Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于细胞凋亡的试剂盒，我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。有多种参数可用于检测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸（PS）的转运来监测细胞凋亡。在凋亡中，PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标，可以在观察到形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS，使用带有Pacific Blue滤波片的流式细胞仪，对该特定的测定试剂盒进行了优化，以监测细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。 

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样品实验方案

简要概述

1.用测试化合物（200μL/样品）制备细胞
2.添加Annexin V-mFluor Violet 450检测溶液
3.在室温下孵育30-60分钟
4.使用具有Ex / Em = 405 / 450nm滤光器组的流式细胞仪或具有Violet滤光器的荧光显微镜分析细胞

操作步骤

使用膜联蛋白V-mFluor Violet 450制备和孵育细胞：

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以细胞凋亡。

2.离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μL膜联蛋白V-mFluor Violet 450（组分A）加入细胞中。

5.可选：将2μL100X碘化丙啶（组分C）加入细胞中，用于坏死细胞。

6.在室温下孵育30至60分钟，避光。

7.在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，添加300μL分析缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有Ex / Em = 405 / 450nm滤光片组的流式细胞仪或具有Violet滤光片的荧光显微镜监测荧光强度。

使用流式细胞仪分析：

1.使用流式细胞仪在Ex / Em = 405 / 450nm处定量膜联蛋白V-mFluor Violet 450结合。 当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。 注意：粘附细胞上的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。

使用荧光显微镜分析：

1.孵育后移取细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。

2.将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。 注意：对于粘附细胞，建议直接在盖玻片上生长细胞。 与V-mFluor Violet 450孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，并将化验缓冲液加回到盖玻片中。 在玻璃载玻片上翻转盖玻片并可视化细胞。 在与V-mFluor Violet 450一起温育后，细胞也可以固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.使用Violet通道在荧光显微镜下用V-mFluor Violet 450分析凋亡细胞。 当碘化丙啶加入细胞时，使用TRITC通道测量细胞活力。 质膜上的蓝色染色表明V-mFluor Violet 450与细胞表面上的PS结合。

数据分析

        在活的非凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。 在凋亡细胞中，膜联蛋白V-mFluor Violet 450与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

参考文献

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