OptiVitro® T细胞无血清培养基介绍

OptiVitro® T细胞无血清培养基

✓ 无血清，无异种成分，无外源生长因子
✓ 支持T细胞的快速增殖和高密度培养，可用于大规模工艺流程
✓ 提供瓶装&袋装两种形式，便于生产规模扩大和商业化开发
✓ 适合于多种激活方法，可支持较长周期的稳定培养（＞14天）
✓ 自主研发，供货稳定，可提供定制化服务（配方优化等）
✓ 按照GMP标准生产和管理， 完成FDA DMF备案

应用：适合用于扩增人外周血单个核细胞（PBMC）中的 T 细胞，也适合于 T 细胞的重激活扩增培养。应用于T细胞疗法开发，如CAR-T、TCR-T、TIL等。

• 常见问题

  1. 组分：
  本产品每1L基础培养基配发8mL添加组分，添加组分不是ICSR或者血替，化学成分明确，可放心使用，必须配成全培养基后再使用；——可以提供成分说明及TSE/BSE的申明。
  2. T细胞激活方式：
  使用本产品，可根据说明书用抗体包板方式进行激活，也可购买商业抗体偶联磁珠进行激活，本产品同样支持磁珠激活。
  3. 活率：
  直接培养PBMC，D5后活率可达90%以上，从PBMC中分选出T细胞，则D3开始活率可达到90%以上，D7后活率均可达到95%以上；如果转导CAR，转导当天活率显著下降，为正常现象，继续培养活率会持续上升。
  4. 培养方式：
  使用本产品，比较推荐的培养方式是D0天激活，D3、D5、D7补充培养液将细胞密度调整到0.5-1×10^6cells/ml,D7后可选择2天或3天补一次液。
  5. T细胞扩增速度：
  T细胞的扩增在D3-D9速度较快，基本平稳，D9细胞扩增倍数一般可以达到200倍以上。D9后细胞扩增速度逐渐减缓，激活PBMC中的T细胞，最多可培养20天。
  6. 高密度培养：
  静置培养，密度可达5-6×10^6 cells/ml，摇瓶培养或其他震荡培养方式，密度可达10×10^6 cells/ml以上。
  7. CD4/CD8比例调节：
  使用本产品并且用磁珠激活，CD4比例较高，用抗体包板激活则CD8比例较高，可以通过改变激活方式、改变抗体包板浓度，调节CD4/CD8比例。
  8. T细胞亚型分群：
  Tn为初始T细胞，Tcm为中央记忆型T细胞，Tem为激活的Tcm，Tef为效应T细胞，分群比例随着细胞培养的时间而变化。不同客户对分群的要求可能不同，且不同激活方式、细胞因子的选择以及浓度，对分群影响很大，建议客户自行测试。
  9. T细胞转导：
  根据客户反馈测试数据，本产品阳性率可达到50%左右，但是不同客户使用的工艺不同，可能导致阳性率有变化。CAR慢病毒转导，可使用polybrene辅助转导，逆转录病毒转导可使用retronectin辅助转导，也有许多新型辅助因子可提高转导效率；采用离心转导的方式可提高转导效率。
  10. T细胞生物反应器培养：
  静置培养后D5-D7开始在反应器中培养，在达到目标体积之前，可以2-3天补液细胞密度调整到0.5-1×10^6 cells/ml，到达目标体积后可以采取部分灌流策略。