wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide
什么是Phos-tag™
Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子,结合特异性与氨基酸的种类和序列无关,无放射性,无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离(Phos-tag™ Acrylamide)、Western Blot 检测(Phos-tag ™ Biotin)、蛋白纯化 (Phos-tag ™ Agarose)及质谱分析MALDI-TOF/MS (Phos-tag ™ Mass Analytical Kit) 。
Phos-tag的基本结构:

 
 
 
 
 
 
1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同,区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag Acrylamide和MnCl2即可进行实验(制胶过程中添加,如需详细说明请联系我们)。

特点
# 非放射性元素,非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便,与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后,可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定,溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用


1、黄色粘性油状物质;
2、在4度可保存至少一年;
3、Phos-tagTM与丙烯酰胺(Acrylamide,SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。
SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子(Zn2+或者Mn2+)和Phos-tagTM Acrylamide。
在蛋白电泳过程中,磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合,导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。
Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同,区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。
操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。
适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。
Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。
可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

产品编号 产品名称 规格 原价
304-93526 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3ml 2670
300-93523 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 4450
304-93521 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)     Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]Protocol(点击进入下载)

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)   Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]Protocol(点击进入下载)
 
 
References  参考文献:

    1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

 

    1. “Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
      Proteomics
      , 5, 749-757 (2006).

 

    1. “A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

 

    1. “Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

 

    1. “Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

 

    1. “A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

 

    1. “Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

 

    1. “FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

 

    1. “Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike, Electrophoresis, 30, 550-559 (2009).

 

    1. “Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

 

    1. “Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

 

  1. “Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag,用于磷酸化蛋白的WB检测
Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™,可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。
特点:

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例:

应用实例:使用Phos-tagBTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白:Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白:α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白: (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]Protocol(点击进入)

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]Protocol(点击进入)
产品描述
1、粉末;
2、在4度可保存至少一年;
3、检测磷酸化蛋白;
4、Phos-tagTM与生物素(Biotin)结合可与亲和素标记的HRP结合,检测磷酸化蛋白。
可用于免疫印迹实验,二维电泳。
产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链(Linher)长度不一,但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高,推荐使用溶解性比较高的BTL-104。
wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答

Wako维生素E标准品套装

Wako维生素E标准品套装

产品编号

产品名

产品中文名

包装

302-07111

Vitamin E Reference Standard

维生素E标准品套装

1set

试剂盒包含以下几种物质::

1. d-α-生育酚  250mg x1瓶

2. d-β-生育酚 250mg x1瓶

3. d-γ-生育酚 250mg x1瓶

4. d-δ-生育酚 250mg x1瓶

5. 3,4-二氢-2,2,5,7,8-五甲基-2H-1-苯并吡喃-6-酚(PMC) 250mg x1瓶

注意: PMC 是用作HPLC分析维生素E的内标物质,不适用于GC分析。

.

分子式,分子量及产品纯度

物质名称

分子式

分子量

最大吸收波长

吸收系数

E1% 1cm

纯度

外观

d-α-生育酚

C29H50O2

430.71

292 nm

78.1

98.5+%

淡黄色、粘稠液体

d-β-生育酚

C28H48O2

416.69

296 nm

89.2

98.5+%

d-γ-生育酚

C28H48O2

416.69

297 nm

94.4

98.5+%

d-δ-生育酚

C27H46O2

402.66

297 nm

92.9

98.5+%

PMC

C14H20O2

220.31

292 nm

99.0+%

白色晶体

保存和稳定条件

每小瓶试剂都是用附有氧吸附剂的铝盖包装的。一旦打开了瓶子,请将此试剂于惰性气体环境中的冰箱中(2~10℃)保存。在此条件下,试剂可保持6个月的稳定性。

使用指南(溶液的制备)

1. 用天平称取每种试剂各50~100mg,质量确定到0.1mg。

2. 将这些试剂分别溶解在乙醇或己烷溶剂中,直至各维生素同系物的浓度为1mg/mL。再将这些溶液密封保存于5℃,可保存一个月。

3. 在使用前将原液稀释,即可得到每个同系物的标准溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名: Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产  地: 日本
商  家: Wako(和光纯药工业株式会社)
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM(Phosphate-binding tag)是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下,该空间恰好能容纳一个磷酸基团,使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团,广泛运用于细菌,酵母,昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点,研发了Phos-tagTM 系列产品,运用于常见的蛋白实验,比如SDS-PAGE,免疫印迹,亲和层析,质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺(Acrylamide,SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子(Zn2+或者Mn2+)和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中,磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合,导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE(单一蛋白)
免疫印迹(多种蛋白混合液,例如细胞裂解液,组织均浆液,体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗)
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素(Biotin)结合 可与亲和素标记的HRP结合,检测磷酸化蛋白。 免疫印迹(正常SDS-PAGE)
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖(Agarose)结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合,纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注:除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外,其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法!
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离(Phos-tag™ Acrylamide)、Western Blot检测(Phos-tag™ Biotin)、蛋白纯化 (Phos-tag™ Agarose)及质谱分析MALDI-TOF/MS (Phos-tag™ Mass Analytical Kit)。
◆Phos-tag™ 的基本结构
特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性,可用于人、植物(拟南芥 水稻 棉花等)、动物(斑马鱼 灵长类等)、微生物(酵母 细菌 真菌等) 昆虫(果蝇 蚕等)
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa,文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液,固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶,50μM约8块;10mg包装20μM可制100块胶,50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
相关产品

产品名称 用  途
 Phos-tag™ Acrylamide  分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
 SuperSep Phos-tag™  分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
 Phos-tag™ Biotin  检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
 Phos-tag™ Agarose  纯化: 通用柱层析,纯化磷酸化蛋白
 Phos-tag™ Mass
Analytical Kit
 分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析,提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide(丙烯酰胺)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ (丙烯酰胺预制胶)

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶
5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶
5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶
5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶
5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶
5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶
5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶
5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶
5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块

Phos-tag™ Biotin(生物素)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose(琼脂糖)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit(质谱分析试剂盒)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用!
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶,预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存(6个月)
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件:30 mA(恒电流), 60分钟
样品:5 ug/Lane α-酪蛋白(含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白)(产品编号038-23221)
普通SDS-PAGE只观察到一条条带,而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液:Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液:SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色:QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well (不含Phos-tag™)
◆相关产品

产品编号 产品名称 规  格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应,激酶和底物都带有标签,反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物,如何检测底物的磷酸化情况?
如果底物和激酶分子量差别大,通过正常的SDS-PAGE能够区分,建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验,用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团(需记录底物的条带位置)。可通过剥离(strip)方式剥离Phos-tagTM Biotin,用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大,可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜,用底物的非磷酸化抗体检测(没有使用激酶的抗体,所以检测不到激酶的带)。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离,用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后,观察所有的条带,非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合,所以迁移速度较快,磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化,分析磷酸化底物的含量。
备注:
1) Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中,建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated(038-
       23221),该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein,确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2)如果没有非磷酸化底物,可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)(018-10693)对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF(表皮生长因子)刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平?
收集EGF刺激的细胞,制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测(检测所有的MAPK,包括磷酸化和非磷酸化)。正常SDS-PAGE实验中,磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离,而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离,所以转膜后,用MAPK抗体检测,可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验,多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注:该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化,细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK,则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中,构建带有不同标签的2种融合蛋白,共转染细胞,在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白,是否可用Phos-tagTM Agarose纯化,进行后续免疫共沉淀实验(Co-IP)实验?
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白,采用高盐的洗脱方式,没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱,蛋白不发生变性,可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白,分子量很接近,如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化?
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近,通过正常的SDS-PAGE实验无法区分,建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后,先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测,剥离(strip)后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的 话,剥离(strip)会去除一些蛋白,可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit,样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响?
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高,样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名: Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产  地: 日本
商  家: Wako(和光纯药工业株式会社)
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM(Phosphate-binding tag)是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下,该空间恰好能容纳一个磷酸基团,使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团,广泛运用于细菌,酵母,昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点,研发了Phos-tagTM 系列产品,运用于常见的蛋白实验,比如SDS-PAGE,免疫印迹,亲和层析,质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺(Acrylamide,SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子(Zn2+或者Mn2+)和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中,磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合,导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE(单一蛋白)
免疫印迹(多种蛋白混合液,例如细胞裂解液,组织均浆液,体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗)
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素(Biotin)结合 可与亲和素标记的HRP结合,检测磷酸化蛋白。 免疫印迹(正常SDS-PAGE)
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖(Agarose)结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合,纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注:除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外,其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法!
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离(Phos-tag™ Acrylamide)、Western Blot检测(Phos-tag™ Biotin)、蛋白纯化 (Phos-tag™ Agarose)及质谱分析MALDI-TOF/MS (Phos-tag™ Mass Analytical Kit)。
◆Phos-tag™ 的基本结构
特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性,可用于人、植物(拟南芥 水稻 棉花等)、动物(斑马鱼 灵长类等)、微生物(酵母 细菌 真菌等) 昆虫(果蝇 蚕等)
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa,文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液,固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶,50μM约8块;10mg包装20μM可制100块胶,50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
相关产品

产品名称 用  途
 Phos-tag™ Acrylamide  分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
 SuperSep Phos-tag™  分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
 Phos-tag™ Biotin  检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
 Phos-tag™ Agarose  纯化: 通用柱层析,纯化磷酸化蛋白
 Phos-tag™ Mass
Analytical Kit
 分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析,提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide(丙烯酰胺)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ (丙烯酰胺预制胶)

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶
5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶
5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶
5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶
5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶
5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶
5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶
5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶
5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块

Phos-tag™ Biotin(生物素)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose(琼脂糖)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit(质谱分析试剂盒)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用!
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶,预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存(6个月)
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件:30 mA(恒电流), 60分钟
样品:5 ug/Lane α-酪蛋白(含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白)(产品编号038-23221)
普通SDS-PAGE只观察到一条条带,而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液:Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液:SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色:QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well (不含Phos-tag™)
◆相关产品

产品编号 产品名称 规  格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应,激酶和底物都带有标签,反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物,如何检测底物的磷酸化情况?
如果底物和激酶分子量差别大,通过正常的SDS-PAGE能够区分,建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验,用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团(需记录底物的条带位置)。可通过剥离(strip)方式剥离Phos-tagTM Biotin,用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大,可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜,用底物的非磷酸化抗体检测(没有使用激酶的抗体,所以检测不到激酶的带)。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离,用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后,观察所有的条带,非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合,所以迁移速度较快,磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化,分析磷酸化底物的含量。
备注:
1) Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中,建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated(038-
       23221),该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein,确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2)如果没有非磷酸化底物,可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)(018-10693)对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF(表皮生长因子)刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平?
收集EGF刺激的细胞,制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测(检测所有的MAPK,包括磷酸化和非磷酸化)。正常SDS-PAGE实验中,磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离,而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离,所以转膜后,用MAPK抗体检测,可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验,多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注:该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化,细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK,则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中,构建带有不同标签的2种融合蛋白,共转染细胞,在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白,是否可用Phos-tagTM Agarose纯化,进行后续免疫共沉淀实验(Co-IP)实验?
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白,采用高盐的洗脱方式,没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱,蛋白不发生变性,可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白,分子量很接近,如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化?
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近,通过正常的SDS-PAGE实验无法区分,建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后,先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测,剥离(strip)后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的 话,剥离(strip)会去除一些蛋白,可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit,样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响?
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高,样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名: Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产  地: 日本
商  家: Wako(和光纯药工业株式会社)
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM(Phosphate-binding tag)是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下,该空间恰好能容纳一个磷酸基团,使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团,广泛运用于细菌,酵母,昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点,研发了Phos-tagTM 系列产品,运用于常见的蛋白实验,比如SDS-PAGE,免疫印迹,亲和层析,质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺(Acrylamide,SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子(Zn2+或者Mn2+)和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中,磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合,导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE(单一蛋白)
免疫印迹(多种蛋白混合液,例如细胞裂解液,组织均浆液,体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗)
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素(Biotin)结合 可与亲和素标记的HRP结合,检测磷酸化蛋白。 免疫印迹(正常SDS-PAGE)
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖(Agarose)结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合,纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注:除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外,其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法!
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离(Phos-tag™ Acrylamide)、Western Blot检测(Phos-tag™ Biotin)、蛋白纯化 (Phos-tag™ Agarose)及质谱分析MALDI-TOF/MS (Phos-tag™ Mass Analytical Kit)。
◆Phos-tag™ 的基本结构
特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性,可用于人、植物(拟南芥 水稻 棉花等)、动物(斑马鱼 灵长类等)、微生物(酵母 细菌 真菌等) 昆虫(果蝇 蚕等)
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa,文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液,固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶,50μM约8块;10mg包装20μM可制100块胶,50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
相关产品

产品名称 用  途
 Phos-tag™ Acrylamide  分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
 SuperSep Phos-tag™  分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
 Phos-tag™ Biotin  检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
 Phos-tag™ Agarose  纯化: 通用柱层析,纯化磷酸化蛋白
 Phos-tag™ Mass
Analytical Kit
 分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析,提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide(丙烯酰胺)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ (丙烯酰胺预制胶)

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶
5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶
5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶
5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶
5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶
5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶
5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶
5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶
5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶,BioRad型
5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶,Life Technologies型
5块

Phos-tag™ Biotin(生物素)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose(琼脂糖)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit(质谱分析试剂盒)

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用!
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶,预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide,打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子,在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好,得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存(6个月)
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件:30 mA(恒电流), 60分钟
样品:5 ug/Lane α-酪蛋白(含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白)(产品编号038-23221)
普通SDS-PAGE只观察到一条条带,而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液:Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液:SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色:QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well (不含Phos-tag™)
◆相关产品

产品编号 产品名称 规  格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应,激酶和底物都带有标签,反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物,如何检测底物的磷酸化情况?
如果底物和激酶分子量差别大,通过正常的SDS-PAGE能够区分,建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验,用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团(需记录底物的条带位置)。可通过剥离(strip)方式剥离Phos-tagTM Biotin,用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大,可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜,用底物的非磷酸化抗体检测(没有使用激酶的抗体,所以检测不到激酶的带)。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离,用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后,观察所有的条带,非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合,所以迁移速度较快,磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化,分析磷酸化底物的含量。
备注:
1) Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中,建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated(038-
       23221),该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein,确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2)如果没有非磷酸化底物,可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)(018-10693)对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF(表皮生长因子)刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平?
收集EGF刺激的细胞,制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测(检测所有的MAPK,包括磷酸化和非磷酸化)。正常SDS-PAGE实验中,磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离,而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离,所以转膜后,用MAPK抗体检测,可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验,多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注:该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化,细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK,则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中,构建带有不同标签的2种融合蛋白,共转染细胞,在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白,是否可用Phos-tagTM Agarose纯化,进行后续免疫共沉淀实验(Co-IP)实验?
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白,采用高盐的洗脱方式,没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱,蛋白不发生变性,可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白,分子量很接近,如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化?
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近,通过正常的SDS-PAGE实验无法区分,建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后,先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测,剥离(strip)后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的 话,剥离(strip)会去除一些蛋白,可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit,样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响?
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高,样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

wako阿尔茨海默病研究先关试剂

wako阿尔茨海默病研究先关试剂

阿尔茨海默病研究(老年痴呆)

货号 名称 规格
8951516 β-Amyloid (1-40), Ultra Pure,TFA β淀粉样蛋白(1 – 40),超纯,TFA 2.5mg
294-64701 Human/Rat?Beta Amyloid(40) ELISA?Kit Wako?II 人/大鼠β淀粉体(40)ELISA试剂盒 96T
8951516 β-Amyloid (1-40), Ultra Pure,TFA β淀粉样蛋白(1 – 40),超纯,TFA 0.5mg
298-64601 Human?Beta Amyloid(1-40) ELISA?Kit Wako?II 人β淀粉体(1-40)ELISA试剂盒 96T
8953770 β-Amyloid (1-40), rat β淀粉样蛋白(1 – 40),大鼠 2.5mg
8953770 β-Amyloid (1-40), rat β淀粉样蛋白(1 – 40),大鼠 0.5mg
8953771 β-Amyloid Peptide (1-42), rat β淀粉样多肽(1 – 42),大鼠 2.5mg
292-64501 Human/Rat Beta Amyloid(42) ELISA?Kit Wako, High Sensitive 人、大鼠β淀粉体(42)ELISA试剂盒,高灵敏度 96T
296-64401 Human Beta Amyloid(1-42) ELISA Kit Wako, High Sensitive 人β淀粉体(1-42)ELISA试剂盒,高灵敏度 96T
8953771 β-Amyloid Peptide (1-42), rat β淀粉样多肽(1 – 42),大鼠 0.5mg
8952487 β-Amyloid (1-42), human β淀粉样蛋白(1 – 42),人 2.5mg
151-01801 Osthole Standard 蛇床子素 20mg
8952487 β-Amyloid (1-42), human β淀粉样蛋白(1 – 42),人 0.5mg
074-04961 Gomisin N Standard 五味子酯N标准品 10mg
077-04951 Gomisin A Standard 五味子醇甲标准品 10mg
192-10441 Schizandrin Standard 五味子素标准品 20mg
197-13551 Schizandrin  五味子素 20mg
334-00491 Amyloidβ-Protein (Human,37-43) antiserum 50ul
33-00221 Amyloidβ-Protein (Human,37-42) antiserum 50ul
336-00211 Amyloidβ-Protein (Human,34-40) antiserum 50ul
330-00111 Amyloidβ-Protein (Human,1-40) antiserum 50ul
330-00231 Amyloidβ-Protein (Human,1-16) antiserum 50ul
339-32171 Nma-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Lys(Dnp)-D-Arg-D-Arg-D-Arg-NH2 1mg
333-32191 (3,5-Difluorophenylacetyl)-Ala-Phg-OBut 5mg
333-43941 L-685,458 1mg
556-65811 β-secretase activity kit 100T
334-32121 MOCAC-SER-GLU-VAL-ASN-LEU-ASP-ALA-GLU-PHE-ARG-LYS(DNP)-ARG-A 1mg
339-43781 LYS-THR-GLU-GLU-ILE-SER-GLU-VAL-ASN-STA-VAL-ALA-GLU-PHE 1mg
337-44201 Amyloidβ-Protein(42-1) 0.1mg
332-44131 Amyloidβ-Protein(40-1) 0.1mg
337-43581 β-Sheet breaker peptide iAβ5 5mg
336-43671 Amyloidβ-Protein (Human,3-42) 0.5mg
334-43091 Amyloidβ-Protein (Human,25-35) 0.5mg
334-43591 Amyloidβ-Protein (Human,1-16) 0.5mg
333-43701 Amyloidβ-Protein (Human,1-43) 0.5mg
338-43491 Amyloidβ-Protein (Human,1-42) 0.5mg
336-43791 Amyloidβ-Protein (Human,1-40) [HCl Form] 0.5mg
330-43071 Amyloidβ-Protein (Human,1-40) 0.5mg
011-18961 Amyloid beta-Protein (1-42) (Hydrochloride) β淀粉样蛋白(1 – 40),冻干粉 1mg
016-18771 Amyloid beta-Protein (1 – 42) β淀粉样蛋白(1 – 42) 0.5mg
014-18951 Amyloid beta-Protein (1-40) (Hydrochloride) β淀粉样蛋白(1 – 40),冻干粉 1mg
019-18761 Amyloid beta-Protein (1 – 40) β淀粉样蛋白(1 – 40) 1mg
014-20281 Anti Phosphorylated alpha-Synuclein,Monoclonal Antibody 抗磷酸化α突触核蛋白单抗 50ul
299-57301 Phosphorylated Tau Immunohistostain Kit 磷酸化τ免疫组织染色试剂盒 100T
299-56701 Amyloid beta-Protein Immunohistostain Kit β淀粉样蛋白免疫组织染色试剂盒 50T

WAKO定量分析的甜叶菊标准品

WAKO定量分析的甜叶菊标准品

和光(WAKO)定量分析的甜叶菊标准品类STEVIA STANDARDS

环境

定量分析的甜叶菊标准品类
STEVIA STANDARDS

        甜叶菊是南美原产的菊科植物。甜叶菊含有甜菊苷、甜菊双糖甙等甜菊醇糖甙类。甜叶菊提取物被收录于第八版食品添加物法定文件,作为低卡路里天然甜调味品被广泛使用。同时,在第68次JECFA(WHO/FAO食品添加物专家委员会)中,正式决定甜叶菊提取物的规格,也决定了美国FDA的甜菊双糖甙规格。本公司产品是质量分析用高纯度标准品。还可用于更高精度的定量用。

产品编号

品名

包装

098-05681

Isosteviol Standard

1g

183-02361

Rebaudioside A Standard

1g

187-02401

Rebaudioside B Standard

100mg

193-15351

Stevioside Standard

1g

194-15401

Steviol Standard

100mg

193-15471

Steviolbioside Standard

100mg

* 本品只可用于实验、研究目的,不得用于家庭、医疗等其它用途。

wako水分析用标准品

wako水分析用标准品

货号

名称

规格

081-08171

Heptaethylene Glycol Monododecyl Ether Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 十二烷基七聚乙二醇醚

1mLx5A

086-07261

Halogenated Acetic Acid Mixture Standard Solution (each 1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 卤化醋酸标准溶液

2mLx10A

072-03421

Geosmin Standard Solution (0.1mg/ml Methanol Solution) 土臭素标准溶液

1ml

077-01911

Geosmin Standard 土臭素标准品

20mg

063-04511

Formaldehyde Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 甲醛标准溶液

1mLx5A

069-04471

FLUOROBENZENE STANDARD SOLUTION (1MG/ML METHANOL SOLUTION) 氟苯标准溶液

1mLx5A

042-29021

1,4-Dioxane-d8 Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,4-二氧六环-d8标准溶液

1mLx5A

049-28791

1,4-Dioxane Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 1,4-二氧六环标准溶液

2mLx10A

041-23991

Dichloromethane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

044-23981

Dichloromethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

046-25641

p-Dichlorobenzene Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 对二氯苯标准溶液

2mLx5A

048-24481

Dichloroacetonitrile Standard Solution (1mg/ml Acetonitrile Solution) 氰化二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

041-24471

Dichloroacetic Acid Standard Solution (1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 二氯乙酸标准溶液

2mLx10A

046-18791

1,1-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,1-二氯乙烯标准溶液

10ml

047-22011

1,1-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 1,1-二氯乙烯标准溶液

2mLx10A

048-24361

1,2-Dichloropropane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,2-二氯丙烷标准溶液

2mLx10A

043-18941

1,2-Dichloroethane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,2-二氯乙烷标准溶液

10ml

040-22001

1,2-Dichloroethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 1,2-二氯乙烷标准溶液

2mLx10A

043-22591

trans-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 反-1,2-二氯乙烯标准溶液

2mLx10A

047-18961

trans-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 反-1,2-二氯乙烯标准溶液

10ml

043-18963

trans-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 反-1,2-二氯乙烯标准溶液

2mLx10A

049-25631

cis-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 顺-1,2-二氯乙烯标准溶液

2mLx5A

043-24551

Dibromochloromethane Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 二溴氯甲烷标准溶液

2mLx10

039-13861

Dibromochloromethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 二溴氯甲烷标准溶液

2mLx10

037-18781

p-Cresol Standard

1g

033-18761

o-Cresol Standard

1g

030-18771

m-Cresol Standard

1g

032-13851

Chloropicrin Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 氯化苦标准溶液

2mLx10A

039-15681

Chloroform Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 氯仿标准溶液

2mLx10A

036-13871

Chloroform Standard Solution(1mg/ml Hexane Solution) 氯仿标准溶液

2mLx10A

034-19031

1-Chlorodecane Standard Solution (1mg/ml Hexane Soluiton) 1-氯癸烷标准溶液

1mLx5A

038-16871

Chloroacetic Acid Standard Solution(1ml/mg t-Butyl Methyl Ether Solution) 氯乙酸标准溶液

2mLx10A

030-19251

5 Chlorinated Phenols Mixture Standard Solution (each 1mg/ml in Acetone Solution) 5钟氯化酚混合物标准溶液

1mLx5A

035-19321

3 Chlorinated Acetic Acids Mixutre Standard Solution (each 1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 3种氯化醋酸混合物标准溶液

1mLx5A

030-19631

3 Chlorinated Acetic Acid Methyl Esters Mixture Standard Solution (each 1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 3种氯化醋酸甲酯混合物标准溶液

2mLx5A

036-15711

Chloral Hydrate Standard Solution (1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 水合氯醛标准溶液

2mLx10A

023-15301

t-Butyl Methyl Ether Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 甲基异丁基醚标准溶液

2mLx5A

020-12251

Bromoform Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 三溴甲烷标准溶液

2mLx10A

025-10241

Bromoform Standard Solution(1mg/ml Hexane Solution) 三溴甲烷标准溶液

2mLx10A

029-15021

p-Bromofluorobenzene-Fluorobenzene Mixture Standard Solution (each 1mg/ml Methanol Solution) 对溴氟苯-氟苯混合物标准溶液

1mLx5A

021-12041

p-Bromofluorobenzene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 对溴氟苯

2mLx10A

027-12261

Bromodichloromethane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 溴二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

022-10251

Bromodichloromethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 溴二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

024-13251

Bromoacetic Acid Standard Solution 溴乙酸标准溶液

2mLx10A

024-12031

Benzene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 苯标准溶液

2mLx10A

013-20131

Anionic Surfactants Mixture Standard Solution (each 1mg/ml Methanol Solution) 阴离子表面活性剂混合物标准溶液

1mLx5A

011-17241

Ammonium Nitrogen Standard Solution (NH4+ 1,000) 氨氮标准溶液

50ml

013-19881

Acenaphthene-d10 Standard Solution (1mg/ml in Acetone Solution) 苊-d10标准溶液

1mLx5A

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag,用于磷酸化蛋白的WB检测
Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™,可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。
特点:

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例:

应用实例:使用Phos-tagBTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白:Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白:α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白: (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]Protocol(点击进入)

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]Protocol(点击进入)
产品描述
1、粉末;
2、在4度可保存至少一年;
3、检测磷酸化蛋白;
4、Phos-tagTM与生物素(Biotin)结合可与亲和素标记的HRP结合,检测磷酸化蛋白。
可用于免疫印迹实验,二维电泳。
产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链(Linher)长度不一,但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高,推荐使用溶解性比较高的BTL-104。
wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答

低聚果糖标准品套装

低聚果糖标准品套装
品牌:日本wako
规格:1套
单价:¥2693.0
货期:现货
客户群:食品、糖类、果汁饮品生产厂家和第三方检测机构。
低聚果糖是指2~5个果糖基为链节,以一个葡萄糖基为链的端基,以果糖基→果糖连接键为主体骨架连结形成的碳水化合物。即是指1~4个果糖基以β-2,1键连接在蔗糖的D-果糖基上而形成的蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)和蔗果六糖(GF5)的混合物。
低聚果糖是一种天然活性物质。甜度为蔗糖的0.3-0.6倍。既保持了蔗糖的纯正甜味性质,又比蔗糖甜味清爽。是具有调节肠道菌群,增殖双歧杆菌,促进钙的吸收,调节血脂,免疫调节,抗龋齿等保健功能的新型甜味剂,被誉为继抗生素时代后最具潜力的新一代添加剂——促生物质;在法国被称为原生素(PPE),已在乳制品、乳酸菌饮料、固体饮料、糖果、饼干、面包、果冻、泠饮等多种食品中应用。目前低聚果糖产品在日本、韩国、欧美国家及台湾地区已得到广泛应用,中国也与2009年推出了低聚果糖的国家标准
产品信息:
295-73401 Fructooligosaccharides Set   1套 2693.0  货期:现货
套装所包含的产品:
蔗果三糖(1-Kestose) 99.0+% (HPLC) 1 vial x 250mg
蔗果四糖(Nystose) 99.0+% (HPLC) 1 vial x 250mg
蔗果五糖(1F-Fructofuranosyl nystose) 80.0+ % (HPLC) 1 vial x 250 mg
用于饮料和食品中包含的低聚果糖成分分析
级别;HPLC用
保存:室温

wako低聚果糖标准品套装 蔗果三糖、四糖、五糖

 wako低聚果糖标准品套装 蔗果三糖、四糖、五糖

      许多植物储存碳水化合物以菊糖形式或者淀粉形式。菊糖是以β(2-1)键连接果糖形成典型的末端葡萄糖结构。天然的菊糖包含一系列结构,聚合度从3到60。低聚果糖由菊糖水解得到,具有小店聚合度。低聚果糖通过GFn(Glucose and Fructose数目)

低聚果糖是一种益生元,有益于人体健康。低聚果糖是一种天然活性物质。甜度为蔗糖的0.3-0.5倍。

       果聚糖广泛应用于农产品工业,菊糖和低聚果糖用于脂肪和糖,减少食品热量,比如冰淇淋、乳制品、糖果和烘焙食品。

低聚果糖标准品套装
低聚果糖是指2~5个果糖基为链节,以一个葡萄糖基为链的端基,以果糖基→果糖连接键为 主体骨架连结形成的碳水化合物。即是指1~4个果糖基以β-2,1键连接在蔗糖的D-果糖基上而形成的蔗果三糖(GF2)、蔗果四糖(GF3)、蔗果五糖(GF4)和蔗果六糖(GF5)的混合物。
低聚果糖是一种天然活性物质。甜度为蔗糖的0.3-0.6倍。既保持了蔗糖的纯正甜味性质,又比蔗糖甜味清爽。是具有调节肠道菌群,增殖双歧杆菌,促进钙的吸收,调节血脂,免疫调节,抗龋齿等保健功能的新型甜味剂,被誉为继抗生素时代后最具潜力的新一代添加剂——促生物质;在法国被称为原生素(PPE),已在乳制品、乳酸菌饮料、固体饮料、糖果、饼干、面包、果冻、泠饮等多种食品中应用。目前低聚果糖产品在日本、韩国、欧美国家及台湾地区已得到广泛应用,中国也与2009年推出了低聚果糖的国家标准

低聚果糖套装
货号:295-73401
中文名称:蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖
英文名称:低聚果糖套装
规格:3*250mg

货号  品名  描述  检测项目  包装规格
295-73401    低聚果糖套装          Fructooligosaccharides Set  蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖  3*250mg

wako疫苗生产用相关试剂

Wako疫苗生产用相关试剂

上海金畔生物代理wako全线产品,欢迎咨询。

疫苗生产用相关试剂-日本和光Wako原装进口
1、原料

产品编号 英文名称 中文名称 包装 CAS 用途
346-01373 HEPES 4-羟乙基哌嗪乙磺酸 100g 7365-45-9 生物缓冲液
035-23611 CultureSure L-Glutamine, Animal-derived-free L-谷氨酰胺,不存在动物源成分 100g 56-85-9 用于细胞培养
033-23391 CultureSure® 10w/v% Polyoxyethylene Polyoxypropylene Glycol Solution F68丙二醇嵌段聚醚 100ml 9003-11-6 用于细胞培养,消泡剂
160-25231 Polyoxyethylene Polyoxypropylene Glycol (160E.O.) (30P.O.) F68丙二醇嵌段聚醚 100g 9003-11-6 生化级别,消泡剂
072-04945 Glycerol 甘油 500mL 56-81-5 用于分子生物学,DNase活性、RNase活性检出限以下
072-05285 Glycine 甘氨酸 500g 56-40-6 用于分子生物学,DNase活性、RNase活性检出限以下
077-05095 Glycine 甘氨酸 500g 56-40-6 日本药典级,98.5+% (乾燥後)
036-23881 CultureSure® Glycine, Animal-derived-free 甘氨酸 100g 56-40-6 用于细胞培养
122-06311 L-Leucine, Animal-derived-free L-亮氨酸,不存在动物源成分 100g 61-90-5 生化级别,不含L-异亮氨酸
031-23711 L-Leucine, Animal-derived-free L-亮氨酸,不存在动物源成分 100g 61-90-5 用于细胞培养,通过支原体试验
037-23791 CultureSure L-Lysine Hydrochloride, Animal-derived-free L-赖氨酸盐酸盐 100g 657-27-2 用于细胞培养,通过支原体试验
036-23761 CultureSure L-Methionine, Animal-derived-free L-蛋氨酸 100g 63-68-3 用于细胞培养,通过支原体试验
2、纯化
202-07881 2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol Tris (三羟甲基氨基甲烷) 100g 77-86-1 生化级别,99.0+% (Titration)
215-00616 Urea 尿素 1kg 57-13-6 用于生物化学
017-06731 Ammonium Sulfate 硫酸铵 1kg 7783-20-2 酶精制,一般生化研究用
038-02101 Hexadecyltrimethylammonium Bromide CTAB十六烷基三甲基溴化铵 100g 57-09-0 表面活性剂,98.0+% (Titration)
190-13921 Sodium Chloride 氯化钠 1kg 7647-14-5 用于分子生物学,DNase活性、RNase活性检出限以下
054-07225 Ethanol(99.5) 乙醇 500mL 64-17-5 用于分子生物学,DNase活性、RNase活性检出限以下
3、偶联剂
011-06795 Adipodihydrazide 己二酰肼 500g 1071-93-8 97.0+% (Titration)
338-10301 WSCD.HCl 1-(3-二甲基氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐 5g 25952-53-8
4、裂解剂
196-15721 Sulfobetain 3-14 ZWITTERGENT 3-14(十四烷基磺基甜菜碱 ) 5g 14933-09-6 用于细胞生物学
166-21213 Polyoxyethylene(20) Sorbitan Monolaurate 吐温-20 100g 9005-64-5 用于分子生物学,DNase活性、RNase活性检出限以下
166-21595 Polysorbate, from Plants 吐温-80 500g 9005-65-6 生化用分散剂乳化剂
169-09125 Polyethylene Glycol 6,000 聚乙二醇6000(PEG6000) 500g 25322-68-3 润滑剂
5、灭活剂
194-08311 Sodium Deoxycholate 脱氧胆酸钠 100g 302-95-4 生化级别,配制培养基
077-06271 25% Glutaraldehyde Solution 戊二醛 25% 10ml×10A 111-30-8 组织固定液,用于电子显微镜
166-21012 β-Propiolactone β-丙内酯 25mL 57-57-8 灭活剂
063-04815 Formaldehyde Solution 37%甲醛溶液(福尔马林) 500mL 50-00-0 分子生物学用,DNase活性、RNase活性在检出限以下
6、防腐剂
160-12725 Phenol, Crystals 苯酚 药典级 500g 108-95-2 用于DNA, RNA抽提精制
030-20925 m-Cresol 间甲酚 500mL 108-39-4 用于生化
7、冻干
077-03155 Gelatin 明胶 500g 9000-70-8 培养基
128-00095 Lactose Monohydrate 乳糖 500g 5989-81-1 医药品原料
196-13705 Sucrose 蔗糖 500g 57-50-1 日本药典级,医药制剂原料
8、佐剂
012-24241 Aluminium Hydroxide Gel 氢氧化铝凝胶 5ml 21645-51-2 吸附剂,用于免疫化学
016-01865 Aluminium(III) Chloride Hexahydrate 结晶氯化铝 500g 7784-13-6
9、QC检测试剂
297-73101 Protein Assay BCA Kit BCA 蛋白分析试剂盒 250次 N/A 用于蛋白质定量
016-14131 L-Asparagine Standard Solution L-天冬素标准溶液 1mL×5 70-47-3 氨基酸自动分析标准溶液,含有L-Asparagine (N) (1.25μmol/ml)的水溶液
10、其它
207-19982 Trypsin 1:250, from Porcine Pancreas 胰酶 1:250 25g 9002-07-7 用于细胞培养
016-15091 Albumin, from Bovine Serum (BSA), Crystallized 牛血清白蛋白 1g 9048-46-8 生化级别
045-16463 β-Diphosphopyridine Nucleotide, from Yeast 辅酶I(NAD) 1g 53-84-9 生化级别
166-11801 Polyoxyethylene(10) Octylphenyl Ether 曲拉通X-100 3L 9002-93-1 乳化剂
127-02765 D(-)-Fructose D-果糖 500g 57-48-7 99.0+% (HPLC)
044-29765 D-MEM (High Glucose) with L-Glutamine and Phenol Red D-MEM (高糖),带有L-谷氨酰胺和酚红 500mL N/A 液体培养基,用于细胞培养,品质检验指标:外观、pH、渗透压、细胞内毒素试验、支原体检测、无菌检测、细胞培养试验
043-30085 D-MEM(High Glucose) with L-Glutamine, Phenol Red and Sodium Pyruvate D-MEM (高糖),带有L-谷氨酰胺、酚红和丙酮酸 500mL N/A
049-32645 D-MEM(High Glucose) with L-Glutamine, Phenol Red, Sodium Pyruvate and 1,500mg/l Sodium Bicarbonate D-MEM (高糖),带有L-谷氨酰胺、酚红、丙酮酸和1,500mg/l碳酸氢钠 500mL N/A
042-32255 D-MEM(No Glucose) with L-Glutamine and Phenol Red D-MEM (无糖),带有L-谷氨酰胺和酚红 500mL N/A
051-07615 E-MEM with L-Glutamine and Phenol Red E-MEM ,带有L-谷氨酰胺和酚红 500mL N/A
134-17225 MEMα with L-Glutamine, Sodium Pyruvate and Nucleosides MEMα  ,带有L-谷氨酰胺、丙酮酸钠和核苷 500mL N/A
392-02115 HIPOLYPEPTON 酪蛋白胨 500g N/A 多聚蛋白胨,以产自新西兰的酪蛋白为原料
394-02175 HIPOLYPEPTON S 大豆蛋白胨S 500g N/A 以脱脂大豆为原料,用动植物酶分解
397-02121 HIPOLYPEPTON N 大豆蛋白胨N 300g N/A 以大豆萃取物为原料,用微生物酶分解
393-02101 HIPOLYPEPTON NS 大豆蛋白胨NS 300g N/A 以脱脂大豆为原料,用微生物酶分解
394-02131 DRIED YEAST EXTRACT SH 酵母浸出粉 SH 250g N/A 发酵工业
398-02151 DRIED YEAST EXTRACT D-3H 酵母浸出粉 D-3H 250g N/A 发酵工业
393-02167 DRIED YEAST EXTRACT FH 酵母浸出粉 FH 10kg N/A 发酵工业
047-30522 Dextran 60,000 葡聚糖,右旋糖酐 25g 9004-54-0 增粘剂
049-22331 Dextran 40,000 葡聚糖,右旋糖酐 50g 9004-54-0 增粘剂
046-32591 Dextran 150,000 葡聚糖,右旋糖酐 50g 9004-54-0 增粘剂
041-22612 Dextran 200,000 葡聚糖,右旋糖酐 25g 9004-54-0 增粘剂、白血球分离用
038-22361 Collagenase 胶原酶 100mg 9001-12-1 来源于溶组织梭菌,用于肝脏、副甲状腺、胰脏兰式小岛的细胞分散
038-17851 Collagenase Type V 胶原酶,V型 100mg 9001-12-1 来源于溶组织梭菌,用于胰脏的分散
031-17601 Collagenase Type I 胶原酶, I 型 100mg 9001-12-1 肝脏、肺、上皮组织、脂肪组织的细胞分散
035-17861 Collagenase Type X 胶原酶, X 型 100mg 9001-12-1 骨、心脏、胸腺、唾液腺的细胞分散
031-22591 Collagenase Type I, Filtered 胶原酶, I 型,过滤 50mg 9001-12-1 Collagenase Type I 经过过滤处理的产品,溶解后直接用于细胞分散
038-23961 Collagenase Type X, Filtered 胶原酶, X 型,过滤 50mg 9001-12-1 Collagenase Type X经过过滤处理的产品,溶解后直接用于细胞分散
036-23141 Collagenase, recombinant, Animal-derived-free 胶原酶,重组,不存在动物源成分 240000units N/A 6,000units/mg以上
035-24071 Collagenase, Purified 胶原酶,精制 5000units 9001-12-1 胰脏、耳下腺腺房的分散以外,也能用于胶原蛋白的结构解析
164-14004 Proteinase K, from Tritirachium album Limber 蛋白酶k 25mg 39450-01-6 裂解细胞

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag,用于磷酸化蛋白的WB检测
Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™,可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。
特点:

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例:

应用实例:使用Phos-tagBTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白:Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白:α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白: (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]Protocol(点击进入)

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]Protocol(点击进入)
产品描述
1、粉末;
2、在4度可保存至少一年;
3、检测磷酸化蛋白;
4、Phos-tagTM与生物素(Biotin)结合可与亲和素标记的HRP结合,检测磷酸化蛋白。
可用于免疫印迹实验,二维电泳。
产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链(Linher)长度不一,但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高,推荐使用溶解性比较高的BTL-104。
wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答