样品实验方案
简要概述
1.准备L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
2.添加L-丙氨酸标准品或测试样品（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.检测575 nm处的吸光度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸探针（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸探针储备溶液。
1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸标准溶液（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸标准溶液。
2.标准溶液
L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7）。取100 µM L-丙氨酸标准溶液（AS7），并在PBS中进行1：2连续稀释，以得到连续稀释的L-丙氨酸标准溶液（AS6-AS1）。
3.工作溶液
3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。
3.2 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。
3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix2和25 uL的200X L-丙氨酸探针储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中，并充分混合以制成L-丙氨酸工作溶液。 注意：L-丙氨酸工作溶液不稳定-请立即使用，并避免直接暴露在光线下。
样品操作及实验分析
表1.白色透明96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.563至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL |
BL |
TS |
TS |
| AS1 |
AS1 |
… |
… |
| AS2 |
AS2 |
… |
… |
| AS3 |
AS3 |
|
|
| AS4 |
AS4 |
|
|
| AS5 |
AS5 |
|
|
| AS6 |
AS6 |
|
|
| AS7 |
AS7 |
|
|
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 |
容积 |
试剂 |
| AS1-AS7 |
50ul |
连续稀释液（1.563至100 µM） |
| BL |
50ul |
PBS |
| TS |
50ul |
测试样品 |
1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。
2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。
3.将反应液在37°C孵育30分钟至1小时。
4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。
参考文献
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