Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 价格 2823
产品规格

200 Tests

产品货号

Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

产品参数
Ex (nm) 500 Em (nm) 522
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒,Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒是通过测量Caspase 8的活性而用于细胞凋亡检测的。Caspase 8 是一种Caspase蛋白,CASP8基因所编码。在神经元变性疾病中,例如亨廷顿综合症,caspase 8扮演着重要角色。Caspase 8已被证明具有底物选择性,其肽基序为Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。该试剂盒使用(Ac-IETD)2-R110作为荧光指示器来检测caspas-8的活性。通过caspas-8的切割R110肽产生强绿色荧光,其发射光在520 nm和530 nm之间,激发光为480 nm和500 nm之间。这种特性使得试剂盒能适合于FITC滤光器。本试剂盒提供所有必需组分和操作流程。该实验结果稳定,快速且适应高通量筛选。它不仅能够定量凋亡细胞中caspas-8的活性还能筛选caspas-8的抑制剂。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒。 

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适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 490 nm
Em: 525 nm
Cutoff: 515 nm
推荐孔板: 黑色透明底板
读取模式: 顶/底读模式
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)制备细胞
2.加入等体积的Caspase 8工作溶液(100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板)
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光增加(截止= 515 nm)

 

工作溶液配制

将50μLCaspase8底物(组分A)加入10mL测定缓冲液(组分B)中并充分混合以制备Caspase 8工作溶液。 避光。 注意:Caspasae 8工作液不稳定,请及时使用。有关细胞样品制备的指南,请点击查看

 

操作步骤

1.通过将10μL/孔的10X测试化合物(96孔板)或5μL/孔的5X测试化合物(384孔板)加入PBS或所需缓冲液中来处理细胞。对于空白孔(没有细胞的培养基),加入相同量的化合物缓冲液。

2.将细胞板在5%CO 2,37℃培养箱中孵育所需的一段时间(对于用喜树碱或星形孢菌素处理的Jurkat细胞,4-6小时)以诱导细胞凋亡。

3.加入100μL/孔(96孔板)或25μL/孔(384孔板)的Caspase 8工作溶液。

4.将板在室温下孵育30分钟至1小时,避光。注意:如果需要,在室温下加入Caspase 8工作溶液10分钟前,向选定的样品中加入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制剂,以确认对caspase 8样活性的抑制作用。

5.以800rpm离心细胞板(特别是对于非贴壁细胞)2分钟(制动关闭)。

6.用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm(截止= 515nm)下监测荧光增加。

 

数据分析

Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光

图1.使用Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒检测Jurkat细胞中的caspase 8活性。 在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的以200,000个细胞/90μL/孔接种Jurkat细胞。 用或不用20μM喜树碱处理细胞4小时。 加入半胱天冬酶8工作溶液(100μL/孔)并在室温下温育1小时。 使用FlexStation 酶标仪(Molecular Devices)在Ex / Em = 490 / 525nm(截止值= 515nm)下测量荧光强度。

 

参考文献

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