操作步骤
简要概述
1.用测试化合物（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）制备细胞（样品）
2.加入等体积的ATP工作溶液（100μL/ 96孔板或25μL/ 384孔板）
3.在室温下孵育10-20分钟
4.监测发光强度
制备工作溶液
1.将10 mL反应缓冲液（组分C）转移到ATP传感器（组分B）中并充分混合。
2.将20μLATP监测酶（组分A）加入到组分B + C的瓶中并充分混合以制备ATP工作溶液。 注意：避免来自外源生物来源的潜在ATP污染。
有关细胞样品制备的指南（点击查看）
样品实验方案
1.运行ATP测定：
1.1用测试化合物处理细胞（或样品），在96孔板中加入10μL10X化合物，或在所需化合物缓冲液中加入5μL5X化合物用于384孔板。对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。
1.2将细胞板在37℃，5％CO 2培养箱中孵育所需的一段时间，例如24,48或96小时。
1.3向每个孔中加入100μL（96孔板）或25μL（384孔板）的ATP工作溶液。
1.4在室温下孵育10-20分钟。
1.5用标准发光计监测发光强度。
2.生成标准ATP校准曲线：
如果需要计算样品中ATP的绝对量，则应与上述分析一起生成ATP标准曲线。
2.1通过包含不含ATP的样品（作为对照）在含有0.1％BSA的PBS缓冲液中制备ATP系列稀释液以测量背景发光。注意：通常ATP浓度范围为0.1 nM至1μM是合适的。
2.2将相同量的稀释的ATP溶液加入空板中（对于96孔板为100μL或对于384孔板为25μL）。
2.3加入100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的ATP工作溶液。
2.4将反应混合物在室温下孵育10至20分钟。
2.5用标准发光计记录发光强度。
2.6生成ATP标准曲线。
数据分析
从空白标准孔获得的读数（RLU）用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值，以获得基线校正值。 然后，绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算ATP样品。 我们建议使用在线线性回归计算器，该计算器可在以下位置找到：
图1.使用NOVOstar板读数器（BMG Labtech）在96孔白板上用PhosphoWorks TM发光ATP测定试剂盒* DTT-Free *测量ATP剂量响应。 该试剂盒可在20分钟内检测到（3 pmole /孔）0.03 nM ATP。 积分时间为1秒。 半衰期超过2小时。
参考文献
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