抗原修复技术技巧有哪些？

对于特定抗体，我应该使用哪种抗原修复方法

一些公司测试其抗体的免疫组织化学应用，并将在数据表中包含建议的 抗原修复方法（注意：一些建议的方法不是最佳的）。如果以上都没有给您明确的答案，则需要进行测试。

 

如何使用各种抗原修复方法对新抗体进行测试

最初，您可能想要测试 HIER 中的两种方法，例如 柠檬酸盐缓冲液 (pH 6)和 Tris-EDTA (pH 9)，以及 PIER 中的一种或两种方法，例如 蛋白酶 K和/或 胰蛋白酶。这应该会给您一个很好的机会获得特定抗体的最佳抗体。

 

我用各种抗原修复方法测试了我的抗体 ，但仍然没有结果

该抗体可能不适合福尔马林固定、石蜡包埋的组织（某些抗体仅适用于冰冻切片），或者该抗体有问题（过期或损坏），您可能需要改用其他抗体。

 

在热诱导表位修复 (HIER) 方法中，哪一种比较好

柠檬酸盐缓冲液（pH 6）法是常用的方法之一。一些研究表明 Tris-EDTA (pH 9)或 Tris-HCl (pH 10) 更佳。测试可能是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。

 

使用HIER进行预处理时需要考虑哪些关键因素

(1) 修复液温度应在95℃左右。

(2)孵育时间至少10分钟，一般20分钟左右。

(3) 修复液的pH值取决于您所使用的溶液。

 

在蛋白水解酶诱导表位修复 (PIER) 方法中，哪一种比较好

蛋白酶 K似乎是常用的一种。浓度、孵育时间和温度可能是需要考虑的更重要的因素。同样，测试是了解哪种抗体适合特定抗体的最佳方法。

 

使用PIER进行预处理时需要考虑哪些关键因素

(1) 酶的浓度通常为 0.05-0.1%，具体取决于组织和固定的类型。

(2)孵育时间可为5-30分钟，常用10-15分钟。

(3)孵化温度通常为37 ℃。

 

冰冻切片是否需要进行抗原修复：新鲜冰冻切片的免疫染色不需要进行抗原修复。因为抗原修复是破坏福尔马林固定形成的交联，将新鲜冰冻切片切片并用冰冷的丙酮固定5-10分钟。