Amplite 荧光细胞外一氧化氮（NO）活性测定试剂盒美国AAT Bioquest生产的用于检测细胞外一氧化氮活性的试剂盒，一氧化氮（NO）是涉及许多生理和病理过程的重要生物调节剂。改变的NO产生涉及各种免疫，心血管，神经变性和炎性疾病。作为自由基，NO被快速氧化，并且生物系统中存在相对低浓度的NO。AAT Bioquest提供一组NO检测试剂盒，用于监测活细胞中的NO。这种Amplite 细胞外荧光一氧化氮定量试剂盒提供了一种快速监测细胞外介质，组织和其他生物溶液和样品中NO水平的方法。与常用的DAF-2探针相比，DAW-J2在我们的试剂盒16365中用作细胞非特异性NO传感器.DAW-J2仅在细胞外环境中检测一氧化氮，具有高灵敏度和高选择性。非荧光DAW-J2探针与NO反应产生强烈红色荧光产物，可以使用酶/读数器在Ex / Em = 570 / 610nm下方便地监测。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的Amplite 荧光细胞外一氧化氮（NO）活性测定试剂盒。 

样本实验方案

概述

1.准备一氧化氮工作溶液（50 µL）
2.加入一氧化氮标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监控荧光强度

溶液配制

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 DAW-J2储备溶液（200X）：
将25 mL DMSO加入小瓶DAW-J2（组分A）中，制成200X储备溶液。

1.2 一氧化氮标准溶液（100 mM，未提供）：
我们使用DEA NONOate（Cayman Chemical，货号82100，CAS＃372965-00-9）作为一氧化氮标准。 一氧化氮的标准溶液在0.01N NaOH中的浓度为100 mM。

2.标准溶液

一氧化氮标准
将10 µL 100 mM NONOate标准溶液添加到990 uL分析缓冲液（组分B）中，以生成1 mM一氧化氮标准溶液（SD7）。然后进行1：2系列稀释，以得到系列稀释的一氧化氮标准液（SD6-SD1）。注意：稀释的NONOate标准溶液不稳定，应立即使用。

3.工作溶液

将25 µL DAW-J2 200X储备溶液加入5 mL的测定缓冲液（组分B）中并充分混合。 注意：此一氧化氮工作溶液足以进行100次测定。工作溶液不稳定，请及时使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1：黑色96孔微孔板中一氧化氮标准品和测试样品的布局。 SD =标准，BL =空白对照，TS =测试样品

表2：每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将一氧化氮标准液（SD），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是每孔50 µL。

2.将50 µL一氧化氮工作溶液添加至标准液，空白对照和测试样品的每个孔中，以使一氧化氮总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请在每个孔中使用25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.使用荧光酶标仪在激发= 570 nm，发射= 610 nm（截止= 590 nm）下监控荧光的增加。

参考文献

Fluorescent real-time quantitative measurements of intracellular peroxynitrite generation and inhibition
Authors: Zhen Luo, Qin Zhao, Jixiang Liu, Jinfang Liao, Ruogu Peng, Yunting Xi, Zhenjun Diwu
Journal: Analytical biochemistry (2017): 44–48

Inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) Is a Novel Negative Regulator of Hematopoietic Stem/Progenitor Cell Trafficking
Authors: Mateusz Adamiak, Ahmed Abdelbaset-Ismail, Joseph B Moore, J Zhao, Ahmed Abdel-Latif, Marcin Wysoczynski, Mariusz Z Ratajczak
Journal: Stem Cell Reviews and Reports (2016): 1–12