Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发-AAT Bioquest荧光染料

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Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发 价格 2823
产品规格

100 Tests

产品货号

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 405nm激发

产品参数
Ex (nm) 410 Em (nm) 501
分子量 溶剂
存储条件
产品概述

我们的Cell Meter 检测试剂盒是一套用于检测细胞生存力的工具。 有多种参数可用于检测细胞活力。 该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的转运来检测细胞凋亡。 在细胞凋亡中,PS转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的普遍指标,可以在观察形态变化之前进行检测。该试剂盒使用与PS特异性结合的荧光膜联蛋白V。 已经证明膜联蛋白V缀合物选择性结合PS。 使用带有525/40发射滤光片组的405激光器的流式细胞仪,对该特定的测定试剂盒进行了优化,以检测细胞凋亡。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒。

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适用仪器


流式细胞仪  
Ex: 405 nm
Em: 525/40 nm  
通道: AmCyan 通道

 


荧光显微镜

Ex: Violet 滤波片组
Em: Violet 滤波片组
推荐孔板: 黑色透明底板
实验方案

样品实验方案

简要概述

  1. 用测试化合物制备细胞(200 µL /样品)
  2. 添加膜联蛋白V-mFluor Violet 500分析溶液
  3. 在室温下孵育30-60分钟
  4. 使用带有525/40 nm滤光片(AmCyan通道)的流式细胞仪或带有紫色滤光片组的荧光显微镜分析细胞

 

实验步骤

1.用膜联蛋白V-mFluor Violet 500制备和孵育细胞:

1.1用测试化合物处理细胞一段时间(对于用星形孢菌素处理过的Jurkat细胞,需要4-6小时)以细胞凋亡。

1.2离心细胞以获得1-5×105细胞/管。

1.3将细胞重悬于200 µL分析缓冲液(组分B)中。

1.4在细胞中加入2 µL Annexin V-mFluor Violet 500(组分A)。

1.5可选:向坏死的细胞中加入2 µL 100X碘化丙啶(组分C)。

1.6避光保存,于室温下孵育30至60分钟。

1.7在使用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,添加300 µL分析缓冲液(组分B)以增加体积。

1.8使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪(AmCyan通道)或带有紫色滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。

2.通过使用流式细胞仪进行分析:

2.1使用带有525/40 nm滤光片的流式细胞仪(AmCyan通道)定量膜联蛋白V-mFluor Violet 500结合。 将碘化丙啶加入细胞后,使用610/20 nm滤光片(PE-德克萨斯红通道)测量细胞活力。 注意:对贴壁细胞的膜联蛋白V结合流式细胞术分析未经过常规测试,因为在细胞分离或收获过程中可能会发生特定的膜损伤。 

3.通过使用荧光显微镜进行分析:

3.1孵育后用移液管吸移细胞悬液,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后用测定缓冲液重悬细胞。

3.2将细胞添加到载玻片盖玻片的载玻片上。注意:对于贴壁细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白V-mFluor Violet 500一起孵育后,用测定缓冲液冲洗1-2次,然后将测定缓冲液加到盖玻片上。将玻片上的盖玻片倒置并可视化细胞。与膜联蛋白V-mFluor Violet 500孵育后,还可以将细胞固定在2%甲醛中,并在显微镜下观察。

3.3使用紫罗兰滤光片组在荧光显微镜下用膜联蛋白V-mFluor Violet 500分析凋亡细胞。当碘化丙锭添加到细胞中时,使用TRITC通道测量细胞活力。质膜上的绿色染色表明膜联蛋白V-mFluor Violet 500与细胞表面的PS结合。

 

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