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230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

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230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

表面湿润张力试验用混合液（Wetting Tension Test Mixture）  ぬれ張力試験用混合液 （ ぬれ張力試験用）
表面湿润张力试验用混合液,用于“塑料薄膜及薄板表面湿润张力试验法”的试剂。
试验方法
用含有试剂的棉棒在试验材料（薄膜）上横向涂抹一次，必需注意涂上的混合液的量会极大影响试验的正确度。涂上试剂后2秒，判定液膜中央部分的状态。当液膜没有产生破裂时，判定为“可润湿”；产生破裂时，判定为“不可润湿”。
ぬれ張力試験用混合液  Wetting Tension Test Mixture  详细产品信息如下：
（ ぬれ張力試験用）
（和光纯药Wako中国）  另还常年供应以下表面张力的型号：
235-01791                  No.22.6                  50ml
238-01801                  No.25.4                  50ml
235-01811                  No.27.3                  50ml
232-01821                  No.30.0                  50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0  物体表面湿润张力测试液体No.34.0   230-01861  50ml
239-01831                  No.31.0                  50ml
236-01841                  No.32.0                  50ml
233-01851                  No.33.0                  50ml
237-01871                  No.35.0                  50ml
234-01881                  No.36.0                  50ml
231-01891                  No.37.0                  50ml
234-01901                  No.38.0                  50ml
231-01911                  No.39.0                  50ml
238-01921                  No.40.0                  50ml
235-01931                  No.41.0                  50ml
232-01941                  No.42.0                  50ml
239-01951                  No.43.0                  50ml
236-01961                  No.44.0                  50ml
239-01971                  No.45.0                  50ml
230-01981                  No.46.0                  50ml
237-01991                  No.48.0                  50ml
234-02001                  No.50.0                  50ml
231-02011                  No.52.0                  50ml
238-02021                  No.54.0                  50ml
235-02031                  No.56.0                  50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0  物体表面湿润张力测试液体No.34.0   230-01861  50ml
232-02041                  No.58.0                  50ml
239-02051                  No.59.0                  50ml
236-02061                  No.60.0                  50ml
233-02071                  No.61.0                  50ml
230-02081                  No.62.0                  50ml
237-02091                  No.63.0                  50ml
230-02101                  No.64.0                  50ml
237-02111                  No.65.0                  50ml
234-02121                  No.67.0                  50ml
231-02131                  No.70.0                  50ml
238-02141                  No.73.0                  50ml

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

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Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产　　地： 日本
商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tagTM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE（单一蛋白）
免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合 可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。 免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注：除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。
◆Phos-tag™ 的基本结构
◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥 水稻 棉花等）、动物（斑马鱼 灵长类等）、微生物(酵母 细菌 真菌等） 昆虫（果蝇 蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
◆相关产品

产品名称 用　　途
　Phos-tag™ Acrylamide 　分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
　SuperSep Phos-tag™ 　分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
　Phos-tag™ Biotin 　检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
　Phos-tag™ Agarose 　纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
　Phos-tag™ Mass
Analytical Kit		 　分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）
◆相关产品

产品编号 产品名称 规　　格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？
如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tagTM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。
备注：
1） Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-
       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？
收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tagTM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化？
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

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wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB检测
Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。
特点：

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例：

应用实例：使用Phos-tag™BTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）
产品描述
1、粉末；
2、在4度可保存至少一年；
3、检测磷酸化蛋白；
4、Phos-tagTM与生物素（Biotin）结合可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。
可用于免疫印迹实验，二维电泳。
产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linher)长度不一，但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高，推荐使用溶解性比较高的BTL-104。
wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答

Wako维生素E标准品套装

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Wako维生素E标准品套装

产品编号

产品名

产品中文名

包装

302-07111

Vitamin E Reference Standard

维生素E标准品套装

1set

试剂盒包含以下几种物质：:

1. d-α-生育酚  250mg x1瓶

2. d-β-生育酚 250mg x1瓶

3. d-γ-生育酚 250mg x1瓶

4. d-δ-生育酚 250mg x1瓶

5. 3,4-二氢-2,2,5,7,8-五甲基-2H-1-苯并吡喃-6-酚(PMC) 250mg x1瓶

注意: PMC 是用作HPLC分析维生素E的内标物质，不适用于GC分析。

.

分子式，分子量及产品纯度

物质名称

分子式

分子量

最大吸收波长

吸收系数

E1% 1cm

纯度

外观

d-α-生育酚

C29H50O2

430.71

292 nm

78.1

98.5+%

淡黄色、粘稠液体

d-β-生育酚

C28H48O2

416.69

296 nm

89.2

98.5+%

d-γ-生育酚

C28H48O2

416.69

297 nm

94.4

98.5+%

d-δ-生育酚

C27H46O2

402.66

297 nm

92.9

98.5+%

PMC

C14H20O2

220.31

292 nm

–

99.0+%

白色晶体

保存和稳定条件

每小瓶试剂都是用附有氧吸附剂的铝盖包装的。一旦打开了瓶子，请将此试剂于惰性气体环境中的冰箱中（2~10℃）保存。在此条件下，试剂可保持6个月的稳定性。

使用指南(溶液的制备)

1. 用天平称取每种试剂各50~100mg，质量确定到0.1mg。

2. 将这些试剂分别溶解在乙醇或己烷溶剂中，直至各维生素同系物的浓度为1mg/mL。再将这些溶液密封保存于5℃，可保存一个月。

3. 在使用前将原液稀释，即可得到每个同系物的标准溶液。

WAKO（和光纯药）维生素实验研究用系列试剂

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WAKO（和光纯药）维生素实验研究用系列试剂
维生素是人和动物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类微量有机物质，在人体生长、代谢、发育过程中发挥着重要的作用。维生素既不参与构成人体细胞，也不为人体提供能量。
维生素是个庞大的家族，现阶段所知的维生素就有几十种，大致可分为脂溶性和水溶性两大类。有些物质在化学结构上类似于某种维生素，经过简单的代谢反应即可转变成维生素，此类物质称为维生素原，例如 β-胡萝卜素能转变为维生素A；7-脱氢胆固醇可转变为维生素D3；但要经许多复杂代谢反应才能形成。尼克酸的色氨酸则不能称为维生素原。
上海金畔生物提供Wako（和光纯药）维生素系列产品，为您的实验研究提供有力的支持！
产品信息：

货号 英文品名 中文品名 CAS No. 含量 规格
011-16641 L(+)-Ascorbic Acid Standard L（+）-抗坏血酸标准品品 50-81-7 99.0+%(volumetric analysis)99.0+%(HPLC) 200mg
032-17991 beta-Carotene Standard β-胡萝卜素标准品 7235-40-7 95.0+% (HPLC) 10mg
035-17981 α-Carotene Standard α-胡萝卜素标准品品 7488-99-5 95.0+% (HPLC) 10mg
046-18992 Dibenzoyl Thiamin 二苯甲酰硫胺素 299-88-7 98.0+% (Titration) 25g
98.0+% (Absorptiometry)
048-18991 Dibenzoyl Thiamin 二苯甲酰硫胺素 299-88-7 98.0+% (Titration) 5g
98.0+% (Absorptiometry)
085-07111 Hydroxyethylthiamine Hydrochloride Standard 羟乙基盐酸硫胺素标准品 14707-32-5 99.0+% (HPLC) 200mg
99.0+% (Titration)
162-20051 Pyridoxamine Dihydrochloride Standard 盐酸吡哆胺标准品 524-36-7 98.0+%(Calculated on dried basis)(Titration) 200mg
98.0+% (HPLC)
164-17083 Pyrroloquinoline Quinone Disodium Salt 吡咯喹啉醌二钠 122628-50-6 99.0+% (HPLC) 50mg
165-20041 Pyridoxal Hydrochloride Standard 盐酸吡哆醛标准品 65-22-5 98.0+% (Titration) 200mg
98.0+% (HPLC)
167-19011 Phylloquinone Standard (mixture of isomers) 叶绿醌标准品（异构体混合物） 84-80-0 98.0-102.0% (Absorptiometry)99.0+% (E-+Z-)(HPLC) 200mg
168-17081 Pyrroloquinoline Quinone Disodium Salt 吡咯喹啉醌二钠 122628-50-6 99.0+% (HPLC) 10mg
168-20031 Pyridoxine Hydrochloride Standard 盐酸吡哆醇标准品 58-56-0 98.0+% (volumetric analysis)98.0+% (HPLC) 200mg
182-01611 Riboflavin Standard 核黄素标准品 83-88-5 98.0+% (Absorptiometry) 200mg
98.0+% (HPLC)
188-01331 Retinol Palmitate Standard Solution 维生素A棕榈酸酯标准品溶液 79-81-2 190,000 – 240.000 IU/g (as vitamin A) 20Capsules
198-12241 Sucralose Standard 三氯蔗糖标准品 56038-13-2 98.0+% (qNMR) 1g
201-00852 Thiamin Hydrochloride 盐酸硫胺素 1967-3-8 98.0+% (HPLC)(Calculated on dried basis) 25g
201-18483 (+/-)-α-Tocopherol Acetate （+/ – ）-α-生育酚醋酸酯 7695-91-2 96.0+% (HPLC) 5g
203-00851 Thiamin Hydrochloride 盐酸硫胺素 1967-3-8 98.0+% (HPLC)(Calculated on dried basis) 1g
203-18482 (+/-)-α-Tocopherol Acetate （+/ – ）-α-生育酚醋酸酯 7695-91-2 96.0+% (HPLC) 25g
205-00855 Thiamin Hydrochloride 盐酸硫胺素 1967-3-8 98.0+% (HPLC)(Calculated on dried basis) 500g
205-18481 (+/-)-α-Tocopherol Acetate （+/ – ）-α-生育酚醋酸酯 7695-91-2 96.0+% (HPLC) 100g
209-00853 Thiamin Hydrochloride 盐酸硫胺素 1967-3-8 98.0+% (HPLC)(Calculated on dried basis) 100g
210-01021 Ubiquinone-10 Standard 辅酶Q-10标准品 303-98-0 99.5+% (HPLC)(E-form + Z-form) 200mg
220-00363 Cholecalciferol 维生素D3 67-97-0 97.0+% (HPLC) 1g
223-00331 Vitamin A Palmitate, in Oil 维生素A棕榈酸酯，中石油 79-81-2 Vitamin A: (0.95 – 1.20)×106 IU/g 1g
224-00361 Cholecalciferol 维生素D3 67-97-0 97.0+% (HPLC) 100mg
227-00611 Vitachange, Activated Vitachange，激活 250g
229-00333 Vitamin A Palmitate, in Oil 维生素A棕榈酸酯，中石油 79-81-2 Vitamin A: (0.95 – 1.20)×106 IU/g 5g
302-07111 Vitamin E Reference Standard 维生素E参考标准品 1Set
303-06921 dl-Tocol DL-母育酚

 

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶

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wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

蛋白磷酸化研究的预制胶
新品速递图wako.jpg
SuperSep Phos-tag
SuperSep Phos-tag是研究蛋白磷酸化的方法，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。
◆SuperSep Phos-tag
blob.png
Phos-tag?是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phostag? Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的带条结果也很整齐。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。
分离后，胶可用于考马斯亮蓝染色，免疫印迹和质谱实验。
◆Phos-tag SDS-PAGE 的原理
blob.png
◆在HighWire Search 上搜索到的论文数
blob.png
◆运用
利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点
p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变，产生3种突变体（Ser8突变体：S8A，Thr138突变体：T138A，Ser8和Thr138双突变体：2A）。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag? SDS-PAGE和Western blotting 进行检测（检测抗体：p35抗体）。
blob.png
100 μM Phos-tag ? 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶
可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系！
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道5（条带M1）：p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化；
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道3（条带L2和L4）：在无激酶活性Cdk5的作用下，大约有一半p35蛋白在Thr138位点
发生磷酸化，同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。
– 泳道5 （条带M1）和泳道6（条带L3和L4）：Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点；
– 泳道5（条带M1）、泳道7（条带L1和L2）和泳道8（条带M2）：条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带；
条带M2是只有Ser8磷酸化的条带；条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。
※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带；
※ 条带L4是非磷酸化的p35。
【参考文献】
Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ? SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.
【结果提供】
理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永（Dr. T. Hosokawa）
首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市（Dr. S. Hisanaga）
检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段
blob.png
我们可以确定在片段中含有目的激酶！
① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1（1-290）结合蛋白
② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白
③ GST-Dnmt1（1-290）作为体外激酶实验的反应底物
④ Phos-tag  SDS-PAGE 用于Western blotting，确定迁移条带中每个片段的激酶活性
【参考文献】
The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,
【结果提供】
高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪（Dr. Y. Sugiyama）
香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇（Dr. I. Kameshita）
二维电泳中的应用：分析hnRNP K磷酸化异构体
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ? SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
blob.png
同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来
（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
? Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）
理化学研究所RCAI 小原收
◆备注
样品制备：
Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。
强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。
转膜前处理：
另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；
该步骤可提高蛋白的转膜效率。
●　分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
●　将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。
●　将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。
●　转膜操作*。
* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。
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◆质量控制
每一批SuperSep Phos-tag?，出厂前均根据其产品规格进行测试，以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白，以及他们的分离成都在正常参数内。
◆产品信息
用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,
83×100×3.9mm		 Mini-PROTEAN?
Tetra Cell
(Bio-Rad Laboratories, Inc.)		 5 块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,
83×100×3.9mm		 5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,
100×100×6.6mm		 XCell SureLock?
Mini-Cell
(Life Technologies, Inc.)
 		 5 块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,
100×100×6.6mm		 5 块
产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag?  (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块

wako高尔夫场农药混合标准液

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wako高尔夫场农药混合标准液

        2010年9月29日，日本环保局水、大气、土壤污染对策法第100929001号文件对《防治高尔夫场农药对水污染的临时使用准则》进行修订，增加了29种农药的限定值，修订17种农药的限定值和删除2种农药的限定值。随着这次修订，标准分析法要求根据水的排放同时分析多个组分。这次，我们推出了可同时检测这些组分的农药混合标准液。

农药混合标准液GF系列

多成分同时分析方法

分析仪器

目标组分数目

使用产品

方法1

  LC/MS/MS

43

农药混合标准液GF-1(LC/MS/MS)*1

GC/MS

6

农药混合标准液GF-1(GC/MS)

方法2

GC/MS

24

农药混合标准液GF-2（GC/MS）

方法3

GC

2

农药混合标准液GF-3(GC)

方法4

GC

4

农药混合标准液GF-4(GC)

方法5

GC

1

标准甲胺磷

方法6

LC

9

农药混合标准液GF-6(LC)*2

*1：方法1的目标组分，乙氧嘧磺隆因储存稳定性问题，不包含在农药混合标准液GF-1(LC/MS/MS)里。

*2：方法6的目标组分， 喹啉铜不包含在农药混合标准液GF-6(LC)里。

产品编号

产品名称

标准

规格

166-25211

农药混合标准液GF-1(LC/MS/MS)(各20μg/ml溶液)

农药残留测试用

1ml

161-25141

农药混合标准液GF-1 (GC/MS)(各20μg/ml丙酮溶液)

农药残留测试用

1ml

168-25151

农药混合标准液GF-2(GC/MS)(各20μg/ml丙酮溶液)

农药残留测试用

1ml

164-24911

农药混合标准液GF-3(GC)(各20μg/ml丙酮溶液)

农药残留测试用

1ml

161-24921

农药混合标准液GF-4(GC)(各20μg/ml丙酮溶液)

农药残留测试用

1ml

168-24931

农药混合标准液GF-6(LC)(各25μg/ml乙腈溶液)

农药残留测试用

1ml

相关产品

产品编号

产品名称

标准

规格

156-01214

喹啉铜标准品

农药残留测试用

100mg

139-11631

甲胺磷标准品

农药残留测试用

200mg

试剂仅用于实验研究为目的使用，不能用作于食品，制药，家庭用品。

WAKO过氧化氢特异性荧光探针

发表于由

WAKO过氧化氢特异性荧光探针

品牌： Wako(和光纯药)
货号： 028-17811
CAS号： 728912-55-8
供应商： 和光纯药株式会社
规格： 1mg
过氧化氢特异性荧光探针BES-H2O2-Ac / BES-H 2O2
• 比二氯荧光黄 (DCFH) 有更高的特异性
• 可动态监测活细胞内的过氧化氢
• BES-H2O2-Ac 可穿透细胞膜，无需打孔
• 极易溶于水，可制成水溶液使用
• 可用于荧光显微镜、流式细胞仪

BES-So-AM：使用举例

图1）是Jurkat T细胞在含33μM BES-So-AM的培养基中37°C培养1小时，使探针进入细胞，然后添加4mM丁酸（O2•-诱导剂），37°C培养1小时；图2）是Jurkat T细胞在含33μM BES-So-AM的培养基中37°C培养1小时，使探针进入细胞，然后不添加丁酸，37°C再培养1小时；图3）是Jurkat T细胞在含33μM BES-So-AM的培养基中37°C培养1小时，然后添加5mM的丁酸，继续培养一个小时。参考文献
1) Maeda, H. et al.: Angew. Chem. Int. Ed., 43, 239 (2004).
2) Maeda, H. et al.: Chem. Pharm. Bull., 49, 294 (2001).1. Features
•Much higher selectivity compared to conventionally-used DCFH probes•Responds specifically to hydrogen peroxide, enabling detection of intracellular hydrogen peroxide activity•BES-H2O2-Ac is cell membrane permeable•Superior water solubility allows use with aqueous solutions•Can be used in flow cytometry

2. Application

H2O2-produced stimulation No H2O2-produced stimulation
Fluorescent images
Phase-contrast images
Fluorescent images of Jurkat T cells with BES- H2O2 -Ac and the same-fi eld phase-contrast images
Jurkat T cells were cultured in a medium with 50μM BES-H2O2-Ac for 1 hour. Then, one group of them was cultured in a medium with 5 mM butyric acid (H2O2-produced stimulation), whereas the other in a medium without butyric acid (No H2O2– produced stimulation), each for 1 hour. (Courtesy: Professor Hatsuo Maeda, PhD., School of Pharmacy, Hyogo Univ. of Health Sciences)

 

3. References

  1. “Fluorescent probe for hydrogen peroxide based on a non-oxidative mechanism”, Maeda, H. et al.: Angew. Chem. Int. Ed., 43, 2389-91 (2004).
  2. “Hydrogen peroxide-induced deacetylation of acetyl resorufin as a novel indicator reaction for fluorometric detection of glucose using only glucose oxidase”, Maeda, H. et al.: Chem. Pharm. Bull., 49, 294-8 (2001).

4. Products List

< All products are for Cellbiology;   Keep at room temperature >

Cell Permeability Product Name Package Size Wako Catalog No.
Thiol/Selenol
selective probe
x
 BES-Thio
1 mg
025-15481
H2O2 Probes
o
<Detection of
cell-derived H2O2
 BES-H2O2-Ac
1 mg
028-17811
x
 BES-H2O2   (Cell-impermeant)
1 mg
021-16201
Superoxide
selective probe
o
<Detection of
cell-derived superoxide>
 BES-So-AM
1 mg
021-17801
x
 BES-So   (Cell-impermeant)
1 mg
028-16211

说明书下载：

http://www.wako-chem.co.jp/english/labchem/product/life/BES-H2O2/pdf/WPUb1_p15-7.pdf

WAKO定量分析的甜叶菊标准品

发表于由

WAKO定量分析的甜叶菊标准品

和光(WAKO)定量分析的甜叶菊标准品类STEVIA STANDARDS

环境

定量分析的甜叶菊标准品类
STEVIA STANDARDS

        甜叶菊是南美原产的菊科植物。甜叶菊含有甜菊苷、甜菊双糖甙等甜菊醇糖甙类。甜叶菊提取物被收录于第八版食品添加物法定文件，作为低卡路里天然甜调味品被广泛使用。同时，在第68次JECFA(WHO/FAO食品添加物专家委员会)中，正式决定甜叶菊提取物的规格，也决定了美国FDA的甜菊双糖甙规格。本公司产品是质量分析用高纯度标准品。还可用于更高精度的定量用。

产品编号

品名

包装

098-05681

Isosteviol Standard

1g

183-02361

Rebaudioside A Standard

1g

187-02401

Rebaudioside B Standard

100mg

193-15351

Stevioside Standard

1g

194-15401

Steviol Standard

100mg

193-15471

Steviolbioside Standard

100mg

＊ 本品只可用于实验、研究目的，不得用于家庭、医疗等其它用途。

wako阿尔茨海默病研究先关试剂

发表于由

wako阿尔茨海默病研究先关试剂

阿尔茨海默病研究（老年痴呆）

货号 名称 规格
8951516 β-Amyloid (1-40), Ultra Pure,TFA β淀粉样蛋白(1 – 40)，超纯，TFA 2.5mg
294-64701 Human/Rat?Beta Amyloid(40) ELISA?Kit Wako?II 人/大鼠β淀粉体（40)ELISA试剂盒 96T
8951516 β-Amyloid (1-40), Ultra Pure,TFA β淀粉样蛋白(1 – 40)，超纯，TFA 0.5mg
298-64601 Human?Beta Amyloid(1-40) ELISA?Kit Wako?II 人β淀粉体（1-40)ELISA试剂盒 96T
8953770 β-Amyloid (1-40), rat β淀粉样蛋白(1 – 40)，大鼠 2.5mg
8953770 β-Amyloid (1-40), rat β淀粉样蛋白(1 – 40)，大鼠 0.5mg
8953771 β-Amyloid Peptide (1-42), rat β淀粉样多肽(1 – 42)，大鼠 2.5mg
292-64501 Human/Rat Beta Amyloid(42) ELISA?Kit Wako, High Sensitive 人、大鼠β淀粉体（42)ELISA试剂盒，高灵敏度 96T
296-64401 Human Beta Amyloid(1-42) ELISA Kit Wako, High Sensitive 人β淀粉体（1-42)ELISA试剂盒，高灵敏度 96T
8953771 β-Amyloid Peptide (1-42), rat β淀粉样多肽(1 – 42)，大鼠 0.5mg
8952487 β-Amyloid (1-42), human β淀粉样蛋白(1 – 42)，人 2.5mg
151-01801 Osthole Standard 蛇床子素 20mg
8952487 β-Amyloid (1-42), human β淀粉样蛋白(1 – 42)，人 0.5mg
074-04961 Gomisin N Standard 五味子酯N标准品 10mg
077-04951 Gomisin A Standard 五味子醇甲标准品 10mg
192-10441 Schizandrin Standard 五味子素标准品 20mg
197-13551 Schizandrin  五味子素 20mg
334-00491 Amyloidβ-Protein (Human,37-43) antiserum 50ul
33-00221 Amyloidβ-Protein (Human,37-42) antiserum 50ul
336-00211 Amyloidβ-Protein (Human,34-40) antiserum 50ul
330-00111 Amyloidβ-Protein (Human,1-40) antiserum 50ul
330-00231 Amyloidβ-Protein (Human,1-16) antiserum 50ul
339-32171 Nma-Gly-Gly-Val-Val-Ile-Ala-Thr-Val-Lys(Dnp)-D-Arg-D-Arg-D-Arg-NH2 1mg
333-32191 (3,5-Difluorophenylacetyl)-Ala-Phg-OBut 5mg
333-43941 L-685,458 1mg
556-65811 β-secretase activity kit 100T
334-32121 MOCAC-SER-GLU-VAL-ASN-LEU-ASP-ALA-GLU-PHE-ARG-LYS(DNP)-ARG-A 1mg
339-43781 LYS-THR-GLU-GLU-ILE-SER-GLU-VAL-ASN-STA-VAL-ALA-GLU-PHE 1mg
337-44201 Amyloidβ-Protein（42-1） 0.1mg
332-44131 Amyloidβ-Protein（40-1） 0.1mg
337-43581 β-Sheet breaker peptide iAβ5 5mg
336-43671 Amyloidβ-Protein (Human,3-42) 0.5mg
334-43091 Amyloidβ-Protein (Human,25-35) 0.5mg
334-43591 Amyloidβ-Protein (Human,1-16) 0.5mg
333-43701 Amyloidβ-Protein (Human,1-43) 0.5mg
338-43491 Amyloidβ-Protein (Human,1-42) 0.5mg
336-43791 Amyloidβ-Protein (Human,1-40) [HCl Form] 0.5mg
330-43071 Amyloidβ-Protein (Human,1-40) 0.5mg
011-18961 Amyloid beta-Protein (1-42) (Hydrochloride) β淀粉样蛋白(1 – 40)，冻干粉 1mg
016-18771 Amyloid beta-Protein (1 – 42) β淀粉样蛋白(1 – 42) 0.5mg
014-18951 Amyloid beta-Protein (1-40) (Hydrochloride) β淀粉样蛋白(1 – 40)，冻干粉 1mg
019-18761 Amyloid beta-Protein (1 – 40) β淀粉样蛋白(1 – 40) 1mg
014-20281 Anti Phosphorylated alpha-Synuclein,Monoclonal Antibody 抗磷酸化α突触核蛋白单抗 50ul
299-57301 Phosphorylated Tau Immunohistostain Kit 磷酸化τ免疫组织染色试剂盒 100T
299-56701 Amyloid beta-Protein Immunohistostain Kit β淀粉样蛋白免疫组织染色试剂盒 50T

wako用于癌症研究的试剂

发表于由

wako用于癌症研究的试剂

和光提供有抗癌作用的成分产品。可以把它作为癌症的基础研究用试剂来使用。

这些试剂已通过纯度、滴定度及其他试验的检测，品质有保证（试验项目会因各产品而不同）。

烷基化化合物

根据烷基化作用，在DNA和蛋白质之间形成桥梁。这种结合抑制了DNA的复制。

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、分子量)

规格

包装

029-09352

1,4-Butanediol
Dimethanesulfonate 〔Busulfan〕

慢性骨髓性白血病

55-98-1
〔C6H14O6S2=

246.31〕

和光一级

25g

030-12953
034-12951

Cyclophosphamide

多发性骨髓瘤
恶性淋巴瘤

6055-19-2
〔C7H15Cl2N2O2P・H2O=

279.10〕

和光一级

1g
5g

047-29951
043-29953

Dacarbazine

恶性黑色素瘤
恶性淋巴瘤

4342-03-4
〔C6H10N6O=

182.18〕

药理研究

200mg
1g

090-05401
096-05403

Ifosfamide

小细胞肺癌
前列腺癌

3778-73-2
〔C7H15Cl2N2O2P=

261.09〕

药理研究

50mg
500mg

135-15251
131-15253

Melphalan

多发性骨髓瘤

148-82-3
〔C13H18Cl2N2O2=

305.20〕

药理研究

100mg
1g

142-08471
148-08473

Nimustine Hydrochloride

脑肿瘤
胃肠道癌

55661-38-6
〔C9H13ClN6O2・HCl=

309.15〕

药理研究

250mg
1g

161-22581
167-22583

Procarbazine Hydrochloride

恶性淋巴瘤

366-70-1
〔C12H19N3O・HCl=

257.76〕

药理研究

100mg
1g

铂络合物（Platinum complex）

DNA链内以及链之间形成铂-DNA架桥，抑制DNA的复制和转录。

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、分子量)

规格

包装

039-16041
035-16043

Carboplatin

头颈部癌
肺癌

41575-94-4
〔C6H12N2O4Pt=371.25〕

生物化学

25mg
250mg

033-20091
039-20093

Cisplatin

膀胱癌
头颈部癌

15663-27-1
〔PtCl2(NH3)2=300.05〕

药理研究

200mg
2g

156-02691
152-02693

Oxaliplatin

大肠癌

61825-94-3
〔C8H14N2O4Pt=397.29〕

药理研究

5mg
50mg

生物碱

通过抑制纺锤体的形成和微小管的聚集，来抑制细胞分裂。

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、分子量)

规格

包装

047-31281

Docetaxel

乳腺癌
非小细胞肺癌

114977-28-5
〔C43H53NO14=807.88〕

药理研究

5mg

169-18616
169-18611
165-18613
163-18614

Paclitaxel

卵巢癌
胃癌
乳腺癌
非小细胞肺癌

33069-62-4
〔C47H51NO14=853.91〕

生物化学

1mg
5mg
25mg
100mg

221-00751
227-00753

Vinblastine Sulfate

恶性淋巴瘤
滋养细胞疾病

143-67-9
〔C46H58N4O9・H2SO4=909.05〕

生物化学

10mg
50mg

229-01771
225-01773

Vincristine Sulfate

白血病
恶性淋巴瘤

2068-78-2
〔C46H56N4O10・H2SO4=923.04〕

药理研究

10mg
50mg

225-01631
221-01633

Vindesine Sulfate

肺癌
食道癌

59917-39-4
〔C43H55N5O7・H2SO4=852.00〕

药理研究

2mg
10mg

222-01641
228-01643

Vinorelbine Ditartrate

非小细胞肺癌
乳腺癌

125317-39-7
〔C45H54N4O8・2C4H6O6=1079.11〕

药理研究

10mg
50mg

合成激素类药

抑制与形成肿瘤有关的激素的作用。

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、分子量)

规格

包装

035-15161
031-15163

Chlormadinone Acetate

前列腺癌
前列腺增生症

302-22-7
〔C23H29ClO4=

404.93〕

生物化学

1g
5g

047-18863
041-18861

Dexamethasone

恶性淋巴瘤
乳腺癌

50-02-2
〔C22H29FO5=

392.47〕

生物化学

100mg
1g

055-05011
051-05013

Ethynylestradiol

前列腺癌
乳腺癌

57-63-6
〔C20H24O2=

296.41〕

生物化学

1g
5g

069-04851
065-04853

Flutamide

前列腺癌

13311-84-7
〔C11H11F3N2O3=

276.21〕

药理研究

2g
10g

138-09991
134-09993

Medroxyprogesterone
Acetate

乳腺癌
子宫癌

71-58-9
〔C24H34O4=

386.53〕

生物化学

1g
5g

132-09933
136-09931
134-09932

Methyltestosterone

乳腺癌

58-18-4
〔C20H30O2=

302.45〕

生物化学

1g
5g
25g

165-11491
161-11493

Prednisolone

恶性淋巴瘤
乳腺癌

50-24-8
〔C21H28O5=

360.44〕

生物化学

1g
5g

209-14361
205-14363
203-14364
207-14362

Tamoxifen Citrate

乳腺癌

54965-24-1
〔C26H29NO・C6H8O7=

563.64〕

生物化学

250mg
1g
5g
25g

200-16971
206-16973

Toremifene Citrate (mixture of isomers)

乳腺癌

89778-27-8
〔C26H28ClNO・C6H8O7=

598.08〕

药理研究

500mg
2g

代谢拮抗药

在体内转化成和代谢物质类似的活性物质，抑制代谢物质的吸收。主要对分裂期的细胞有特异性的作用。

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、分子量)

规格

包装

035-20051
031-20053

Carmofur

胃肠道癌
乳腺癌

61422-45-5
〔C11H16FN3O3=

257.26〕

药理研究

1g
5g

030-11951
034-11954
036-11953

Cytosine-1-β-D(+)-arabinofuranoside
〔Cytarabine〕

胃肠道癌
急性白血病

147-94-4
〔C9H13N3O5=

243.22〕

生物化学

100mg
500mg
1g

042-29901
048-29903

Doxifluridine

胃肠道癌
乳腺癌

3094-09-5
〔C9H11FN2O5=

246.19〕

药理研究

100mg
1g

068-01401
064-01403
066-01402

5-Fluorouracil

乳腺癌
子宫癌
胃肠道癌

51-21-8
〔C4H3FN2O2=

130.08〕

和光特级

1g
5g
25g

077-05671
073-05673

Gemcitabine Hydrochloride

非小细胞癌
胰腺癌

122111-03-9
〔C9H11F2N3O4・HCl=299.66 〕

药理研究

10mg
50mg

130-07991
136-07993

6-Mercaptopurine
Monohydrate

急性白血病
慢性骨髓性白血病

6112-76-1
〔C5H4N4S・H2O=170.19〕

生物化学

1g
5g

139-13571
135-13573

Methotrexate

滋养细胞疾病
急性白血病

59-05-2
〔C20H22N8O5=

454.44〕

生物化学

100mg
1g

206-10351
202-10353

1-(2-Tetrahydrofuryl)
-5-fluorouracil
〔Tegafur〕

胃肠道癌
乳腺癌

17902-23-7
〔C8H9FN2O3=

200.17〕

生物化学

1g
5g

抗生素

抑制核酸合成，抑制细胞分裂。

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、分子量)

规格

包装

018-21264
014-21261
010-21263

Actinomycin D

肾母细胞瘤
绒毛上皮癌

–
〔C62H86N12O16=

1255.42〕

和光一级

1mg
5mg
25mg

028-07801

Bleomycin Hydrochloride

皮肤癌
头颈部癌

67763-87-5
〔Unspecified〕

生物化学

10mg

049-31241
045-31243

Daunorubicin Hydrochloride

急性白血病

23541-50-6
〔C27H29NO10・HCl=563.98〕

药理研究

10mg
50mg

040-21521
046-21523

Doxorubicin Hydrochloride
〔Adriamycin Hydrochloride〕

胃肠道癌
恶性淋巴瘤

25316-40-9
〔C27H29NO11・HCl=579.98〕

生物化学

10mg
50mg

058-07561
054-07563

Epirubicin Hydrochloride

恶性淋巴瘤
胃肠道癌

56390-09-1
〔C27H29NO11・HCl=579.98〕

药理研究

1mg
5mg

134-07911

Mitomycin C

胃肠道癌
子宫癌

50-07-7
〔C15H18N4O5=

334.33〕

生物化学

10mg

133-15931

1mg/ml Mitomycin C Solution

细胞培养

1ml

160-14741

Pirarubicin

乳腺癌
头颈部癌

72496-41-4
〔C32H37NO12=

627.65〕

生物化学

25mg

184-02531
180-02533
188-02534

Rapamycin (mixture of isomers)

卡波西肉瘤

53123-88-9
〔C51H79NO13=

914.17〕

细胞生物学

1mg
10mg
50mg

其他

产品编号

品名

主要对象

CAS号
(分子式、

分子量)

规格

包装

186-01114
182-01116
182-01111
188-01113

all-trans-Retinoic Acid
〔Tretinoin〕

急性骨髓性白血病

302-79-4
〔C20H28O2=

300.44〕

生物化学

50mg
100mg
250mg
1g

056-07741
052-07743

Etoposide

小细胞肺癌
恶性淋巴瘤

33419-42-0
〔C29H32O13=

588.56 〕

药理研究

25mg
100mg

刊登的试剂只使用于试验·研究目的，不能作为“医药品”、“食品”、“家庭用品”等使用。

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

发表于由

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB检测
Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。
特点：

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例：

应用实例：使用Phos-tag™BTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）
产品描述
1、粉末；
2、在4度可保存至少一年；
3、检测磷酸化蛋白；
4、Phos-tagTM与生物素（Biotin）结合可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。
可用于免疫印迹实验，二维电泳。
产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linher)长度不一，但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高，推荐使用溶解性比较高的BTL-104。
wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于由

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产　　地： 日本
商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tagTM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE（单一蛋白）
免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合 可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。 免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注：除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。
◆Phos-tag™ 的基本结构
◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥 水稻 棉花等）、动物（斑马鱼 灵长类等）、微生物(酵母 细菌 真菌等） 昆虫（果蝇 蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
◆相关产品

产品名称 用　　途
　Phos-tag™ Acrylamide 　分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
　SuperSep Phos-tag™ 　分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
　Phos-tag™ Biotin 　检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
　Phos-tag™ Agarose 　纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
　Phos-tag™ Mass
Analytical Kit		 　分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）
◆相关产品

产品编号 产品名称 规　　格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？
如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tagTM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。
备注：
1） Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-
       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？
收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tagTM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化？
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

wako水分析用标准品

发表于由

wako水分析用标准品

货号

名称

规格

081-08171

Heptaethylene Glycol Monododecyl Ether Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 十二烷基七聚乙二醇醚

1mLx5A

086-07261

Halogenated Acetic Acid Mixture Standard Solution (each 1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 卤化醋酸标准溶液

2mLx10A

072-03421

Geosmin Standard Solution (0.1mg/ml Methanol Solution) 土臭素标准溶液

1ml

077-01911

Geosmin Standard 土臭素标准品

20mg

063-04511

Formaldehyde Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 甲醛标准溶液

1mLx5A

069-04471

FLUOROBENZENE STANDARD SOLUTION (1MG/ML METHANOL SOLUTION) 氟苯标准溶液

1mLx5A

042-29021

1,4-Dioxane-d8 Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,4-二氧六环-d8标准溶液

1mLx5A

049-28791

1,4-Dioxane Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 1,4-二氧六环标准溶液

2mLx10A

041-23991

Dichloromethane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

044-23981

Dichloromethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

046-25641

p-Dichlorobenzene Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 对二氯苯标准溶液

2mLx5A

048-24481

Dichloroacetonitrile Standard Solution (1mg/ml Acetonitrile Solution) 氰化二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

041-24471

Dichloroacetic Acid Standard Solution (1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 二氯乙酸标准溶液

2mLx10A

046-18791

1,1-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,1-二氯乙烯标准溶液

10ml

047-22011

1,1-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 1,1-二氯乙烯标准溶液

2mLx10A

048-24361

1,2-Dichloropropane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1,2-二氯丙烷标准溶液

2mLx10A

043-18941

1,2-Dichloroethane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 1，2-二氯乙烷标准溶液

10ml

040-22001

1,2-Dichloroethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 1，2-二氯乙烷标准溶液

2mLx10A

043-22591

trans-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 反-1，2-二氯乙烯标准溶液

2mLx10A

047-18961

trans-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 反-1，2-二氯乙烯标准溶液

10ml

043-18963

trans-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 反-1，2-二氯乙烯标准溶液

2mLx10A

049-25631

cis-1,2-Dichloroethylene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 顺-1，2-二氯乙烯标准溶液

2mLx5A

043-24551

Dibromochloromethane Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 二溴氯甲烷标准溶液

2mLx10

039-13861

Dibromochloromethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 二溴氯甲烷标准溶液

2mLx10

037-18781

p-Cresol Standard

1g

033-18761

o-Cresol Standard

1g

030-18771

m-Cresol Standard

1g

032-13851

Chloropicrin Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 氯化苦标准溶液

2mLx10A

039-15681

Chloroform Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 氯仿标准溶液

2mLx10A

036-13871

Chloroform Standard Solution(1mg/ml Hexane Solution) 氯仿标准溶液

2mLx10A

034-19031

1-Chlorodecane Standard Solution (1mg/ml Hexane Soluiton) 1-氯癸烷标准溶液

1mLx5A

038-16871

Chloroacetic Acid Standard Solution(1ml/mg t-Butyl Methyl Ether Solution) 氯乙酸标准溶液

2mLx10A

030-19251

5 Chlorinated Phenols Mixture Standard Solution (each 1mg/ml in Acetone Solution) 5钟氯化酚混合物标准溶液

1mLx5A

035-19321

3 Chlorinated Acetic Acids Mixutre Standard Solution (each 1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 3种氯化醋酸混合物标准溶液

1mLx5A

030-19631

3 Chlorinated Acetic Acid Methyl Esters Mixture Standard Solution (each 1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 3种氯化醋酸甲酯混合物标准溶液

2mLx5A

036-15711

Chloral Hydrate Standard Solution (1mg/ml t-Butyl Methyl Ether Solution) 水合氯醛标准溶液

2mLx10A

023-15301

t-Butyl Methyl Ether Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 甲基异丁基醚标准溶液

2mLx5A

020-12251

Bromoform Standard Solution(1mg/ml Methanol Solution) 三溴甲烷标准溶液

2mLx10A

025-10241

Bromoform Standard Solution(1mg/ml Hexane Solution) 三溴甲烷标准溶液

2mLx10A

029-15021

p-Bromofluorobenzene-Fluorobenzene Mixture Standard Solution (each 1mg/ml Methanol Solution) 对溴氟苯-氟苯混合物标准溶液

1mLx5A

021-12041

p-Bromofluorobenzene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 对溴氟苯

2mLx10A

027-12261

Bromodichloromethane Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 溴二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

022-10251

Bromodichloromethane Standard Solution (1mg/ml Hexane Solution) 溴二氯甲烷标准溶液

2mLx10A

024-13251

Bromoacetic Acid Standard Solution 溴乙酸标准溶液

2mLx10A

024-12031

Benzene Standard Solution (1mg/ml Methanol Solution) 苯标准溶液

2mLx10A

013-20131

Anionic Surfactants Mixture Standard Solution (each 1mg/ml Methanol Solution) 阴离子表面活性剂混合物标准溶液

1mLx5A

011-17241

Ammonium Nitrogen Standard Solution (NH4+ 1,000) 氨氮标准溶液

50ml

013-19881

Acenaphthene-d10 Standard Solution (1mg/ml in Acetone Solution) 苊-d10标准溶液

1mLx5A

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶

发表于由

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

蛋白磷酸化研究的预制胶
新品速递图wako.jpg
SuperSep Phos-tag
SuperSep Phos-tag是研究蛋白磷酸化的方法，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。
◆SuperSep Phos-tag
blob.png
Phos-tag?是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phostag? Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的带条结果也很整齐。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。
分离后，胶可用于考马斯亮蓝染色，免疫印迹和质谱实验。
◆Phos-tag SDS-PAGE 的原理
blob.png
◆在HighWire Search 上搜索到的论文数
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◆运用
利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点
p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变，产生3种突变体（Ser8突变体：S8A，Thr138突变体：T138A，Ser8和Thr138双突变体：2A）。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag? SDS-PAGE和Western blotting 进行检测（检测抗体：p35抗体）。
blob.png
100 μM Phos-tag ? 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶
可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系！
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道5（条带M1）：p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化；
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道3（条带L2和L4）：在无激酶活性Cdk5的作用下，大约有一半p35蛋白在Thr138位点
发生磷酸化，同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。
– 泳道5 （条带M1）和泳道6（条带L3和L4）：Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点；
– 泳道5（条带M1）、泳道7（条带L1和L2）和泳道8（条带M2）：条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带；
条带M2是只有Ser8磷酸化的条带；条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。
※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带；
※ 条带L4是非磷酸化的p35。
【参考文献】
Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ? SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.
【结果提供】
理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永（Dr. T. Hosokawa）
首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市（Dr. S. Hisanaga）
检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段
blob.png
我们可以确定在片段中含有目的激酶！
① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1（1-290）结合蛋白
② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白
③ GST-Dnmt1（1-290）作为体外激酶实验的反应底物
④ Phos-tag  SDS-PAGE 用于Western blotting，确定迁移条带中每个片段的激酶活性
【参考文献】
The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,
【结果提供】
高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪（Dr. Y. Sugiyama）
香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇（Dr. I. Kameshita）
二维电泳中的应用：分析hnRNP K磷酸化异构体
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ? SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
blob.png
同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来
（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
? Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）
理化学研究所RCAI 小原收
◆备注
样品制备：
Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。
强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。
转膜前处理：
另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；
该步骤可提高蛋白的转膜效率。
●　分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
●　将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。
●　将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。
●　转膜操作*。
* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。
blob.png
◆质量控制
每一批SuperSep Phos-tag?，出厂前均根据其产品规格进行测试，以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白，以及他们的分离成都在正常参数内。
◆产品信息
用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,
83×100×3.9mm		 Mini-PROTEAN?
Tetra Cell
(Bio-Rad Laboratories, Inc.)		 5 块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,
83×100×3.9mm		 5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,
100×100×6.6mm		 XCell SureLock?
Mini-Cell
(Life Technologies, Inc.)
 		 5 块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,
100×100×6.6mm		 5 块
产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag?  (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块