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钙离子荧光探针Fura8FF , AM-AAT Bioquest荧光染料

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上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品，欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fura8FF , AM价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Fura8FF , AM

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 973.86 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

具有细胞渗透性的 Fura-8FF AM 是 Fura-8 AM 的类似物，具有低得多的钙结合亲和力，Kd ~10 µM。 Fura-8FF 的发射转移到与常见滤光片组兼容的更长可见波长。 Fura-8FF™ AM 对钙比 Fura-2FF AM 更敏感，信号/背景比比 Fura-2FF AM 更高。即，通过检测530 nm 处的发射强度来计算 354 nm 和 415 nm 处的激发强度比。

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适用仪器

荧光显微镜  
Ex: Fura 滤波片组
Em： Fura 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 

荧光酶标仪  
Ex: 355,415 nm
Em： 530 nm
Cutoff： 475nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理

 

溶解方案(溶剂以说明书为准)

  0.1 mg 0.5 mg 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 102.684 µL 513.421 µL 1.027 mL 5.134 mL 10.268 mL
5 mM 20.537 µL 102.684 µL 205.368 µL 1.027 mL 2.054 mL
10 mM 10.268 µL 51.342 µL 102.684 µL 513.421 µL 1.027 mL
实验方案

实验方案

储备溶液配制

在高质量无水 DMSO 中制备 2 至 5 mM Fura-8FF 储备溶液。

 

工作溶液配制

Fura-8FF工作溶液
1.实验当天，将 Fura-8FF 溶解在 DMSO 中或将指示剂储备溶液的等分试样解冻至室温。

2.在您选择的缓冲液（例如 Hanks 和 Hepes 缓冲液）中用 0.04% Pluronic® F-127 制备 2 至 20 µM Fura-8FF 工作溶液。对于大多数细胞系，建议终浓度为 4-5 μM 的 Fura-8FF。细胞加载所需指示剂的准确浓度必须根据经验确定。

注：非离子洗涤剂 Pluronic® F-127 有时用于增加 Fura-8FF 的水溶性。可以从金畔购买各种 Pluronic® F-127 解决方案。
注：如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的最终浓度为 0.5-1 mM），以减少脱酯后探针的泄漏。各种 ReadiUse 丙磺舒产品，包括水溶性、钠盐和稳定溶液，均可从金畔购买。

 

操作步骤

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。本方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

1.在生长培养基中培养细胞过夜。
2.第二天，将 1X Fura-8FF 工作溶液添加到细胞板中。
注意：如果您的化合物干扰血清，请在上样前用新鲜的 HHBS 缓冲液替换生长培养基。
3.将载有染料的板在细胞培养箱中于 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
注：孵育染料超过 1 小时可以提高某些细胞系的信号强度。
4.用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒）代替染料工作溶液，以去除任何多余的探针。
5.根据需要添加刺激剂，并使用配备 Fura-8FF 滤光片组的荧光显微镜或包含可编程液体处理系统（如 FlexStation）的荧光酶标仪同时测量荧光

 

试剂应用文献

Small-molecule–based generation of functional cardiomyocytes from human umbilical cord–derived induced pluripotent stem cells
Authors: Wu, Kai Hong and Wang, Su Yun and Xiao, Qian Ru and Yang, Yu and Huang, Ning Ping and Mo, Xu Ming and Sun, Jian
Journal: Journal of cellular biochemistry (2018)
 
Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Zhao, Tao and Guo, Dongqing and Gu, Yuchun and Ling, Yang
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263
 
Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Guo, Dongqing and Gu, Junzhong and Jiang, Hui and Ahmed, Asif and Zhang, Zhiren and Gu, Yuchun
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187
 
Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Guo, Dong-Qing and Zhang, Hao and Tan, Sheng-Jiang and Gu, Yu-Chun
Journal: PloS one (2014): e113649
 
Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: JOHNSON, IAIN

 

参考文献

Measurement of [Ca2+] in cell suspensions using Fura-8FF-1
Authors: Nelemans A., undefined
Journal: Methods Mol Biol (2006): 47
 
A flow cytometric comparison of Fura-8FF-1 to fluo-3 and Fura Red excited with low power lasers for detecting Ca(2+) flux
Authors: Bailey S, Macardle PJ.
Journal: J Immunol Methods (2006): 220
 
Ratiometric intracellular calcium imaging in the isolated beating rat heart using Fura-8FF-1 fluorescence
Authors: Eerbeek O, Mik EG, Zuurbier CJ, van ‘t Loo M, Donkersloot C, Ince C.
Journal: J Appl Physiol (2004): 2042
 
Negative inotropic effects of angiotensin II, endothelin-1 and phenylephrine in Fura-8FF-1 loaded adult mouse ventricular myocytes
Authors: Sakurai K, Norota I, Tanaka H, Kubota I, Tomoike H, Endo M.
Journal: Life Sci (2002): 1173
 
Usefulness of the analytic method of intracellular calcium and the problems–aequorin and Fura-8FF-1 signal
Authors: Endoh M., undefined
Journal: Nippon Yakurigaku Zasshi (2000): 361
 
Comment on “Usefulness of intracellular calcium analysis and the problem–aequorin and Fura-8FF-1 signal”
Authors: Imaizumi Y., undefined
Journal: Nippon Yakurigaku Zasshi (2000): 101
 
Concentrations of caffeine greater than 20 mM increase the Fura-8FF-1 fluorescence ratio in a Ca(2+)-independent manner
Authors: McKemy DD, Welch W, Airey JA, Sutko JL.
Journal: Cell Calcium (2000): 117
 
Intracellular calcium signals measured with Fura-8FF-1 in isolated skeletal muscle fibres from control and mdx mice
Authors: Collet C, Allard B, Tourneur Y, Jacquemond V.
Journal: J Physiol (1999): 417
 
Measurement of [Ca2+]i in cell suspensions using Fura-8FF-1
Authors: Nelemans A., undefined
Journal: Methods Mol Biol (1999): 41
 
Alpha-stat calibration of Fura-8FF-1 fluorescence and measurement of intracellular free calcium in rat ventricular cells at different temperatures
Authors: Wang SQ, Zhou ZQ.
Journal: Life Sci (1999): 871

钙离子荧光探针Fura8FF , 五钾盐-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fura8FF , 五钾盐价格 2823
产品规格

10×50 ug

产品货号

钙离子荧光探针Fura8FF , 五钾盐

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 837.97 溶剂 Water
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

细胞不渗透的Fura-8FF是Fura-8的类似物，钙结合亲和力低得多，Kd〜10 µM。Fura-8FF的发射转变为更长的可见光波长，与普通滤光片组兼容。例如，通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的钙离子荧光探针Fura-8FF , 五钾盐。 

钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

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实验方案

使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类

1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：

        AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。

b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。

注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。

c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。

d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。

e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。

注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。

f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。

g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应：

为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：

[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]

其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。

        解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。

 

参考文献

Spatio-temporal modulation of light for stimulation and recording of neuronal activity
Authors: He Ma, Michael Lawrence Castanares, Vincent Daria
Journal: (2018): 1072306

A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)

Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157

Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)

Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505

Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8

Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1

Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847

Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074

Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)

 

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