德国Applichem提供支原体检测/清除/预防全系列产品,给您的细胞更多的安全与保护
为什么要重视细胞培养中的支原体污染?
您的实验结果是否能保证没有受到支原体污染的影响?
世界性难题!!!!Nature最新发布细胞研究领域中支原体污染问题严重性
Ewen Callaway. Contamination hits cell work. Nature, 29 July 2014; doi:10.1038/511518a
- 污染率高:在细胞研究领域,支原体是臭名昭著的污染源,二十世纪九十年代的支原体污染率是四分之一,而目前有仍然有超过十分之一的基因表达研究(许多曾发表在顶尖杂志上),表现出支原体污染的迹象。
- 影响日趋严重:虽然支原体污染并不一定意味着研究结果无效,但它会影响数百个基因的表达,并与细胞竞争营养阻碍细胞的生长。在目前测试的一组受污染的数据中(淋巴瘤细胞),已经鉴定出61个被支原体改变的基因,干扰了实验结果。这无疑是对时间,资源,经费极大的浪费;
- 难察觉:支原体污染完全是不留痕迹的,污染后的细胞生长速率一般并未发生显著的影响,无法用肉眼识别,除非采用专门的支原体检测方法检测;
- 污染源多:“草率操作”、细胞系流通的交叉污染、操作人员自身都是很重要的污染源;
- 难去除:支原体体积小,无细胞壁,约有1%的支原体可通过过滤器,且一般抗生素根本无法有效抑制或者去除支原体,另外,部分抗生素使用后会对细胞产生敏感效果,从而影响细胞的状态;
- 重视程度日益增加:顶尖杂志发表实验结果需验证支原体污染影响,在国际上,支原体污染检测已经日益成为细胞培养污染常规检测之一,有效规避细胞支原体污染。
支原体检测系列
传统的支原体检测方法包括支原体分离培养、支原体特异酶检测、DNA荧光染色检测以及PCR检测,除PCR检测方法以外,其他检测方法大多耗时长,要求检测人员具有丰富的经验,并且无法获得足够的灵敏度和特异性,对于一些稀有的支原体亚种无法有效检测。
Applichem设计的支原体检测试剂盒系列产品均是基于PCR方法,根据支原体16S rRNA保守序列设计引物,经过PCR反应扩增其16S rRNA片段,后采用琼脂糖电泳方法检测270bp条带。相对传统方法而言,具有强大优势:
a) 高灵敏度:敏感度高达100~1000CFU/ml,仅需要0.5 – 1.0 ml细胞上清样本即可检测;
b) 检测品种广泛:可检测常规品种,同时对于稀有亚种也能同效检测,如M. pneumoniae, Acholeplasma laidlawii, M. synoviae, M. pulmonis, M. bovis,几乎覆盖自然界80余个品种;
c) 快速:操作时间只需30分钟,全程5个小时内即可得到检测结果;
d)可靠:试剂盒中包括有阳性对照DNA,可保证实验结果的可重复性,减小因操作而带来的误差;
e) 安全性:无支原体培养过程,有效避免污染扩大;
产品型号 |
检测方法 |
适用仪器 |
试剂盒组分 |
PCR Mycoplasma Test Kit (货号A3744) |
普通PCR-电泳检测 |
普通PCR仪器 |
Reaction Mix |
qPCR Mycoplasma Test Kit (货号A9019) |
荧光定量PCR |
LightCycler®1.2, 1.5, 2.0, 480, Rotor-Gene™ 3000, 6000, ABI Prism® 7000, iCycler iQ®, iQ™5, Opticon 2, Chromo 4, MX300P®, MX4000®. |
Primer/Probe/Nucleotide Mix(RED) |
支原体清除系列
对于普通细胞系,遭受污染以后可以通过重新复苏,购买等途径更换样本,但是对于一些较难获得的样本,如干细胞,原代细胞,经过特殊处理的,或订购困难的细胞,一旦遭受支原体污染后,一定要马上进行处理。Applichem研发的支原体清除的Myco系列产品,可以直接整合到质膜上破坏支原体的完整性,从而有效的清除支原体污染,并可以针对不同程度,不同细胞样本进行针对性处理,处理过程简单,对细胞不会造成任何副作用。
名称 |
主要成分 |
适用样本 |
使用方法 |
Myco-3 (货号A5240) |
环丙沙星 |
贴壁细胞,可清除大多数支原体污染 |
100倍稀释加入培养基,每2-3天换液,连续处理14天 |
Myco-1 (货号A5222) |
泰妙菌素 |
贴壁细胞,配合能解决顽固型支原体或者使用Myco-3处理停用后又出现支原体污染的情况 |
100倍稀释加入培养基,与Myco-2配合使用,使用Myco-1处理4天后换Myco-2处理3天,如此重复2-3次即可 |
Myco-2 (货号A5233) |
二甲胺四环素 |
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Myco-4 (货号A8366) |
专利配方 |
贴壁细胞,悬浮细胞,病毒培养物 |
1瓶起始液和3瓶维持液配合使用 |
细胞污染预防系列
有效保护细胞的最好方式是对于细胞培养环境的预防,如工作环境定期消毒处理,严格实验操作,保证器皿无菌等各方面。在实验室中,CO2培养箱,C02培养箱水盘,水浴锅是非常重要的污染源。Applichem研发有系列污染预防系列产品专门针对这3大污染源,可有效预防真菌(及芽孢)、细菌、病毒等污染。使用方便,无腐蚀性,安全高效。
名称 |
适用环境 |
预防微生物 |
使用方法 |
Incubator-Clean |
CO2培养箱 工作台 |
支原体,真菌及芽孢、细菌、病毒(包括HIV,HBV等) |
即用型,喷雾处理完全湿润即可,无需转移出细胞,建议每2周处理一次 |
Incuwater-Clean |
C02培养箱水盘 |
支原体,真菌及芽孢、细菌、病毒(包括HIV,HBV等) |
100倍稀释加入水盘灭菌水中,建议每2-4周更换灭菌水 |
Aquabator-Clean |
水浴锅 |
细菌,真菌 |
100倍稀释加入水浴锅,建议每1-2周向水浴锅加入一次,每4-6周给水浴锅更换一次水 |
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