亡中,通过光散射特性检测细胞凋亡的可靠性较好,但在肿瘤细胞凋亡中,其可靠性较差。基于光散射特性检测凋亡细胞的主要优点是,光散射特性可以与细胞的表面免疫荧光分析相结合,以区分经过这些特殊处理后发生选择性凋亡的淋巴细胞亚型。它还可用于活细胞的分类。

PI 单染试剂和仪器

1、PBS溶液;
2、PI染色液:将PI溶解于PBS(pH7.4)中,终浓度为100ug/ml。储存在棕色瓶中,4°C 避光保存。
3,70%乙醇4,400目筛5,流式细胞仪

PI单染实验步骤

1.收集细胞,500~1000r/min离心5min,弃去培养基。
2.用3ml PBS洗涤一次。
3. 离心除去PBS,加入冰冷的70%乙醇固定,4℃固定1-2小时。
4. 离心弃固定液,重悬于 3ml PBS 中 5 分钟。
5. 过400目筛一次,500-1000 r/min离心5 min,弃PBS。
6. 用1ml PI染色液染色,4℃避光30min。
7、流式细胞仪检测:PI被氩离子激发产生荧光,激光光波波长为488nm,发射光波波长大于630nm,产生红色荧光,分析荧光直方图PI的强度,并分析前向散射光到侧向散射光的散射。图片。
8.结果判断:在前向散射光与侧向散射光的散点图或地形图上,与正常细胞相比,凋亡细胞的前向散射光较低,而侧向散射光可高可低,这与正常细胞相比,凋亡细胞的前向散射光较低,而侧向散射光可高可低。细胞类型;在分析PI荧光直方图时,首先使用门技术排除双或聚集的细胞以及发出微弱荧光的细胞碎片。在PI荧光直方图上,凋亡细胞在G1/G0期倍性峰之前出现一二二。例如,如果G1/G0期位置的荧光强度为1.0,则典型凋亡细胞样品的亚二倍体峰的荧光强度为0.45,则可以使用鸡和鲑鱼红细胞的PI荧光强度作为参考标准。 0.35 和 0.7,分别确保其间不是细胞碎片而是完整的细胞。

注:在细胞凋亡过程中,DNA 染色性的降低被认为是凋亡细胞的标志之一,但这种 DNA 染色性的降低也可能是由于 DNA 含量的减少,或由于 DNA 结构的变化所致。这是由于其与染料结合的能力发生变化引起的。分析结果时应小心。

自动电位滴定仪的原理和特点

自动电位滴定仪的原理和特点

电位滴定法是在滴定过程中通过测量电位变化以确定滴定终点的方法,特别适用于化学反应的平衡常数较小、滴定突跃不明显或试液有色、呈现浑浊的情况。

电位滴定仪分为手动法和自动法两种,由于自动滴定仪分析的更快速,准确等特点,越来越受到分析检测部门的青睐。自动电位滴定仪是由指示电极、参比电极与试液组成电池,在电位滴定过程中随着滴定剂的加入,溶液中发生化学反应,被测离子的浓度不断发生变化,因而引起指示电极和参比电极之间电位发生变化。在等当点附近,两电极之间的电位发生突跃,利用此突变电位结合仪器内部的计算程序计算可得到滴定终点。

ZDJ-4A型雷磁自动电位滴定仪是一种分析精度相当高的实验室分析仪器,它主要用于高等院校、科研机构、石油化工、制药、药检、冶金等各行业的各种成分的化学分析。

主要特点:
1、点阵式液晶显示,按键操作,可显示测试方法和测量结果;
2、支持动态滴定、预设终点滴定、等量滴定、手动滴定等多种滴定模式,支持生成滴定模式;
3、支持酸碱滴定、氧化还原滴定、沉淀滴定、络合滴定、非水滴定等多种滴定方法以及pH测量功能;
4、可存贮1套滴定数据和50套滴定结果,符合GLP规范;支持数据删除、查阅、打印或者输出;

水分分析仪的工作原理

水分分析仪的工作原理

为什么我们要进行水分含量分析?
 
  根据不同形式试样中的不同水分含量提出了测定水分的不同要求。水分测定可以是工业生产的控制分析,也可是工农业产品的质量鉴定;可以从成吨计的产品中测定水分也可在实验室中仅用数微升试液进行水分分析,可以是含水量达百分之几至几十的常量水分分析,也可是含水量仅为百万分之一以下的痕量水分分析等等。
   今天我们要讲的是卡尔·费休水分测定仪,顾名思义,该仪器用的就是卡尔·费休法进行水分测定。
 
  微量水分分析仪原理
 
  卡尔·费休法属经典方法,又称为微量水分测定仪,基于卡尔-费休库伦滴定法原理,精确测定液体、固体、其他中的微量水分,经过近年来改进,大大提高了准确度,扩大了测量范围,广泛应用于电力、石油、化工制药、食品及太阳能电池板切割液等领域。

离子计的使用原理与维护

离子计的使用原理与维护

在钢筋腐蚀、土壤重金属等各方面都有需要测量的溶液中离子浓度的时候,而离子计作为一个测量离子浓度的仪器,使用也是非常常见的,下面我们就来了解一下离子计。

离子计
离子计又称离子活度计,它与各种离子选择性电极配合使用,精密地测定两电极所构成的原电池的电池电动势,根据能斯特方程在不同条件下的应用,可以用直接电位法、加入法、电位滴定法和格氏作图法来测量溶液中的离子浓度。
离子计测量离子浓度的原理是建立在电位分析法的基础上,电位分析法的实质是通过在零电流条件下测定两电极间电位差(即由待测试样溶液所掏成原电池的电动势)进行分析测定的方法。
离子计必须与离子选择性电极配合使用,离子选择性电极是一种电化学敏感元件。是以电位法测量溶液中某些特定离子活度的指示电极,它能将非电量的离子活度的变化转换为电位的变化。雷磁离子计是一种用于测定溶液中离子浓度的实验室电化学分析仪器,是精密级的离子测量仪器,其测定方式类似于常见的pH计,即以各种离子选择电极为指示电极,再辅以适当的参比电极一起插入待测溶液中构成供测定用的电化学系统。

仪器的维护
无论是什么仪器,都需要进行维护和保养,下面是一些维护注意事项。
1.仪器必须有良好的接地。
2.接通电源后,按“ON/OFF”键,若显示屏不亮,应检查稳压电源器是否插好,稳压电源有无直流电压输出(9V)否则是仪器内部有故障。
3.测量或标定时搅拌速度一旦选定不要随意再动,搅拌速度一般选在中速,无明显的水珠溅起即可。
4.两测量电极插口如果在使用时,只用一个,则另一个必须接上短路插头,仪器才能正常工作。
5.氟离子电极使用前应在去离子水中活化浸泡2小时以上,和参比电极配合在去离子水中的电位达到350MV以上可正常使用。
6.配合相关的氟化钠标准溶液和总离子强度调节剂,表定和测量时必须加入相当的离子强度调节剂(20ML)。
7.仪器不使用时,如果测量电极不插,短路插头也要接上,以免仪器输入端开路或受潮而损坏仪器
8.仪器可供长期稳定使用。测试完样品后,所用电极应浸放在蒸馏水中。
9.参比电极应经常观察内部的饱和KCl溶液的液位,要及时添加,一般不少于二分之一。
10.在测量过程中如发现不稳定,加接仪器和大地之间的连接线,检查参比电极的饱和KCl溶液的液位,清洗或打磨参比电极的参漏点(黄色陶瓷),氟电极坏,溶液有无添加离子强度调节剂,调节后可检查仪器的稳定性,取下电极插上短路插头,在MV档应在000MV,而且是稳定的,反之是仪器有故障需返厂维修。
11.周围除地磁场外无其他影响性能的电磁场或其他干扰。

水质分析仪的工作原理

水质分析仪的工作原理

水质分析仪是一种常用的检测仪器,适用于地表水、工业废水、医疗废水、污水再生的景观用水、生活饮用水、游泳池水等水质的现场测定或者实验室分析。

  水质分析仪主要采用离子选择电极测量法来实现检测的。仪器上的电极:PH、氟、钠、钾、钙、镁、和参比电极。每个电极都有一离子选择膜,会与被测样本中相应的离子产生反应,膜是一离子交换器,与离子电荷发生反应而改变了膜电势,就可检测液,样本和膜间的电势。膜两边被检测的两个电势差值会产生电流,样本,参考电极,参考电极液构成”回路”一边,膜,内部电极液,内部电极为另一边。

  内部电极液和样本间的离子浓度差会在工作电极的膜两边产生电化学电压,电压通过高传导性的内部电极引到到放大器,参考电极同样引到放大器的地点。通过检测一个的已知离子浓度的标准溶液获得定标曲线,从而检测样本中的离子浓度。

  溶液中被测离子接触电极时,在离子选择电极基质的含水层内发生离子迁移。迁移的离子的电荷改变存在着电势,因而使膜面间的电位发生变化,在测量电极与参比电极间产生一个电位差。

浊度计检测水质浊度的原理

浊度计检测水质浊度的原理

浊度是指溶液对光线通过时所产生的阻碍程度,它包括悬浮物对光的散射和溶质分子对光的吸收。水的浊度不仅与水中悬浮物质的含量有关,而且与它们的大小、形状及折射系数等有关。
  大家都知道使用水质检测仪器测量自然环境的水质时浊度是重要的参数之一,但是很多人关于浊度的测量细节并不*了解,而今天我们就给大家介绍一些关于浊度方面的知识。大家都知道自然环境中的水质很容易受到一些悬浮颗粒物的影响,而这些悬浮的颗粒物可以通过浊度计检测出具体的数据。一般情况下浊度通常与气候或地表水条件密切相关,因此要想知道湖泊,河流和河流的环境状况是否发生变化,我们可以通过测量水质的浊度来判断。
  雷磁浊度计是用于测量悬浮于水(或透明液体)中不溶性颗粒物质所产生的光的散射或衰减程度,并能定量表征这些悬浮颗粒物质含量的仪器。仪器可广泛用于水厂、食品、化工、电厂、冶金环保及制药行业等部门,是常用的实验室仪器。
  浊度计是水通过水时发生的阻塞程度的度量。含水的土壤、淤泥、细有机物和其他微生物和胶体会使水浑浊。在传感器上发射的光波被吸收之后。d、在透射过程中被测物体的反射和散射,透射光的一部分可以180度方向照射在检测器上,而散射光的一部分可以90度方向散射在检测器上。180和90方向的探测器与测量污水的浊度有一定的关系,因此可以通过测量透射光和散射光的强度来计算污水的浊度。 

ELISA的实验原理和操作步骤

ELISA的实验原理和操作步骤

一、实验原理

ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体—聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。在实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。

 

二、实验材料

1、试剂

(1)包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

NaCO3:1.59克、NaHCO3:2.93克,加蒸馏水至1000ml

(2)洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 NaCl  8.0克KCl 0.2克 Tween-20 0.05% 0.5ml 加蒸馏水至1000ml

(3)稀释液:牛血清白蛋白(BSA) 0.1克 加洗涤缓冲液至100ml 或以羊血清、兔血清等 血清与洗涤液配成5~10%使用。

(4)终止液(2M H2SO4):蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

(5)底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml 0.1M 柠檬酸(19.2克/L) 24.3ml 加蒸馏水50ml。

(6)TMB(四甲基联苯胺)使用液:TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml底物缓冲液(PH5.5) 10ml 0.75% H2O232μl

(7)ABTS使用液:ABTS 0.5mg 底物缓冲液(PH5.5) 1ml 3% H2O2 2μl

(8)抗原、抗体和酶标记抗体。

(9)正常人血清和阳性对照血清。

2、器材:

(1)聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔,ELISA检测仪,50μl及100μl加样器,塑料滴头,小毛巾,洗涤瓶。

(2)小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。

(3)4℃冰箱,37℃孵育箱。


三、实验步骤

)用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

1、包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。

2、加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。

4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。

5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-“号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

用于检测未知抗体的间接法:

用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

 

四、注意事项

1.正式试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2.在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:

(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。

(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。

(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应,而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后,应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。


cwe小动物呼吸机的基本工作原理

cwe小动物呼吸机的基本工作原理    cwe小动物呼吸机是辅助动物呼吸常用的设备,可以一键关闭呼吸机的功能,用作麻醉机;也可以开放呼吸机功能,用作麻醉呼吸机;功能和结构集成,连管、连线和使用非常简单,占地空间少,桌面摆放整齐悦目,降低购买成本。

  
  基本工作原理:
  任何呼吸机的工作原理都在于气体的压力差。气道正压呼吸机使气体压力增高,通过管道与患者呼吸道插管连接,气体经气道、支气管,直接流向肺泡,此时为吸气期;呼气时呼吸机管道与大气相通,肺泡在大于大气压力,肺泡内气体即自行排除,直至与大气压相等。
  
  产品特点:
  1、适用动物:小鼠、大鼠、豚鼠等小动物;
  2、工作方式:间歇正压通气模式IPPV;
  3、通气模式:容量控制模式(VCV)、压力控制通气(PCV);
  4、呼气末正压通气(PEEP)功能:可一键设置PEEP,PEEP范围:0-40cmH2O;
  5、公斤体重模式设置,只需输入动物体重即可一键设置参数,极大方便实验人员使用;
  6、可通过电脑实现远程控制,可用于配合动物活体成像时使用;
  7、使用过程中可随时改变工作参数并立即生效;
  8、安全警报:超过或低于设定压力时报警、管路堵塞报警;
  9、具有安全压力限值,当气道压超过限定值时自动泄压保护;
  10、可选配呼末二氧化碳(PETCO2)监测功能,测量范围0-10%;
  11、供气气源:内置气泵、外接氧气、麻醉气体等;
  12、体积小巧,带有手拎把手,方便移动和携带。
  
  cwe小动物呼吸机非常适合小动物的容量循环加压式呼吸机,也可扩展到豚鼠等大动物。操作简单,只需设定呼吸速率、换气量以及流量即可时测定。性能稳定,全旋钮式操作,使用方便,适合实验室小动物使用。