混合技术利用 Ni-NTA-Nanogold®_阐明亚蛋白结构

TFIIF是一种由两个保守亚基组成的通用转录因子，可与RNA聚合酶II （RNAPII）紧密结合，调节真核生物中信使RNA的合成。在此，结合了电子显微镜(EM) 和福斯特共振能量转移的混合方法(FRET) 被描述并用于定位 RNAPII-TFIIF 结构中第二个 TFIIF 亚基 (Tfg2) 的 C 末端。在第一阶段，附加到 Tfg2 C 末端的多聚组氨酸标签用镍-NTA 纳米金进行标记，并设计了七步单粒子 EM 方案以获得纳米金可在 3D 中访问的区域，表明 Tfg2 C -末端靠近RNAPII的夹子。接下来，选择与夹子相邻的RNAPII的Rpb2和Rpb4亚基的C端放置FRET卫星以实现纳米定位（NP）分析，从而提高定位精度，使得Tfg2 C发现-末端驻留在夹脊上，但在转录过程中可以移动到夹顶部。因为接受 EM 或 FRET 探针的标签可以很容易地引入到任何蛋白质亚基，这种混合方法通常适用于补充许多蛋白质复合物的纳米精度冷冻电镜研究。

混合技术利用 Ni-NTA-Nanogold®

阐明亚蛋白结构，
揭示关键基因转录机制

一种新的混合技术结合了 Ni-NTA-Nanogold® 标记、用于单颗粒分析的创新双离焦成像与冷冻电镜以及 FRET——在蛋白质结构绘图中实现纳米级精度。该小组使用这种强大的方法来阐明 DNA 转录机制关键组件的结构和功能，甚至揭示了这些部分在与 DNA 相互作用以物理启动转录时的运动。