钙离子荧光探针Fura2AM CAS 108964-32-5-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fura2AM CAS 108964-32-5价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura2AM CAS 108964-32-5

产品参数
Ex (nm) 336 Em (nm) 505
分子量 1001.86 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-2,AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂,钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4 系列钙检测试剂是亮的绿色和红色钙指示剂,而我们的Cal-520®和Cal-590 具有高的细胞内钙检测信号/背景比,因为它们具有出色的保留活细胞。 AAT Bioquest以高质量提供其他钙指标,如Fluo-4,Fluo-3,Fura-2,Indo-1,Rhod-5N和Rhod-2 AM,金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。

点击查看光谱

点击查看实验方案

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Fura 2 滤波片组
Em: Fura 2 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 340, 380 nm
Em: 510 nm
Cutoff: 475 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

 

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

 

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用等式:[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Measurement of cytoplasmic Ca2+ concentration in Saccharomyces cerevisiae induced by air cold plasma
Authors: DONG Xiaoyu
Journal: Plasma Science and Technology (2018): 044001

Phospholipase Cγ2 is critical for Ca 2+ flux and cytokine production in anti-fungal innate immunity of human corneal epithelial cells
Authors: Xudong Peng, Guiqiu Zhao, Jing Lin, Jianqiu Qu, Yingxue Zhang, Cui Li
Journal: BMC ophthalmology (2018): 170

The effect of S100A6 on nuclear translocation of CacyBP/SIP in colon cancer cells
Authors: Shanshan Feng, Qiaozhi Zhou, Bo Yang, Qianqian Li, Aiqin Liu, Yingying Zhao, Changqing Qiu, Jun Ge, Huihong Zhai
Journal: PloS one (2018): e0192208

Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
Journal: The International Journal of Biochemistry & Cell Biology (2017)

Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

 

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钙离子荧光探针Fura-2,AM Cat#21021

钙离子荧光探针Fura2AM 超级纯 CAS 108964-32-5-AAT Bioquest荧光染料

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钙离子荧光探针Fura2AM 超级纯 CAS 108964-32-5价格 2111
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura2AM 超级纯 CAS 108964-32-5

产品参数
Ex (nm) 336 Em (nm) 505
分子量 1001.86 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-2,AM是美国AAT Bioquest研发的用于钙通量测定的试剂,钙通量测定是用于筛选G蛋白偶联受体(GPCR)的药物发现中的优选方法。 我们的Fluo-8®和Rhod-4 系列钙检测试剂是亮的绿色和红色钙指示剂,而我们的Cal-520®和Cal-590 具有高的细胞内钙检测信号/背景比,因为它们具有出色的保留 活细胞。 AAT Bioquest以高质量提供其他钙指标,如Fluo-4,Fluo-3,Fura-2,Indo-1,Rhod-5N和Rhod-2 AM,金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Fura 2 滤波片组
Em: Fura 2 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 340, 380 nm
Em: 510 nm
Cutoff: 475 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

操作步骤

1.使用钙指示剂AM Esters加载细胞:

        AM酯是非极性酯,其易于穿过活细胞膜,并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。 AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。 但是,使用AM酯时必须小心,因为它们易于水解,特别是在溶液中。 它们应该用高质量的无水二甲基亚砜(DMSO)重新配制。 DMSO储备溶液应在-20°C下干燥储存并避光。 在这些条件下,AM酯应稳定数月。

以下是我们推荐的将AM酯加载到活细胞中的方案。 该方案仅提供指南,实际应根据您的具体需求进行修改。

 

a)在高质量无水DMSO中制备2至5 mM AM酯原液。

b)在实验当天,将钙指示剂溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。使用0.02%Pluronic®F-127在您选择的缓冲液(如Hanks和Hepes缓冲液)中制备1至10μM的工作溶液。对于大多数细胞系,我们建议钙指示剂的终浓度为4-5 uM。细胞加载所需指标的确切浓度必须根据经验确定。为避免因过载和潜在染料毒性引起的任何伪影,建议使用可产生足够信号强度的小探针浓度。

c)如果您的细胞含有有机阴离子转运蛋白,可以在细胞培养基中加入丙磺舒(1-2.5 mM)或磺吡酮(0.1-0.25 mM),以减少脱酯化指标的泄漏。在室温或37°C下用钙指示剂酯孵育细胞20分钟至1小时。

d)在HHBS或您选择的缓冲液(含有阴离子转运蛋白抑制剂,如2.5mM丙磺舒,如果适用)中洗涤细胞1-2次以除去过量的探针。

e)在所需的Ex / Em波长下进行实验。

 

2.测量细胞内钙响应:

 

        为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd,使用等式:[Ca]free = Kd[F – Fmin]/Fmax – F]

        其中F是实验钙水平下指示剂的荧光,Fmin是不存在钙时的荧光,Fmax是钙饱和探针的荧光。 解离常数(Kd)是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比,荧光指示剂的Ca2 +结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显著。 细胞内指标的原位校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca 2+缓冲液来进行原位校准。 或者,细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2 +水平。 说明书中的表1列出了一些钙试剂的Kd值供您参考。

 

参考文献

Measurement of cytoplasmic Ca2+ concentration in Saccharomyces cerevisiae induced by air cold plasma
Authors: DONG Xiaoyu
Journal: Plasma Science and Technology (2018): 044001

Phospholipase Cγ2 is critical for Ca 2+ flux and cytokine production in anti-fungal innate immunity of human corneal epithelial cells
Authors: Xudong Peng, Guiqiu Zhao, Jing Lin, Jianqiu Qu, Yingxue Zhang, Cui Li
Journal: BMC ophthalmology (2018): 170

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Authors: Shanshan Feng, Qiaozhi Zhou, Bo Yang, Qianqian Li, Aiqin Liu, Yingying Zhao, Changqing Qiu, Jun Ge, Huihong Zhai
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Calreticulin regulates TGF-β1-induced epithelial mesenchymal transition through modulating Smad signaling and calcium signaling
Authors: Yanjiao Wu, Xiaoli Xu, Lunkun Ma, Qian Yi, Weichao Sun, Liling Tang
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Dexmedetomidine reduces hypoxia/reoxygenation injury by regulating mitochondrial fission in rat hippocampal neurons
Authors: Jia Liu, Qing Du, He Zhu, Yu Li, Maodong Liu, Shoushui Yu, Shilei Wang
Journal: Int J Clin Exp Med (2017): 6861–6868

Monosialoganglioside 1 may alleviate neurotoxicity induced by propofol combined with remifentanil in neural stem cells
Authors: Jiang Lu, Xue-qin Yao, Xin Luo, Yu Wang, Sookja Kim Chung, He-xin Tang, Chi Wai Cheung, Xian-yu Wang, Chen Meng, Qing Li
Journal: Neural Regeneration Research (2017): 945

Obtaining spontaneously beating cardiomyocyte-like cells from adipose-derived stromal vascular fractions cultured on enzyme-crosslinked gelatin hydrogels
Authors: Gang Yang, Zhenghua Xiao, Xiaomei Ren, Haiyan Long, Kunlong Ma, Hong Qian, Yingqiang Guo
Journal: Scientific Reports (2017): 41781

Di (2-ethylhexyl) phthalate-induced apoptosis in rat INS-1 cells is dependent on activation of endoplasmic reticulum stress and suppression of antioxidant protection
Authors: Xia Sun, Yi Lin, Qiansheng Huang, Junpeng Shi, Ling Qiu, Mei Kang, Yajie Chen, Chao Fang, Ting Ye, Sijun Dong
Journal: Journal of cellular and molecular medicine (2015): 581–594

The effect of mitochondrial calcium uniporter on mitochondrial fission in hippocampus cells ischemia/reperfusion injury
Authors: Lantao Zhao, Shuhong Li, Shilei Wang, Ning Yu, Jia Liu
Journal: Biochemical and biophysical research communications (2015): 537–542

Fungus induces the release of IL-8 in human corneal epithelial cells, via Dectin-1-mediated protein kinase C pathways.
Authors: Xu-Dong Peng, Gui-Qiu Zhao, Jing Lin, Nan Jiang, Qiang Xu, Cheng-Cheng Zhu, Jain-Qiu Qu, Lin Cong, Hui Li
Journal: International journal of ophthalmology (2014): 441–447

 

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钙离子荧光探针Fura-2,AM Cat#21020

钙离子荧光探针Fura8AM-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。
钙离子荧光探针Fura8AM价格 1386
产品规格

1 mg

产品货号

钙离子荧光探针Fura8AM

产品参数
Ex (nm) 354 Em (nm) 524
分子量 951.90 溶剂 DMSO
存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
产品概述

钙离子荧光探针Fura-8, AM是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针,虽然Fura-2已被广泛用作优选的激发比率钙指示剂,但它具有某些局限性,例如与单波长钙染料如Fluo-8®和Cal-520®相比灵敏度较低。AAT开发了Fura-8 以进一步Fura-2的钙响应。Fura-8的发射转换为更长的可见波长,与普通滤波器组兼容。它具有相当的钙亲和力(对Fura-2)。Fura-8 AM比Fura-2 AM对钙更敏感,信号/背景比高于Fura-2 AM。我们建议使用Ex / Em = 354 / 530nm和415 / 530nm进行比率测量,即通过监测530nm处的发射强度来计算354nm和415nm处的激发强度比。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商,为您提供优质的钙离子荧光探针。

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钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

适用仪器


荧光显微镜  
Ex: Fura 2 滤波片组
Em: Fura 2  滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板

 


荧光酶标仪  
Ex: 355, 415 nm
Em: 530 nm
Cutoff: 470 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 底读模式/可分液处理
实验方案

操作说明

1.准备HHBS缓冲液,10%Pluronic®F-127溶液和25 mM Probenecid溶液。
 

2.在高质量无水DMSO中制备2 mM至5 mM Fura-8 ,AM原液。
2.1使用量的Fura-8 ,AM:1 mg
2.2所需浓度:2 mM
2.3在合适的容器中,将1mg Fura-8 TM,AM与525.27μL无水DMSO混合。

 

3.使用10μMFura-8 ,AM 4在HHBS中制备2X工作溶液,0.08%Pluronic®F-127和2 mM丙磺舒。
3.1终孔内浓度为Fura-8 ,AM:5μM
3.2Pluronic®F-127的终井内浓度:0.04%
3.3终孔内浓度的丙磺舒:1mM
3.4在合适的容器中混合16μLFura-8 ,AM,25.6μL10%Pluronic F-127和256μL25mM丙磺舒。下一个,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为3.2 mL。
注意:对于大多数细胞系,我们建议使用Fura-8™的终浓度,AM为4至5μM。
注意:推荐的Pluronic F-127井浓度终为0.02%至0.04%。
注意:推荐的终浓度为1至2.5 mM的Probenecid。
 

4.将100μL染料工作溶液加入已经含有100μL培养基的所需孔中。
4.1该步骤将染料工作溶液从2X稀释至1X,并将每种组分的终浓度调节至以下:5μMFura-8 TM,AM,0.04%Pluronic®F-127,1mM丙磺舒。
 

5.孵育染料
5.1将染料加载板在细胞培养箱中孵育20-120分钟。
5.2将染料加载板在室温下孵育30分钟。
 

6.用1.0 mM Probenecid准备HHBS缓冲液(或您选择的缓冲液)。
6.1在合适的容器中加入160μL的25mM丙磺舒。接下来,添加HHBS或您选择的缓冲液,直到体积为4 mL

7.用HHBS缓冲液或您选择的缓冲液替换染料工作溶液,使用1.0 mM Probenecid。
7.1首先,从所需孔中除去200μL染料工作溶液和培养基。
7.2在相同的孔中加入200μL含有1.0mM丙磺舒的HHBS(或您选择的缓冲液)。
 

8.运行实验
8.1为您的样品添加所需的处理。
8.2以Ex / Em = 354/525 nm运行实验。

 

参考文献

Nifedipine stimulates proliferation and migration of different breast cancer cells by distinct pathways
Authors: Tao Zhao, Dongqing Guo, Yuchun Gu, Yang Ling
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 2259–2263

Inhibition of pyruvate kinase M2 by reactive oxygen species contributes to the development of pulmonary arterial hypertension
Authors: Dongqing Guo, Junzhong Gu, Hui Jiang, Asif Ahmed, Zhiren Zhang, Yuchun Gu
Journal: Journal of molecular and cellular cardiology (2016): 179–187

Nifedipine promotes the proliferation and migration of breast cancer cells
Authors: Dong-Qing Guo, Hao Zhang, Sheng-Jiang Tan, Yu-Chun Gu
Journal: PloS one (2014): e113649

Bioanalytics/Illumination: Just-right light-Inherently adaptive for application-specific needs
Authors: IAIN JOHNSON
Journal: Unknown