操作步骤
准备2-10 mMDMSO储备溶液
对于＃22014添加45微升DMSO成50 μ 克小瓶使2mM的储备溶液（1毫克/毫升，相当于1.8毫摩尔）;
对于＃22015添加36微升DMSO成50 μ 克小瓶制成10mM储备溶液（1毫克/毫升，相当于1.46毫摩尔）;
对于＃22016，加入153μLDMSO以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于1.53mM）;
对于＃22017，加入215uL ml DMSO以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于2.15mM）;
对于＃22020，将4.2mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液（1mg / ml相当于~2.4mM）;
注意：应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在< -20 o C冷冻。避免反复冻融循环，避免光照。
准备染料工作溶液
在使用之前，通过用Hanks和20mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH7）稀释来自步骤1的DMSO储备溶液，制备1至20μM染料工作溶液。通过涡旋混合均匀。
用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞：
3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间。
3.2离心细胞，每管2-10×10 5个细胞。
3.3将细胞重悬于500μL 染料工作溶液中（来自步骤2）。
3.4在室温或37° C 下用染料溶液孵育细胞15至30分钟，避光。
3.5从细胞中取出染料工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中，得到每管2-10×10 5个细胞。
3.6使用流式细胞仪（FL1通道） 或荧光显微镜监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。
注意：对于细菌细胞染色：当通过测试细菌过夜生长预处理的营养肉汤中1：800稀释储备溶液时，染色是有效的，但也可以使用新鲜牛肉膏或PBS。细菌悬浮液应用PBS稀释至每毫升10 5 -10 7个生物。可以通过将1ml溶液施加到.45μm过滤器（25mm）并真空过滤除去溶液，然后加入1ml染料溶液并在室温下孵育5-10分钟来染色细菌。
参考文献
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