1.

封闭将封闭溶液添加至样品中。
孵育
去除封闭溶液

2.

一抗将一抗在适当的缓冲液中稀释，并添加至样品中。
孵育
在合适的缓冲液清洗两次，每次5分钟

3.

将两份PLA®探针，以1：5的比例在适当的缓冲液中稀释，并添加至样品中。
+37 °C孵育60分钟用1 x洗涤液A清洗2次，每次5分钟

4.

在H2O中以1：5的比例稀释连接储液。

在该溶液中以1:40比例稀释连接酶并将混合物添加至样品中。

+37 °C孵育30分钟用1 x洗涤液A清洗2次，每次2分钟

5.

在H2O中以1：5的比例稀释扩增储液。在该溶液中以1:80比例稀释聚合酶并将混合物添加至样品中。
+37 °C孵育100分钟用1 x洗涤液B清洗2次，每次10分钟用0.01x洗涤液B清洗1分钟

6.

成像准备使用含有DAPI的Duolink原位封固剂加载样品，等待15分钟，然后在荧光或共聚焦显微镜下进行分析。

注意：

• 使用没有盖玻片的开放液滴反应，并在加湿室中进行所有孵育。

• 请使用冷冻块将酶从冷冻室（-20ºC）中取出。

• 应在摇床上以最小体积（70毫升），并轻微摇晃进行清洗。