ThiolTrace Violet 500*谷胱甘肽检测试剂*是美国AAT Bioquest生产的荧光染料，GSH的亚细胞检测和定位对于了解氧化还原状态的调节，药物的作用以及排毒的机制非常重要。ThiolTrace Violet 500是一种比通常使用的mBBr，mBCl或Thiotracker Violet更亮，更坚固的细胞内硫醇探针，可用于监测细胞内GSH。由于还原型谷胱甘肽代表细胞中细胞内大多数游离巯基，因此ThiolTrace 紫罗兰500可用于估算还原型谷胱甘肽的细胞水平。它比mBCL和其他细胞内常见的硫醇检测探针（例如Thiotracker紫罗兰色）至少亮10倍，并且可以通过紫外线或405 nm的大斯托克斯位移进行激发。它可以用醛固定，并通过Triton®X-100（0.5％）渗透。它可以用于包括细胞毒性研究在内的多重分析中。ThiolTrace Violet 500提供了一种简单，灵敏且可重现的工具来检测生物样品中降低的GSH含量。ThiolTrace Violet 500与硫醇反应，在普通的405 nm紫激光下激发出520-530 nm的强荧光。与ThiolTracker紫罗兰（Thermo Fisher Scientific）相比，ThiolTrace紫罗兰500在含有生长因子的细胞培养基中的强度高10-100倍。ThiolTrace Violet 500与多种稀释剂兼容，包括含血清的细胞培养基。ThiolTrace Violet 500可用于流式细胞仪，HCS成像和落射荧光显微镜。

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样品实验方案

简要概述

1.用5×10 ⁵到1×10 ⁶细胞/ mL 的密度制备含测试化合物的细胞

2.准备ThiolTrace Violet 500工作溶液并将其添加到细胞中

3.在37 ^o C 孵育20至30分钟

4.在Ex / Em = 405/525 nm处读取荧光强度-Pacific Orange

溶液配制

1.储备溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
ThiolTrace 紫罗兰色500储备液（500X）：
在小瓶ThiolTrace Violet 500中加入200 µL DMSO（未提供），并充分混合。 注意：分装并在-20℃下存储未使用的ThiolTrace Violet 500储备液。 避免重复冷冻/融化循环。

2.工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
将1 µL ThiolTraceTM紫罗兰色500储备溶液加入您选择的0.5 mL缓冲液中，并充分混合。 注意：可以在含有血清的细胞培养基中制备ThiolTrace Violet 500工作溶液。

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操作步骤

1.用测试化合物处理细胞所需的时间。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用ThiolTrace 紫罗兰色工作溶液孵育之前，用含血清的培养基洗涤细胞一次。注意：适当的孵育时间取决于所用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。

2.将细胞以1000 rpm的速度离心4分钟，然后用1 mL所选缓冲液（可选）洗涤细胞。

3.将细胞重悬于0.5 mL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液中，并在37oC培养箱中孵育20至30分钟。注意：对于荧光显微镜，每孔添加200 µL ThiolTraceTM Violet 500工作溶液。

4.以1000 rpm离心细胞4分钟，然后在1 mL所选缓冲液（可选）中洗涤细胞。

5.重悬于缓冲液中，使用太平洋橙滤光片组（Ex / Em = 405/525 nm），用流式细胞仪监测荧光强度。

参考文献

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