AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit

碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AP)是一种普遍存在的二聚金属酶类,由Suzuki等在1907年首先发现的。生理作用是非特异性水解磷酸单酯键,分子量大小为120kDa,最适pH值为8.6-10.3,因此称为碱性磷酸酶。AP广泛运用于酶联(ELISA)、Western Bloting以及免疫组化技术等,作为多个试剂盒显色体系的关键成分,对试剂盒的质量有重要影响。碱性磷酸酶比活性高,稳定,所以经常被用于抗体或其他蛋白质的标记,而不会影响偶联蛋白的活性和功能。

戊二醛由于具有较低的价格和较高的活性,已成为最常用的用于AP偶联的交联试剂。这种使用戊二醛的AP偶联标记方法已经被广泛认可,但是也存在一定的缺陷,比如在标记时对戊二醛和抗体间的比率非常敏感,不合适的配AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit比可能会导致较低的溶解性和酶活力;同时在标记过程中,也很难避免不同活力的混合物出现,因此在偶联时,待偶联反应发生后需要进行淬灭,纯化并去除多余的交联物;另外,对于待偶联物不同的制备来源和分子量大小,都会对最终的交联反应产生较大的影响。马来酰亚胺(maleimide)也被用于交联反应,其糖基部分可以与巯基反应以形成稳定的偶联物,但是需要提前对偶联抗体或蛋白进行二硫键还原处理。

SureLINK AP Conjugation Kits AP偶联标记试剂盒内提供了一个比上述方法更优秀更快捷的AP偶联方案。其原AP标记蛋白/抗体试剂盒—SureLINK™ AP Conjugation Kit理是采用双偶联的技术分别对AP和抗体进行交联,如左上图所示。琥珀酰亚胺-4-苯甲酸甲酯Succinimidyl-4-Formyl Benzoate (SFB)的醛基与抗体蛋白结合,同时Succinimidyl 6-hydrazinonicotinate Acetone Hydrazone(SANH)的肼基偶联上AP,这样通过醛基与肼基之间形成稳定的腙键而实现抗体蛋白与AP的偶联。

作为即用型的组分,SureLINK™AP偶联蛋白/抗体试剂盒能在90分钟制备完成标记HRP的抗体或蛋白。制备好的AP标记的抗体或蛋白能在4℃稳定保存至少半年。试剂盒内包括SureLINK Modified AP(干粉)、AP激活及偶联缓冲液、SFB以及AP储存缓冲液。每毫克经SFB修饰的AP可结合0.1-0.5mg抗体或蛋白,特别适合于AP单克隆抗体的制备。经SureLINK AP Conjugation Kits 偶联试剂盒标记的抗体,结合相应的显色或化学发光底物,可应用于ELISA、WB及免疫组化等方法的免疫学检测及定量分析。

SureLINK™ AP标记抗体/蛋白试剂盒具有以下优点:

  • 方便快速:两步反应(见右),近三个小时(20分钟手动工作)就可以完成整个交联反应;
  • 活性强:可以标记从0.05mg到1.5mg范围的抗体(蛋白);
  • 通用性:可以用于下游各种免疫检测实验,比如ELISA, Western blotting和免疫组化
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
SureLINK AP Conjugation Kit 85-00-01 3 x 0.1 mg rxn.
85-00-02 5 x 0.5 mg rxn.
产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
SureLINK Modified AP 85-01-01 0.2mg包装
85-01-02 1.0mg包装

除了完整的AP标记抗体/蛋白试剂盒,还有单独组分的SureLINK Modified AP(干粉状的激活AP)提供。

作为美国最早实现亲和素纯化二抗商业化的生物公司,同时也是世界上较大的二抗和底物显色系统的生产商。 KPL一直提供高质量的用于分子生物学、免疫学、细胞生物学和体外诊断试剂及用于蛋白和核酸检测的试剂盒。针对于蛋白标记以及蛋白偶联,KPL有HRP及AP标记及偶联试剂盒,还有专门用于两个蛋白质之间的偶联试剂盒提供。另外还有多种化学发光和显色底物及相关产品,以及全系列针对不同种属的各种标记的现货二抗。如果您对KPL的产品感兴趣,请致电021-50837765 到上海金畔生物科技有限公司免费索取相关产品资料,或者问询您所感兴趣的产品类型。

DNA断裂定量分析(AP位点)——DNA/RNA损伤分析

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧(ROS)尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基,产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点(AP位点)。事实上,AP位点(AP Sites)是由ROS产生的损伤的主要类型。据估计,每个哺乳动物细胞,每天能产生50,000到200,000个AP位点,这些不能及时修复的AP位点会进一步抑制拓扑异构酶活性、DNA的复制以及转录等功能,并导致基因的癌变。

针对DNA/RNA损伤的检测,上海金畔生物科技有限公司向您推荐Cell BioLabs完整的DNA/RNA氧化损伤检测方案,其OxiSelect™ Oxidative DNA / RNA Damage ELISA Kits(8-OHdG or 8-OHG Quantitation)提供了快速高效检测核酸中8-OHG或8-OHdG含量的实验方案;OxiSelect™ Comet Assays (Single Cell Gel Electrophoresis)则为您提DNA断裂定量分析(AP位点)——DNA/RNA损伤分析供多种选择的彗星分析产品;针对DNA损伤中的AP位点检测,Cell Biolabs的OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)则使用经典的ARP检测方案;DNA双链断裂分析为您提供了快捷的DSB分析试剂。

这些细胞在氧化损伤中发生的DNA嘌呤或者嘧啶碱基直接脱去的反应,并形成核酸中无嘌呤(apurinic)和脱嘧啶(apyrimidinic)位点,统简称AP位点。OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)(货号:STA-324)则专门为AP位点的高灵敏检测而定制,可用于细胞、组织等多种来源的基因组样品。

由于醛反应性探针(ARP;N’-氨氧甲基羰肼基-D-生物素)特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。Cell Biolabs的OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites)用过量ARP试剂反应后,DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法,用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。该DNA断裂定量试剂盒(AP位点)包含用于检测每1×10e5个碱基对中4到40个AP位点的所有必需溶液,试剂盒内包括标准对照,针对96孔板分析,能完成至少50次检测。

产品名称 货号 产品说明(点击查看说明书)
OxiSelect™ Oxidative DNA Damage Quantitation Kit (AP Sites) STA-324 通过酶联反应检测,50次分析

上海金畔生物科技有限公司向您推荐Cell BioLabs完整的DNA/RNA损伤检测方案,其产品覆盖上述最重要的DNA/RNA损伤分析产品,为您提供最优的检测方案。除了常见的AP位点分析以及8-OHdG/8-OHG定量分析,还有基于单细胞水平的彗星分析和DNA双链断裂分析等。除了DNA/RNA损伤,还包括脂质过氧化过程中壬烯(HNE)、丙二醛(MDA)以及8-异前列腺素F2a(8-Isoprostane)ELISA分析检测试剂盒;对于蛋白质的羰基化、硝基化以及终末氧化蛋白产物分析等蛋白氧化损伤检测方案;针对活性氧基团和抗氧化剂的活力检测,也由多种试剂和试剂盒供您选择。如果您对以上产品感兴趣,请致电021-50837765到上海金畔生物科技有限公司垂询氧化应激及损伤相关的实验解决方案,或索取最新的Cell BioLabs产品资料。