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蛋白质氧化硝基化Nitrotyrosine分析——蛋白氧化损伤检测

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生物体内活性氧的生成与清除处于动态平衡状态，当各种因素打破这一平衡而导致活性氧浓度超过生理限度时就会损伤生物大分子，包括脂质过氧化、DNA的氧化损伤、蛋白质的氧化和单糖氧化等。活性氧对蛋白质的作用包括修饰氨基酸，使肽链断裂，形成蛋白质的交联聚合物，改变构像和免疫原性等五个方面。

目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个，分别是蛋白羰基生成（羰基化）和二酪氨酸的生成（蛋白质中蛋白质氧化硝基化Nitrotyrosine分析——蛋白氧化损伤检测酪氨酸硝基化）。Cell BioLabs为您提供完整的蛋白质氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）专门用于快速检测蛋白质发生氧化应激后，其羰基化程度；OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒）为检测细胞内蛋白质是否发生硝基化反应提供了便捷的解决方案；而OxiSelect™ AOPP Assay Kits（终末氧化蛋白产物分析试剂盒）则能快速的检测蛋白氧化后的损伤后果。

NO被超氧自由基氧化成（过氧化）亚硝酸离子，能够和蛋白质中的酪氨酸残基发生反应生成3-硝基酪氨酸(Nitrotyrosine)残基，也可以作为蛋白质氧化损伤的指标。但这种指标受到蛋白质样品种类的限制。如牛血清中酪氨酸含量比较多，容易观察到3-硝基酪氨酸的生成；而铜锌超氧化物歧化酶中仅含4个酪氨酸分子，因此一般不易观察到3-硝基酪氨酸的生成。并且，3-硝基酪氨酸的生成有一定的限度。即当3-硝基酪氨酸的生成达到饱和后，继续增加氧化物浓度不再增加3-硝基酪氨酸的量。3-硝基酪氨酸的生成可以用Amado方法，采用325 nm的激发光，415 nm处发射荧光是二酪氨酸的特征。

Cell BioLabs的OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒），直接检测硝基化蛋白内3-硝基酪氨酸的含量，参照阳性对照硝基化BSA中的3-硝基酪氨酸含量的标准曲线，得到实验数值。该检测方法高效灵敏，对于3-硝基酪氨酸的含量的检测灵敏度达到20nM-8.0μM。试剂盒内包含阳性对照，可完成96次检测。另外，该蛋白质硝基化分析试剂盒为您的蛋白质氧化损伤检测提供了多样选择。您可以根据您的实验要求，选择ELISA（目录号：STA-305/STA-305-5）、免疫印迹（目录号：STA-303）检测方法中的任何一种。

产品名称 货号 说明（点击查看说明书）
Nitrotyrosine ELISA Kit STA-305 ELISA比色法检测，一次96孔板分析
STA-305-5 ELISA比色法检测，五次96孔板分析
Nitrotyrosine Immunoblot Kit STA-303 免疫印迹杂交、ECL显色，10次分析
Protein Tyrosine Nitration Control (Nitrotyrosine-BSA) STA-304 10ug，标准曲线对照

上海金畔生物科技有限公司与美国知名细胞试剂服务商Cell BioLabs共同为您定制最优的细胞生物学解决方案，除了蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案；还为您提供脂质过氧化过程中壬烯(HNE)和丙二醛(MDA)检测试剂盒；另外对于核酸DNA、RNA的损伤检测，除了传统的8-OHdG/8-OHG定量、AP位点分析等，还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析；针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测，也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣，请请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。

蛋白质氧化羰基化分析——Cell BioLabs蛋白氧化损伤试剂盒

发表于由

自由基对蛋白质的作用包括蛋白质肽链断裂、蛋白质分子相互间交联聚合、蛋白质氨基酸发生氧化脱氨反应、氧自由基攻击蛋白质还原性基团、脂类氧化裂解所产生的丙二醛与蛋白质上的氨基产生分子间的交联等。目前对于蛋白质氧化损伤的检测指标主要有两个，分别是蛋白羰基生成（羰基化）和二酪氨酸的生成（蛋白质中酪氨酸硝基化）。Cell BioLabs为您提供完整的蛋白质氧化损伤检测方案，其OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）专门用于快速检测蛋白质发生氧化应激后，其羰基化程度；OxiSelect™ Protein Nitration (Nitrotyrosine) Assay Kits（蛋白质硝基化分析试剂盒）为检测细胞内蛋白质是否发生硝基化反应提蛋白质氧化羰基化分析——Cell BioLabs蛋白氧化损伤试剂盒供了便捷的解决方案；而OxiSelect™ AOPP Assay Kits（终末氧化蛋白产物分析试剂盒）则能快速的检测蛋白氧化后的损伤后果。

蛋白质羰基化是指氨基酸残基侧链中的氨基或亚氨基受到氧自由基攻击最后转变成醛基,并释放NH3的过程。其在体内的形成主要是通过金属离子催化氧化系统完成。在这个过程中，二价铁离子与蛋白质上的氨基酸残基形成铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物。H202作用于此配位复合物的铁(Ⅱ)上，产生·OH、OH-和铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物。·OH从侧链氨基酸上提出一个氢原子，使侧链氨基酸上的碳上有一个不配对电子。在此不配对电子作用下，铁(Ⅲ)一蛋白质配位复合物又重新变回铁(Ⅱ)一蛋白质配位复合物，随后配位键断开，二价铁离子和NH3与复合物分离，由此在蛋白质侧链形成羰基或羰基衍生物。蛋白质中的赖氨酸、精氨酸、脯氨酸、苏氨酸残基都有可能参与糖基化。

蛋白质氧化损伤羰基化的检测目前主要使用2，4-二硝基苯肼法。传统方法多是采用比色法，虽然操作简单但是误差很大，但不能满足精密的蛋白质糖化测定要求。Buss及其同事采用免疫反应的原理使用DNP抗体检测蛋白质羰基化程度，但是在具体的操作中，用TCA沉淀蛋白的时候会有至少20%的总蛋白损失，导致了其结果的不准确。Cell BioLabs的OxiSelect™ Protein Carbonyl Assay Kits（蛋白质羰基化分析试剂盒）则提供了更优的选择，使用该羰基化检测试剂盒，无需蛋白浓缩沉淀从而降低了中间的损失，而且检测灵敏度也由原来的>4 mg/mL大幅提高到10 μg/mL。

产品名称 货号 说明（点击查看说明书）
OxiSelect™ Protein Carbonyl ELISA Kit STA-310 比色法检测，一次96孔板分析
STA-310-5 比色法检测，五次96孔板分析
OxiSelect™ Protein Carbonyl Spectrophotometric Assay STA-315 分光光度计法检测，40次分析
OxiSelect™ Protein Carbonyl Immunoblot Kit STA-308 免疫印迹杂交、ECL显色，10次标准7.5 cm X 8.5 cm分析
Oxidized Protein Immunoblot Control (Carbonyl-BSA) STA-309 10ug，标准曲线对照

OxiSelect™ 蛋白质羰基化分析试剂盒为您提供多种检测方案，您可以根据您的实验要求，选择ELISA（目录号：STA-310/STA-310-5）、免疫印迹（目录号：STA-308）或者分光光度计（目录号：STA-315）检测方面中的任何一种。

上海金畔生物科技有限公司与美国知名细胞试剂服务商Cell BioLabs共同为您定制最优的细胞生物学解决方案，除了蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案；还为您提供脂质过氧化过程中壬烯(HNE)和丙二醛(MDA)检测试剂盒；另外对于核酸DNA、RNA的损伤检测，除了传统的8-OHdG/8-OHG定量、AP位点分析等，还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析；针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测，也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣，请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案，或索取最新的Cell BioLabs产品资料。