Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙酮酸的试剂盒，丙酮酸是细胞内代谢途径中的重要化合物。它来源于称为糖酵解的葡萄糖代谢。一分子葡萄糖分解成两个丙酮酸分子，通过两种方式之一提供活细胞能量。当氧气存在时（有氧呼吸），丙酮酸被丙酮酸脱氢酶转化为乙酰-CoA，丙酮酸脱氢酶进入柠檬酸循环（也称为三羧酸循环）产生ATP。当氧气不足时，丙酮酸盐会厌氧分解，在动物体内产生乳酸盐，在植物和微生物体内产生乙醇。丙酮酸盐的异常水平或乳酸盐与丙酮酸盐的浓度比可能与肝脏疾病或代谢紊乱有关，并且是患者临床和其他实验室研究中的一种诊断测量。 AAT Bioquest的Amplite 荧光丙酮酸盐检测试剂盒提供了一种灵敏的荧光检测方法，用于量化生物样品中的丙酮酸盐。它利用释放过氧化氢的酶偶联反应，可以在Ex / Em = 540 / 590nm处通过荧光酶标仪中的丙酮酸盐传感器检测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 比色法丙酮酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备样品以及连续稀释的丙酮酸标准溶液（50 µL）
2.加入等体积的工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm处的吸光度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

2.标准溶液

丙酮酸标准
将2μL100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到998μLPBS（pH 7.0）中，得到200μM丙酮酸盐标准溶液（PS7）。 然后执行1：2的系列稀释，以得到剩余的系列稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到一个Enzyme Mix1瓶（组分B1）中，并充分混合。 将100μLddH2O加入一个Enzyme Mix2小瓶（组分B2）中并充分混合。 将整个小瓶的Enzyme Mix2（100μL）和25 uL的200X丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix1瓶中并充分混合。 注意：立即使用，避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.白色透明96孔微孔板中丙酮酸标准溶液和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1- PS7，3.125至200 µM），BL =空白对照（PBS），TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备丙酮酸标准品（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下进行丙酮酸测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用酶标仪在575 nm处监测吸光度的增加。

参考文献

A replaceable dual-enzyme capillary microreactor using magnetic beads and its application for simultaneous detection of acetaldehyde and pyruvate
Authors: Shi J, Zhao W, Chen Y, Guo L, Yang L.
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Authors: Wulkan RW, Verwers R, Neele M, Mantel MJ.
Journal: Ann Clin Biochem (2001): 554

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Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测丙氨酸的试剂盒，L-丙氨酸（L-Ala）作为重要蛋白质的构建块起着至关重要的作用。 L-丙氨酸主要由来自乳酸的肌肉细胞合成并通过肝脏吸收到血液中。 它被谷氨酸丙酮酸转氨酶转化为丙酮酸，进入代谢主流。 L-Ala对葡萄糖的产生和血糖管理至关重要，并在免疫系统和预防肾结石方面发挥重要作用。 L-丙氨酸的缺乏通常是营养不良，低蛋白饮食和压力的标志。 AAT Bioquest的Amplite 荧光L-丙氨酸测定试剂盒提供了一种灵敏的荧光测定方法，用于量化生物样品中的L-丙氨酸。 它利用一种酶偶合反应释放过氧化氢，Quest Fluor L-丙氨酸传感器在Ex / Em = 540/590 nm处使用荧光酶标仪进行检测。检测限：~3uM，任何带有-SH基团的物质，如DTT、半胱氨酸，都会干扰测定。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光法L-丙氨酸检测试剂盒。 

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品以及连续稀释的L-丙氨酸标准品（50 µL）
2.加入等体积的L-丙氨酸工作溶液（50 µL）
3.在37°C下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor L-丙氨酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor L-丙氨酸传感器储备溶液。

1.2 L-丙氨酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM L-丙氨酸（组分D）加到990 µL PBS（pH 7.0）中，得到1 mM L-丙氨酸溶液。

2.标准溶液

L-丙氨酸标准
向900 µL PBS中加入100 µL 1 mM L-丙氨酸标准溶液，制成100 µM L-丙氨酸溶液（AS7）。进行1：2连续稀释以获得连续稀释的L-丙氨酸标准品（AS6-AS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中，并充分混合。

3.2 将100μLddH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X L-丙氨酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中； 混合均匀。 注意：工作解决方案不稳定。 立即使用，避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中L-丙氨酸标准品和测试样品的布局。 AS = L-丙氨酸标准品（AS1-AS7，1.5至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备L-丙氨酸标准品（AS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.将50 µL L-丙氨酸工作溶液添加到L-Alanine标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使L-Alanine测定的总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL L-丙氨酸工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。 注意：在pH 6.5至7.0下运行L-丙氨酸测定。

3.将反应混合物在37°C孵育30分钟至1小时。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。

参考文献

Reactivity of beta-methylamino-L-alanine in complex sample matrixes complicating detection and quantification by mass spectrometry
Authors: Glover WB, Liberto CM, McNeil WS, Banack SA, Shipley PR, Murch SJ.
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