使用荧光核酸染色剂 LUCS 13 对活细胞进行染色

使用荧光核酸染色剂 LUCS 13 对活细胞进行染色

LUCS 13 是一种可渗透细胞的核酸染料,在与核酸结合后呈现绿色荧光。该染料具有高荧光产量,且结构与 SYTO™13 染料相同。

LUCS 13 用于对活的和死的真核细胞以及革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中的 DNA 和 RNA 进行染色。染料被 488 nm 的蓝色激光激发。其荧光发射在荧光素通道中检测到,与 DNA 结合时峰值为 509 nm,与 RNA 结合时峰值为 514 nm。

该染料可用于同时标记细胞不可渗透的核标记物(例如 YoDi-3),以使用荧光显微镜和流式细胞术评估细胞活力。

协议

确切的方案取决于具体的细胞类型和实验任务。一般来说,可以描述如下:

  1. 准备 50 µM LUCS 13 储备溶液。为此,将 990 µl 去离子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。储备液可以等分并冷冻以供长期储存。

  2. 要制备 1 µM LUCS 13 工作溶液,请将 20 µl 50 µM LUCS13 库存添加到 980 µl PBS 中。

  3. 以合适的方式小心地从生长表面去除贴壁细胞。对于悬浮细胞,从下一点开始工作。

  4. 用冷 PBS(pH 7.4)清洗细胞一次。 300 g离心 5 分钟获得种子细胞

  5. 将细胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分钟。

  6. 300 g离心 5 分钟去除染料溶液

  7. 用 PBS 清洗细胞一次。

  8. (可选)如有必要,可以将细胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分钟,用 PBS 洗涤,然后用另一种染色剂重新染色。

重要的

  • 处理 LUCS 13 溶液时请使用塑料瓶,因为稀释的染料可能会粘在玻璃上。

  • 使用无磷酸盐缓冲液(例如盐水中的 15 mM HEPES)可获得更明亮的染色结果。

  • 在开始实验之前,测试几种染料浓度范围从 10 nM 到 5 µM,以确定最佳的染料稀释度。染色结果受许多因素影响:生长培养基、细胞密度、其他细胞类型的存在、染色持续时间等。

用内质网染色剂对活细胞进行染色 LumiTracker ER

用内质网染色剂对活细胞进行染色 LumiTracker ER

LumiTracker ER Green 和 LumiTracker ER Red 具有细胞渗透性,对内质网 (ER) 染色剂具有高度选择性,可用于活细胞成像。两种 ER 染色剂都是 BDP 染料与格列本脲(格列本脲)偶联的衍生物。格列本脲与 ATP 敏感钾通道 (K ATP ) 的磺酰脲 (SUR) 受体结合,该受体在内质网上很突出。

用甲醛固定后,染色部分保留。 LumiTracker ER Green 和 LumiTracker ER Red 不适合对固定后的细胞进行染色。

注意:格列本脲的药理活性可能会影响 ER 功能。某些特殊细胞类型中磺脲类受体的可变表达可能会导致非 ER 标记。

溶液的制备

1.1 库存溶液的制备

  • 将 50 μg LumiTracker ER Green 溶解在 64 μL DMSO 中,以获得 1 mM 储备溶液。

  • 将 50 μg LumiTracker ER Red 溶解在 55 μL DMSO 中,以获得 1 mM 储备溶液。

注意:我们建议将储备溶液储存在−20°C或−80°C避光条件下。避免反复冻融循环。

1.2 工作液的配制

用钙和镁 (HBSS/Ca/Mg) 在 Hank's 平衡盐溶液中稀释 LumiTracker ER 染色剂的储备溶液,以获得工作溶液。使用 100 nM 至 1 μM 的浓度。 LumiTracker ER 染色剂的稀释度取决于细胞类型和密度,应通过实验确定。

细胞染色

2.1 悬浮细胞染色

  1. 1000 g离心细胞悬液 3-5 分钟;弃去上清液。

  2. 用预热的 HBSS 在 37°C 下清洗细胞两次,每次 5 分钟。

  3. 推荐的细胞密度为1×10 6 个细胞/mL。

  4. 将 1 mL 预热的 LumiTracker ER 工作溶液添加到管中,并在 37 °C 和 5% CO 2下孵育细胞 15-30 分钟

  5. 室温下以 400 g离心细胞 3-4 分钟;弃去上清液。

  6. 用培养基清洗染色细胞两次。

  7. 用无血清细胞培养基或 PBS 重悬细胞。

  8. 通过流式细胞仪分析细胞。

  9. 对于荧光显微镜,将一滴染色的细胞悬浮液转移到载玻片上。用盖玻片盖住细胞。

2.2 贴壁细胞染色

  1. 在无菌盖玻片上培养细胞。

  2. 贴壁细胞可以直接在盖玻片上染色。

  3. 从盖玻片中吸出介质。

  4. 用 37°C 预热的 HBSS 冲洗细胞。

  5. 加入 100 μL 预热的 LumiTracker ER 工作溶液,轻轻摇动以全覆盖细胞。在 37 °C 和 5% CO 2下孵育细胞 15-30 分钟

  6. 用培养基清洗染色细胞两次。

  7. 如果通过流式细胞术检测,则需要在染色前重悬细胞。

  8. 对于荧光显微镜,将带有染色细胞的盖玻片翻转到载玻片上,将它们放置在载玻片和盖玻片之间。

细胞固定

  1. 如果要固定染色的细胞,请在 4% 甲醛中于 4 °C 下孵育 2 分钟。

  2. 固定细胞用 PBS 清洗两次,每次 5 分钟。

  3. 使用封固剂将细胞封固在盖玻片下

vectorlabs复染剂和特殊染色剂简介

vectorlabs复染剂和特殊染色剂简介

vectorlabs复染剂和特殊染色剂组织学染色可改善目标可视化和定位——组织学染色剂和复染剂将颜色引入特定的细胞结构,以提供与有色酶底物的对比。这使得目标更容易看到,从而更容易解释组织形态和细胞结构。

复染剂

复染细胞核,并包装为方便、即用的溶液,可在载玻片或染色皿中使用。可供您使用(请参阅下面的选择指南):

  • Vector ® 苏木精 — 基于吉尔的配方,可调整至最佳强度;适用于非水性和水性封固剂,不含汞和酒精

  • Vector ® 苏木精 QS  — 基于 Mayer 苏木精的改良版,专为免疫细胞化学 (ICC) 开发。它在 45 秒内染色,适合与非水性和水性封固剂一起使用,并且不含汞

  • Vector ® 甲基绿 — 提供简单的两步程序,当苏木精遮盖底物颜色时,它是多重抗原标记的佳替代方案。它适合与非水封固剂一起使用

  • Vector ® 核固红 — 提供快速、一步操作方案,当苏木精遮盖底物颜色时,它是多抗原标记的佳替代方案

  • 苏木精 和伊红染色试剂盒 — 包括用于细胞质染色的改良伊红和用于清晰、深蓝色细胞核的苏木精

 

特殊污渍

使用 Alcian Blue (pH 2.5) 染色试剂盒可视化硫酸化和羧化酸性粘多糖以及硫酸化和羧化唾液酸粘蛋白(糖蛋白)。

  • 酸性硫酸化粘液物质(蓝色)

  • 透明质酸:蓝色

  • 唾液酸粘蛋白(蓝色)

  • 细胞核(红色)