Thermo Scientific T4 DNA连接酶-赛默飞世尔科技Thermofisher

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    • 供应商:

      赛默飞世尔科技

    • 英文名:

      T4 DNA Ligase (5 U/µL)

    Thermo Scientific T4 DNA连接酶-价格-厂家-供应商-赛默飞世尔科技
    T4 DNA Ligase催化双链DNA或RNA中毗邻的5′-磷酸基团和3′-羟基末端之间形成磷酸二酯键。酶还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口,连接DNA的粘性和平末端,但是该酶对单链核酸无酶活性。

    T4 DNA Ligase需要辅因子ATP。
     

    特点
    • 快速–室温下10分钟内完成粘末端的连接反应。
    • 该酶在Thermo Scientific限制性内切酶、PCR和RT缓冲液(添加ATP)中有活性。
    • 配套提供聚乙二醇溶液,以高效进行平末端连接。

     

    应用
    • 克隆酶切产生的DNA片段。
    • 克隆PCR产物。
    • 连接双链寡聚核苷酸街头或连接物。
    • 定点诱变。
    • 扩增片段长度多态性 (AFLP)。
    • 连接酶介导的 RNA 检测。
    • 双链DNA,RNA 或 DNA/RNA 复合体中缺口的修复。
    • 线性DNA自身环化。

     

    浓度
    1 Weiss u/µl = 200 CEU*/µl
    5 Weiss u/µl = 1000 CEU*/µl
    30 Weiss u/µl = 6000 CEU*/µl
    * 一个粘性末端连接单位的是指在16°C 、30分钟内50%连接HindIII酶切的lamda DNA产物所需要的酶的量。

     

    来源
    含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌。

     

    分子量
    55.3 kDa,单体。

     

    活性单位定义
    1个活性单位是指在ATP-PPi交换反应中,37°C、20分钟内将1nmol [32PPi]转换为Norit可吸收形式所需的酶量。1个Weiss单位相当于约200个粘性末端连接单位。

    酶活性分析混合物:66 mM Tris-HCl (pH 7.6), 6.6 mM MgCl2, 0.066 mM ATP, 10 mM DTT, 3.3 micro Mol [32PPi]

     

    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 1 mM DTT, 50 mM KCl, 0.1 mM EDTA和50% (v/v)甘油。

     

    10X T4 DNA Ligase 缓冲液(#B69)
    400 mM Tris-HCl, 100 mM MgCl2, 100 mM DTT, 5 mM ATP (pH 7.8, 25°C)。

     

    质量控制
    相关测试表明无内切和外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。 功能检测:粘性末端或平末端DNA的连接能力。

     

    抑制与失活
    • 抑制剂:当反应体系中NaCl或KCl的浓度超过200��mM时,可强烈抑制T4 DNA Ligase活性。
    • 失活:65°C加热10分钟或者70°C加热5分钟。

     

    备注

    • 聚乙二醇(PEG) 极大地增加平末端连接效率 (5) 。反应体系中的PEG 4000的建议浓度为5% (w/v)。
    • T4 DNA Ligase与DNA结合会改变条带的琼脂糖凝胶电泳迁移率。为避免此现象,电泳前需处理样本或分子量标准。样本处理方法如下:样本或分子量标准与Fermentas公司6X DNA Loading Dye & SDS溶液(#R1151)混合;70°C加热5分钟或65°C加热10分钟后冰浴保存。
    • 转化时,连接产物的体积不能超过感受态细胞体积的10%。
    • 电转化之前,先用氯仿抽提方法除去连接混合物中的T4 DNA Ligase。然后经乙醇沉淀纯化抽提产物。
    订购信息:
    货号 产品名称 规格
    EL0014 T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) 200 U
    EL0011 T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) 1,000 U
    EL0012 T4 DNA Ligase (5 Weiss U/µL) 5 x 1,000 U
    EL0013 T4 DNA Ligase, HC (30 U/µL) 5000 U
    EL0016 T4 DNA Ligase, LC (1 U/µL) 2×500 U

    了解更多信息,欢迎访问www.thermofisher.com/order/catalog/product/EL0011。

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